总论药物的杂质分析培训课件

总论药物的杂质分析本章要求熟悉药物杂质及其来源和分类，杂质检查的依据和方法掌握药物杂质限量及其计算要求熟悉一般杂质检查的原理、方法和注意事项了解杂质鉴定的方法1/7/20232总论药物的杂质分析评价药品质量的三种分析手段：鉴别（identification）检查（testforpurity）含量测定（assay）——反映纯度杂质1/7/20233总论药物的杂质分析什么是杂质？指任何影响药品纯度的物质在药物中存在但存在无治疗作用

使药物的外观性状、物理常数变化影响药物稳定性使药物活性降低、毒副作用增加氯化物、硫酸盐砷盐、重金属对氨基酚、游离肼第一节药物中的杂质与杂质限量一、基本概念1/7/20234总论药物的杂质分析理化常数含量测定杂质检查外观性状药物纯度的综合评定注意药物纯度与化学纯度的区别药物的纯度——指药物的纯净纯度，反映了药物质量的优劣，药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素1/7/20235总论药物的杂质分析区分：药物的纯度——

化学试剂的纯度——

只有两个等级：合格或不合格有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯考虑杂质对生理作用的影响考虑杂质对化学变化的影响1/7/20236总论药物的杂质分析

事例：

消化道检查：化学试剂BaSO4

代替

胃透视用BaSO4

死亡因素：游离钡超过0.8-0.9g

药用硫酸钡必须严格控制游离钡的限量71/7/20237总论药物的杂质分析二、杂质的来源1/7/20238总论药物的杂质分析示例：注射用NaCl生产过程中引入的杂质以工业用NaCl精制而成，其中含有Br-、I-、K+等示例：安乃近的生产可能引入的杂质为中间体MAA、原料AA、副产物等1/7/20239总论药物的杂质分析示例：肾上腺素注射液(制剂生产)抗氧剂——焦亚硫酸钠稳定剂——EDTA-2Na肾上腺素磺酸

生产过程中引入的杂质肾上腺素SO32-1/7/202310总论药物的杂质分析示例：中药中的重金属

生产过程中引入的杂质土壤环境1/7/202311总论药物的杂质分析（1）原料、反应中间体及副产物

（2）试剂、溶剂、催化剂类（3）制剂生产过程中产生新的杂质（4）金属器皿、装置、工具带来的杂质受外界条件影响发生水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等1/7/202312总论药物的杂质分析贮藏过程中引入的杂质示例：氧化利血平——氧化产物无降压作用麻醉乙醚——过氧化物有毒严格控制药品的贮藏条件，是保证临床用药安全、有效的一个重要方面

示例：水解（阿司匹林）生产中反应不完全水杨酸残留

贮藏中水解产生水杨酸1/7/202313总论药物的杂质分析三、杂质的种类与分类按来源分一般杂质在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐等特殊杂质在个别药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。如阿司匹林中的游离水杨酸、甲硝唑中的2-甲基-5-硝基咪唑等。1/7/202314总论药物的杂质分析按毒性分信号杂质本身一般无害，但其含量的多少可以反映出药物的纯度水平，称其为“信号”杂质。如氯化物、硫酸盐等属于信号杂质。毒性杂质对人体有毒害的杂质。如重金属、砷盐、氰化物等应严格加以控制，以保证用药安全。1/7/202315总论药物的杂质分析有机杂质残留溶剂

