无菌生产工艺验证

无菌生产工艺验证的

主要内容与方法1

内容前言-药品的风险无菌生产工艺验证原则与申报资料要求无菌生产工艺验证的内容与方法无菌生产工艺的再验证小结一、前言药品的风险取决于其给药途径1类–注射剂（静脉，肌内，皮内，皮下，脊椎腔，动脉内…）2类–口服制剂3类–局部给药手术、烧伤及严重创伤眼部给药耳、鼻及呼吸道吸入阴道、尿道给药直肠给药4类–含动物组织的口服制剂5类–兼用途径注射剂的风险风险1-微生物污染

风险2-热原的污染风险3-不溶性微粒风险4-纯度

其他风险：安全性（组织的刺激性，毒性发应）渗透压pH注射剂风险控制手段微生物污染风险–注射剂必须是无菌热原污染–控制限度不溶性微粒–控制限度纯度–原料工艺其他风险控制手段：安全性临床实验等渗，等张，pH调节无菌药品的制造工艺类别最终灭菌工艺先将药品的各个部件（产品，容器和密封件）在符合要求的环境下组成最终的包装形式，最后让产品在其最终容器中进行灭菌处理（通常使用热力学灭菌或辐射灭菌）。无菌生产工艺药品的各个部件（产品，容器和密封件）分别经过灭菌处理，再在高洁净度的环境中组装最终产品，但产品装入其最终容器后不再进行灭菌处理。如何制造出高质量的无菌药品？对生产工艺的深刻理解识别、评估各工艺步骤对无菌性，热原，微粒等质量因素及其影响程度在工艺过程中采取有效控制手段对这些手段的有效性进行验证遵循相关法规的要求二、无菌生产工艺验证原则与申报资料要求无菌生产工艺验证原则以无菌保证为核心，在充分评估工艺各步骤微生物污染风险的基础上，利用现有的科学技术，对风险控制手段的有效性进行确认。无菌冻干粉针剂生产工艺流程配料原料，辅料，配料器具，环境，人员操作容器，WFI，配液器具，环境，操作胶塞，过滤器，灌装部件，清洁工具，灭菌釜，清洁及灭菌过程西林瓶，WFI，洗瓶机，干热灭菌设备气体，容器管道过滤器及安装操作，过滤前溶液含菌量环境，人员操作，转移冻干机密闭性压盖前储存时间，转移，胶塞密闭性，压盖后的密闭性无菌工艺艺无菌性性的保证证因素水原料药辅料气体容器/密密封件设施容器、设设备的清清洗灭菌菌配料、配配液、过过滤、灌灌装全过过程人员环境及培培养基灌灌装无菌试验验无菌包装装产品

生产过程原材料遵循的法法规要求求中国GMP有关无菌菌生产工工艺的有有关规定定以及洁洁净室悬悬浮粒子子、沉降降菌和浮浮游菌检检测的国国家标准准《药品生生产质量量管理规规范实施施指南》》中有关关无菌生生产的指指导原则则《药品生生产验证证指南》》FDA《《无菌生产产工艺指指南》FDA《《工艺验证证一般原原则》《《新药申申报资料料对灭菌菌工艺验验证的要要求》欧盟GMP附录1《无菌菌药品生产》》美国FDA要求的新药申申报资料1.适应症2.药学和毒理学学研究3.化合物研究4.生产工艺5.标准和控制6.微生物学研究究7.现场检查8.样品测试9.动物试验10.临床研究11.生物利用FDA新药申报资料料对无菌药品工艺艺验证的要求求原则：只有当当药品的检验验方法、生产产设施、工艺艺流程、包装装等能确保药药品的性质、、含量、质量量和纯度时，，新药申请才才会被批准资料要求：无无菌药品的工工艺验证必须须包含在申报报资料中两级责任制：：CDER负责资料的审审核地方药监负责责现场核查目的1：申报报资料的真实实性目的2：GMP符合性检查FDA新药申报资料料对无菌药品工艺艺验证具体内内容要求（1）A.厂房和设施布局图，包括括洁区划分设备分布图B.总体生产流程程介绍产品过滤溶液储存时间间关键操作C.容器、密封部部件、设备和和器具的灭菌菌去热原过程程分别灭菌溶液液的工艺过程程完整的批生产产记录FDA新药申报资料料对无菌药品工艺艺验证具体内内容要求（2）C.培养基灌装的的程序和标准准灌装房间密封系统类型型和尺寸每个容器灌装装体积培养基类型灌装数量培养数量阳性数量培养条件灌装日期挑战条件叙述述环境监测产品正常工艺艺和培养基灌灌装工艺的工工艺参数FDA新药申报资料料对无菌药品工艺艺验证具体内内容要求（3）E.