无机杂质

按化学类别和特性分类合成中未反应完全的原料、中间体、副产物、降解产物等生产中使用的有机溶剂来源于生产过程，一般是已知的和确定的，直接影响药物的稳定性，反映生产工艺情况1/7/202316总论药物的杂质分析四、杂质的限量定义药物中所含杂质的最大允许量。限量检查百分之几或百万分之几（ppm）（在不影响疗效和不产生毒副作用的前提下，允许杂质在一定限度范围内存在）通常不要求准确测定含量，检查杂质是否超过限量杂质量≤杂质限量＜杂质量药品合格药品不合格1/7/202317总论药物的杂质分析1/7/202318总论药物的杂质分析对照法一定量的被检杂质标准溶液，与一定量供试品溶液，在相同实验条件下，比较反应结果以确定杂质的含量是否超过限量灵敏度法比较法加入一定量的试剂，在一定反应条件下不得有正反应出现，以判断杂质的含量是否超过限量测定特定待检杂质的参数与规定的限量比较，不得更大1/7/202319总论药物的杂质分析供试品供试液对照品对照液色斑比较色斑颜色比色浑浊比浊杂质最大允许量是否稀释对照法平行操作供试管对照管1/7/202320总论药物的杂质分析甲管乙管甲管乙管自上向下透视《药品检验操作标准》规定：遵循平行操作原则（1）仪器的配对性（2）对照品与供试品的同步操作211/7/202321总论药物的杂质分析计算1/7/202322总论药物的杂质分析示例1茶苯海明中氯化物的检查已知：求：L＝？解：是否正确？=0.04%1/7/202323总论药物的杂质分析示例2谷氨酸钠中重金属的检查已知：S＝1.0g

ρ＝10µg/mlL＝10×10－6求：V＝？解：1/7/202324总论药物的杂质分析示例3肾上腺素中酮体的检查解：已知：=435A=0.05求：L＝？1/7/202325总论药物的杂质分析计算中应注意①单位一致②稀释体积③ppm的表示方法1/7/202326总论药物的杂质分析第二节药物中杂质的检查方法药物中杂质检查的原理1/7/202327总论药物的杂质分析产生特征实验现象薄层色谱高效液相色谱气相色谱紫外光谱红外光谱原子吸收光谱热重分析观察颜色嗅、味等1/7/202328总论药物的杂质分析一、化学法与试剂反应产生颜色与试剂反应产生沉淀与试剂反应产生气体杂质比色法比浊法

气体检查法1/7/202329总论药物的杂质分析示例苄氨噻嗪中芳香第一胺的检查分子结构中无芳香第一胺基，不能发生重氮化-偶合反应，而芳香第一胺杂质可以发生反应而产生颜色，采用分光光度法检查。苄氟噻嗪1/7/202330总论药物的杂质分析1mol/L盐酸溶液4％亚硝酸钠溶液10％氨基磺酸铵溶液2％二盐酸萘基乙二胺溶液步骤518nm处测定，A≤0.111/7/202331总论药物的杂质分析在某一波长处杂质有最大吸收，药物无吸收。在此波长处测定样品溶液的吸光度，通过控制吸光度值的大小来控制杂质的量二、光谱方法药物杂质对光选择吸收性质的差异紫外吸收光谱法1/7/202332总论药物的杂质分析地蒽酚432nm无吸收二羟基蒽醌432nm有最大吸收规定0.01%地蒽酚氯仿溶液A432nm<0.12二羟基蒽醌地蒽酚示例

地蒽酚中二羟基蒽醌的检查二羟基蒽醌地蒽酚1/7/202333总论药物的杂质分析示例

两性霉素B中两性霉素A的检查两性霉素A两性霉素B

两性霉素B305nm几乎无吸收两性霉素A305nm有最大吸收

ChP要求测定两性霉素B供试液的吸光度A305nm<0.401/7/202334总论药物的杂质分析检查药物中无效或低效晶型。示例：甲苯咪唑中A晶型的检查（C晶型有效晶型，A无效）红外吸收光谱法A晶型C晶型640cm-1有强吸收

吸收很弱662cm-1吸收很弱

有强吸收1/7/202335总论药物的杂质分析662cm-1640cm-1803cm-1620cm-1基线：消除背景吸收D1D2对照品（含10％A晶型）

662cm-1640cm-1D2D1供试品D2’D1’<结果判断1/7/202336总论药物的杂质分析三、色谱法（chromatography）药物中的有机杂质的结构和性质往往和药物相近，色谱法可以利用药物与杂质在色谱性质的差异，能有效的将杂质与药物进行分离和检测。1/7/202337总论药物的杂质分析供试对照1.杂质对照品法适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况TLC法（应用广泛）点样→展开→晾干薄层板→检视斑点1/7/202338总论药物的杂质分析示例枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查判断结果：供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。供试品溶液：枸橼酸乙胺嗪（50mg/ml）对照品溶液：N-甲基哌嗪对照品(50μg/ml)供试对照品1/7/202339总论药物的杂质分析2.供试品溶液自身稀释对照法适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况。以供试液的稀释液作为对照液，限于杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近的情况下使用。高低浓度对比法1/7/202340总论药物的杂质分析示例