培养基灌装失失败时的措施施F.环境监测应用的微生物物方法监测酵母菌、、霉菌和厌氧氧菌的方法和和频率超标时的措施施G.密封封系系统统完完整整性性H.无菌菌检检查查方方法法和和放放行行标标准准I.内毒毒素素检检查查方方法法J.有关关上上述述所所有有内内容容的的文文件件列列表表三、无菌菌生产工工艺验证证的具体体内容和和方法厂房和设设施（布布局、空空气净化化系统包包括HEPA，WFI系统）器具、容容器的灭灭菌除热热原过程程灌装部件件、胶塞塞的灭菌菌过程洗瓶、干干热去热热原过程程配液灌、、储液罐罐及管道道、冻干干机灭菌菌过程过滤除菌菌过程灌装过程程（环境境、人员员监测））容器密闭闭性综合验证证：培养养基灌装装试验（（工艺模模拟实验验）实验室控控制（微微生物测测试标准准方法、、无菌检检查）3.1原原辅料料的控制制无菌原料料药其本身的的生产工工艺应按按无菌生生产工艺艺验证原原则进行行包装和运运输应是是考察重重点非无菌原原料或辅辅料尽可能降降低微生生物负荷荷-<50CFU/g生产的洁洁净环境境设备与其其他物料料及人员员生产用水水非无菌原原料或辅辅料关键键控制点点精烘包阶阶段环境境至少十十万级以以上人员着装装、人流流物流控控制，环环境清洁洁规程设备清洁洁规程，，设定内内控限度度预先采取取高温或或过滤是是降低微微生物污污染的有有效方法法生产用水水需要达达到纯化化水要求求，并控控制内毒毒素对除菌、、灭菌或或去内毒毒素步骤骤需评估估对产品品理化性性能的影影响3.2生生产环环境验证证和控制制范围包包含所所有工工艺步步骤遵守相相关的的GMP规范验证时时考察察静态态和动动态时时的环环境质质量生产时时实行行动态态监测测环境验验证的的范围围空气净净化系系统的的验证证（温温湿度度，压压差，，空气气流向向，风风速，，高效效过滤滤器泄泄漏测测试））环境性性能测测试（（静态态＋动动态））悬浮粒粒子和和恢复速速率测测试微生物物测试试：空空气浮浮游菌菌，沉沉降菌菌，表表面微微生物物日常监监控为什么么环境境监测测是必必不可可少的的？在无菌菌工艺艺中，，产品品、容容器和和密封封件分分别经经过灭灭菌后后再进进行灌灌封。。由于于产品品装入入最终终容器器后不不再作作进一一步灭灭菌处处理，，容器器在极极高洁洁净环环境下下进行行灌封封是至至关重重要的的。FDA《《无菌菌生生产产工工艺艺指指南南》》第第五五页页制订订环环境境监监控控方方案案的的原原则则明确确监监控控的的关关键键控控制制点点给产产品品构构成成最最大大风风险险的的位位置置，，如如产产品品暴暴露露位位置置、、直直接接接接触触表表面面人员员科学学建建立立控控制制标标准准和和方方案案标准准应应满满足足无无菌菌生生产产微微生生物物控控制制要要求求，，并并结结合合取取样样点点位位置置和和生生产产操操作作的的相相互互关关系系建立警警戒和和纠偏偏标准准进行数数据分分析全面监监控、、动态态监控控定期的的环境境再验验证无菌灌灌装区区环境境监控控频率率洁净室测试项目监测频率无菌灌装间产品转移间灭菌釜卸载间更衣间空气悬浮粒子空气浮游菌表面微生物沉降菌操作人员每批一次或无生产时每周一次产品转移间清洁间物流缓冲间更衣间空气悬浮粒子空气浮游菌表面微生物每周一次物料准准备区区环境境监控控频率率洁净室测试项目监测频率配液间压盖间空气悬浮粒子*空气浮游菌表面微生物沉降菌每周一次（*每月一次）更衣间清洁/灭菌间空气悬浮粒子*空气浮游菌表面微生物每周一次（*每月一次）其他C级区房间空气悬浮粒子空气浮游菌表面微生物每月一次辅助区区环境境监测测频率率洁净室测试项目监测频率辅助区所有房间空气悬浮粒子空气浮游菌表面微生物每三个月一次微生物物检测测方法法的特特点空气浮浮游菌菌定量、、准确确、取取样量量大，，但易易干扰扰气流流沉降菌菌取样时时间长长，不不干扰扰气流流，但但非定定量、、检出