吡罗昔康中有关物质的检查供试品溶液：20mg/ml对照溶液：0.2mg/ml结果判断：供试品溶液如显杂质斑点，与对照液所显的主斑点比较，不得更深。

稀释供试对照液1/7/202341总论药物的杂质分析3.杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用当药物中存在多个杂质时，其已知杂质有对照品时，采用杂质对照品法检查；共存的未知杂质或没有对照品的杂质，可采用供试品溶液自身稀释对照法检查。1/7/202342总论药物的杂质分析判断：供试品溶液如显杂质斑点不得多于2个，与对照品溶液相同位置上所显杂质斑点颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深，另一杂质斑点的颜色与对照液主斑点比较，不得更深。示例

盐酸黄酮哌酯中有关物质的检查供试品溶液：20mg/ml对照溶液：

0.10mg/ml对照品溶液：3-甲基黄酮-8-羧酸0.10mg/ml稀释供试对照品对照液1/7/202343总论药物的杂质分析4.对照药物法当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可用与供试品相同的药物作为对照，此对照药物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。1/7/202344总论药物的杂质分析1.外标测定法HPLC法（应用日益广泛）适用于有杂质对照品的情况采用HPLC法测定含量，同一条件下可进行杂质检查1/7/202345总论药物的杂质分析示例卡托普利及其片剂中卡托普利二硫化物的检查

供试品溶液：0.5mg/ml对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品，5μg/ml结果判断：以峰面积计算其含量，原料药中的二硫化物不得超过1.0%1/7/202346总论药物的杂质分析2.加校正因子的主成分自身对照测定法消除杂质与主成分的响应可能不同所引起的测定误差适用于已知杂质的控制。需要杂质对照品和药物对照品建立内标法计算f，测定时以供试液稀释液为对照，不用杂质对照品药物对照品的峰面积杂质对照品的峰面积1/7/202347总论药物的杂质分析示例

红霉素A中红霉素B、C组分及有关物质的检查供试品溶液：4mg/ml对照溶液：0.2mg/ml稀释

结果判断：供试品溶液中各杂质的峰面积分别乘以相应的校正因子后，与对照溶液中主成分的峰面积比较。其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积1/7/202348总论药物的杂质分析3.不加校正因子的主成分自身对照法适用于没有杂质对照品的情况，以供试液的稀释液作为对照液自身对照液供试品溶液A杂总=A1＋A2＋A31/7/202349总论药物的杂质分析供试品溶液：1mg/ml对照溶液：5μg/ml结果判断：单个杂质的峰面积不得大于对照溶液的主峰面积（0.5%），各杂质的峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积的4倍（2.0%）示例甲氨蝶呤中有关物质的检查稀释1/7/202350总论药物的杂质分析适用于粗略测量供试品中杂质的含量。计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积（含药物的峰面积，而不含溶剂峰面积）的百分率。该法一般不宜用于微量杂质的检查。4.面积归一化法1/7/202351总论药物的杂质分析主要用于药物中挥发性杂质（残留溶剂）的检查。方法：方法同HPLC另外有标准溶液加入法杂质对照品液+供试液外标法或内标法测定总量GC法1/7/202352总论药物的杂质分析1.原理对照法Cl-

＋Ag+AgCl（白色浑浊）稀硝酸2.方法SRS：供试品溶液R：杂质对照品溶液五、药物中杂质检查示例（一般杂质）氯化物检查操作要求：平行操作黑色背景比较浊度1/7/202353总论药物的杂质分析3.测定条件标准氯化钠溶液：以50ml中含50~80μg的Cl为宜酸度以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜（所显浑浊梯度明显，相当于标准氯化钠5～8ml）（1）加速AgCl↓形成，产生较好的白色乳浊如Ag2CO3↓、Ag3PO4↓和Ag2O↓（2）避免弱酸银盐的形成（3）避免氧化银沉淀生成1/7/202354总论药物的杂质分析3.测定条件暗处放置5分钟后比浊