出率低低接触碟碟光滑表表面，，方便便，但但需特特殊的的培养养碟棉签法法不规则则表面面，操操作稍稍复杂杂监测的的实施施在生产产过程程中，，无菌菌灌装装线上上沉降降碟的的放置置应在在所有有操作作开始始前完完成空气浮浮游菌菌的测测试应应根据据生产产情况况开空空气取取样仪仪灌装线线上的的表面面微生生物测测试应应在灌灌装结结束后后进行行监测人人员根根据生生产和和人员员操作作的情情况，，可随随时要要求进进行操操作人人员手手套的的微生生物测测试，，操作作人员员在测测试前前不应应喷洒洒无菌菌酒精精，在在测试试后应应更换换手套套。对对于无无菌服服的微微生物物测试试一般般在操操作人人员退退出B级区之之前进进行。。所有的的样品品在测测试后后都应应装入入灭菌菌袋中中适当当包裹裹，以以避免免样品品在转转移途途中受受到污污染。。人员控控制无菌服服、头头套、、眼罩罩、人人员操操作行行为无菌灌灌装人人数控控制人员资资格认认定体检，，操作作培训训，着着装培培训，，着装装测试试着装测测试方方法年度资资格再再确认认制度度眼罩也也为取取样点点环境监监测数数据的的分析析细菌鉴鉴定确定污污染源源，为为制订订整改改措施施提供供帮助助提供放放行/报废废依据据用于培培养基基灌装装用于消消毒剂剂的效效率测测试3.3过过滤系系统的的验证证无菌过过滤是是截留留微生生物具有一一定的的风险险制造过过程中中的不不均一一性对过滤滤介质质的化化学腐腐蚀机械缺缺陷过高的的压力力过滤器器验证证项目目生物性性能微生物物截留留客户定定制流速产量操作温温度压力系统尺尺寸大大小物理性性能完整性性产品／／水起起泡点点扩散流流吸附化学性性能兼容性性析出物物验证必必须是是以产产品为为介质质，在在最差差的条条件下下进行行过滤器器的选选择工艺特特性所要求求的流流量所要求求的压压差可使用用的灭灭菌方方法过滤介介质的的寿命命过滤器器结构构筒式，，平板板式过滤器器的选选择化学相相容性性证明过过滤介介质不不会把把外来来物质质带进进产品品证明无无菌过过滤介介质不不受产产品的的影响响，削削弱它它的强强度和和完整整性测试包包括：可氧化化物质质溶剂系系统中中的重重量变变动析出物物分析析，吸吸附分分析完整性性试验验流量变变化外观物物理变变化生物截截留能能力过滤器器的完完整性性试验验目的的是是确确定定过过滤滤系系统统不不存存在在使使液液体体不不经经过过过过滤滤介介质质到到达达过过滤滤器器下下游游的的通通道道起泡点试验前向流试验（（扩散流）压力表压力表滤芯流量计无菌过滤器微微生物挑战试试验目的：证实过过滤器是有能能力截获微生生物，而且超超过了工艺物物流自身最大大的生物负荷荷模拟实际工艺艺的压力流量量等参数菌种：缺陷型型假单胞菌数量：按过滤滤器面积107个/cm2步骤确认过滤器的的完整性用含一定数量量细菌的培养养基过滤滤过液进行培培养（取样或或膜过滤），，37度14天过滤后进行完完整性测试连续验证3次次，都应无菌菌生长三个需要特别别关注的关键键点起泡点标准的的建立与截留留率的相关性性过滤器的微生生物截留验证证必须在药液液中进行在实际的生产产参数下进行行验证，如压压力最高值过滤系统验证证小结过滤器的选择择应符合工艺艺和产品的特特性过滤器的验证证是一个技术术复杂的过程程国外一般委托托过滤器生产产厂家进行选选择和验证3.4培养养基灌装试验验采用正常的生生产工艺，用用培养基代替替产品进行灌灌装，以考察察生产过程、、设备和包装装形式、人员员操作等整个个体系能始终终如一地生产产出符合要求求的无菌产品品使用范围初次验证对象：新的无无菌生产工艺艺连续3次合格格的无菌工艺艺模拟有足够的时间间模拟实际生生产时的操作作最差状况模拟拟年度再验证对象：现行工工艺每年进行两次次再验证有足够的时间间模拟实际生生产时的操作作最差状况模拟拟培养基灌装流流程确认设施设备备和各灭菌工工艺验证的完完成确认培养基灌灌装的范围制订培养基灌灌装方案培养基选择灌装数量和灌灌装总时间各步骤间的间间隔时间挑战试验的最最差条件设计计人员环境监测测计划培养条件、时时间和设备培养基灵敏度度试验总结和失败原原因调查使用范围计划外的验证证

：如工艺重大改改变，设施设设备改造等偏差原因：无菌实验失败败，根据偏差差调查结果的的要求环境监测结果果明显反常，，根据偏差调调查结果的要要求某个区域的空空调关闭时间间超过验证的的时间段培养基灌装试试验应考虑的的因素培养基的选择择培养基促生长长能力灌装数量环境监测方案案收集和培养最差条件的挑挑战培养基的选择择适应广谱微生生物生长较好的澄明度度，较小的粘粘度可除菌过滤常用培养基：：3％大豆胰胰蛋白肉汤（（TSB）粉针剂：聚乙二醇，乳乳糖和/或肉肉汤粘稠的乳膏剂剂：混于肉汤中的的琼脂和羧甲甲基纤维素培养基促生长长能力灵敏度试验取灌装前、中中、后各阶段段的培养基样样品枯草芽孢杆菌菌、金黄色葡葡萄球菌、白白色念珠球菌菌、绿脓杆菌菌、黑曲霉菌菌、环境菌每个菌种接种种2支，计数<100cfu/瓶20-25°°C/30-35°C培养5天内生生长灌装数量批次量足够大大灌装量一般5000~10000瓶瓶批量小的(低低于5000瓶)以全批批数量灌装环境监测全面、全过程程检测对无菌生产区区环境的评估估对人员资格的的确认(所有有无菌区工作作人员）环境的清洁：：灌装结束4小时内收集和培养按灌装的先后后顺序轧盖翻转接触所有有表面培养：20-25度7天天，30-35度7天在中间转换温温度和培养结结束时100％灯检记录污染瓶数数记录丢弃的数数量和原因，，不得随意丢丢弃最差条件挑战战储存时间：灌装设备、灌灌装部件、储储罐、无菌物物料、药液在在实际灌装前前能够放置的的最长时间例1:用需需要再灭菌前前的灌装设备备、灌装部件件、储罐、无无菌物料参与与培养基灌装装例2:无菌过过滤后存放在在储罐内的培培养基到实际际生产时产品品的最大储存存时间后再灌灌装最差条件挑战战无菌灌装时间间在培养基灌装装中模拟用时时最长的瓶子子满批量生产产需要的时间间，其中包括括正常的干扰扰时间（换班班、设备维修修）灌装速度和瓶瓶子规格灌装速度和瓶瓶子规格的关关系最慢的速度，，最大的瓶子子规格最小的瓶子规规格，最快的的速度最差条件挑战战人员培养基灌装时时模拟无菌区区可能容纳最最多的人数无菌区工作人人员至少每年年参与一次培培养基灌装操作干扰正常的（灌装装线装配，称称量调节，加加胶塞，处理理倒瓶，取样样，环境监测测）非正常的（设设备故障，灌灌装线堵塞，，轨道调节，，拆卸/替换换破损的部件件）干扰的次数应应该不少于正正常生产时发发生的次数工艺气体使用氮气的，，因考虑其不不利于微生物物生长，以压压缩空气代替替培养基灌装失失败后的调查查不管批次量有有多大,只要要培养基灌装装中存在污染染就意味着无无菌保证有问问题设计合理、操操作适当的无无菌灌装污染染水平应为零零灌装瓶数结果判断<5000如有1瓶污染，调查并再验证5000~10000如有1瓶污染，调查并重复培养基灌装如有2瓶污染，调查并考虑再验证>10000如有1瓶污染，进行调查如有2瓶污染，调查并考虑再验证培养基灌装失失败后的调查查环境和人员监监测数据灭菌记录和设设备校验记录录灌装区域清洁洁消毒记录人员培训记录录高效过滤器完完整性测试记记录压差记录溶液除菌过滤滤器完整性测测试记录污染菌来源丢弃的培养基基灌装瓶灌装时的干扰扰活动其他偏差和干干扰活动3.5容器器密封性验证证目的：保证灭灭菌过程后和和产品有效期期内密封系统统的完整性密闭系统：安安瓿或容器/胶塞系统方法：物理方法：染染料检漏法，，盐水渗入法法，高压电极极检测机微生物检测法法：气溶胶法将灌装培养基基的压盖容器器放置在充满满微生物的气气溶胶腔室内内，保持一定定温度、压力力、湿度和时时间微生物浸泡法法将灌装培养基基的压盖容器器倒置在一定定浓度的特定定微生物的溶溶液内，保持持一段时间微生物浸泡法法操作步骤菌液待确认密封口支架培养基容器选择试验菌种种（大肠埃希希氏菌、铜绿绿假单胞菌、、粘质沙雷氏氏菌）制备菌悬液一接种环置10mlTSB中30-35度培养16-18小时时，再置于1000mlTSB中培养22-24小时，，浓度不小于于106/ml准备灌装有培培养基的西林林瓶（按正常常程序轧铝盖盖）试验：将铝盖去除倒置于菌悬液液中4小时取出后消毒外外表面培养7天，每每天观察生长长情况培养基的阳性性试验3.6粉针针剂、冻干粉粉针、小容量量注射剂工艺艺验证的异同同粉针剂冻干粉针小容量注射剂相同点遵循一般验证程序-设计，安装，运行，性能，产品基本范围相同：布局设计，建筑材质，环境级别，HEPA，工艺用水，纯蒸汽，清洗灭菌去热原设备及程序，气体系统，人员，包装，无菌工艺，产品工艺不同点无菌粉末的处理，分装机，培养基灌装程序冻干机，无菌过滤器洗烘灌封机，不一定是最终灭菌产品四、无菌工艺艺的再验证法规性和定期期性的再验证证计量器具（每每年一次）培养基灌装（（每年两次））高效过滤器泄泄漏试验（每每年两次）关键灭菌设备备及灭菌程序序（灭菌釜，，热隧道，冻冻干机，储液液罐）（每年年一次）人员（每年一一次）变更引起的再再验证变更应评估对对产品质量可可能的影响原料，包材工艺参数或路路线设备改变或重重大维修处方改变，批批量改变偏差、质量事事故等不同品种共线线生产的验证证要求评估不同品种种共线生产的的风险，制定定控制措施核心是防止交交叉污染制订有效的清清洁规程拆卸、清洗、、干燥、储存存、装配清洁剂的选择择清洁验证确定残留物限限度标准（化化学/微生物物）确定取样点和和检验方法日常监控和再再验证五、总结深刻理解工艺艺和产品特性性掌握验证基本本原理并科学学加以应用无菌工艺验证证包括工艺无无菌性验证和和产品验证9、静夜四无邻邻，荒居旧业业贫。。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、雨中黄叶叶树，灯下下白头人。。。14:05:2114:05:2114:0512/29/20222:05:21PM11、以我独沈沈久，愧君君相见频。。。12月-2214:05:2114:05Dec-2229-Dec-2212、故故人人江江海海别别，，几几度度隔隔山山川川。。。。14:05:2114:05:2114:05Thursday,December29,202213、乍见翻翻疑梦，，相悲各各问年。。。12月-2212月-2214:05:2114:05:21December29,202214、他乡生生白发，，旧国见见青山。。。29十十二月20222:05:22下午午14:05:2212月-2215、比不了得就就不比，得不不到的就不要要。。。十二月222:05下下午12月-2214:05December29,202216、行动出出成果，，工作出出财富。。。2022/12/2914:05:2214:05:2229December202217、做前，能能够环视四四周；做时时，你只能能或者最好好沿着以脚脚为起点的的射线向前前。。2:05:22下下午2:05下下午14:05:2212月-229、没有失败，，只有暂时停停止成功！。。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、很很多多事事情情努努力力了了未未必必有有结结果果，，但但是是不不努努力力却却什什么么改改变变也也没没有有。。。。14:05:2214:05:2214:0512/29/20222:05:22PM11、成功功就是是日复复一日日那一一点点点小小小努力力的积积累。。。12月月-2214:05:2214:05Dec-2229-Dec-2212、世间成成事，不不求其绝绝对圆满满，留一一份不足足，可得得无限完完美。。。14:05:2214:05:2214:05Thursday,December29,202213、不知知香积积寺，，数里里入云云