因氯化银见光易分解1/7/202355总论药物的杂质分析4.干扰的排除供试品若不澄清共试品若有色内消色法供试品溶液供试品溶液AgNO3放置10min反复过滤澄清溶液AgNO3标准NaCl溶液水对照溶液暗处放置5min后比浊过滤AgNO31/7/202356总论药物的杂质分析补充：外消色法1、加合适的试剂使供试液褪色

KMnO7+乙醇→褪色2、向对照液加其他无干扰的有色溶液使与供试液颜色一致稀焦糖溶液或标准比色液571/7/202357总论药物的杂质分析1.原理对照法2.方法SRS：供试品溶液R：杂质对照品溶液硫酸盐检查基本等同于氯化物检查SO42-

＋Ba2+BaSO4（白色浑浊）HCl消除弱酸钡盐沉淀的干扰1/7/202358总论药物的杂质分析1.原理对照法2.方法SRS：供试品溶液R：杂质对照品溶液铁盐检查操作要求：平行操作白色背景比较颜色Fe3+＋6SCN-[Fe(SCN)6]3-(红色)HCl不要忘了还有Fe2+哦！1/7/202359总论药物的杂质分析3.测定条件标准铁溶液：[FeNH4(SO4)2·12H2O]以50ml中含10~50μg的Fe3+为宜酸度以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜（以硫酸铁铵配制，加入硫酸，防止铁盐水解）防止铁盐水解，避免弱酸盐的干扰1/7/202360总论药物的杂质分析3.测定条件加入过硫酸铵B、防止光线使反应产物硫氰酸铁还原或分解褪色A、氧化Fe2+为Fe3+4.干扰的排除当供试溶液管与标准溶液管色调不一致或红色太浅可用正丁醇或异戊醇提取后，分取醇层比色1/7/202361总论药物的杂质分析1.什么是重金属重金属检查在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等重金属的毒性有毒砷、汞残留阿胶的重金属限量不得过30ppm黄连上清丸的重金属限量不得过25ppm1/7/202362总论药物的杂质分析检查时以铅为代表ChP2010收载三种检查方法第一法硫代乙酰胺法第二法炽灼后的硫代乙酰胺法第三法硫化钠法2.方法1/7/202363总论药物的杂质分析1.原理CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2SH2S+Pb2+pH3.5PbS+2H+适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物，最常用的方法第一法硫代乙酰胺法2.方法

对照法SR操作要求：平行操作白色背景比较浊度1/7/202364总论药物的杂质分析应用实例H2O至25mL

放置2’硫代乙酰胺2mL醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL供试对照水解条件、最佳浊度硝酸铅供试对照葡萄糖0.1g标准铅2mL1/7/202365总论药物的杂质分析增加第3支比色管：如该比色管中显出的颜色浅于对照管，按第二法重新检查操作要点强调供试对照比浊供试对照121212供试+对照33供试+对照31/7/202366总论药物的杂质分析供试品若有色：调节两管颜色一致（外消色法）供试对照加入稀焦糖溶液3.干扰的排除1/7/202367总论药物的杂质分析H2SFe3+弱酸性S混浊，对比色有影响排除Fe3+Fe2+

Vc或盐酸羟胺供试品若有微量Fe3+1/7/202368总论药物的杂质分析适用于含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物。第二法炽灼后的硫代乙酰胺法原理重金属游离,再加盐酸转化为溶于水的氯化物，再按第一法检查炽灼破坏基本等同于第一法1/7/202369总论药物的杂质分析

应用实例

缓缓炽灼放冷H2SO4

0.5-1.0mL炭化加热

HNO3

500-600℃H2SO4

除尽放冷完全灰化蒸干HCl2mL水15mL

中性按第一法检查蒸干氨试液供试液黄连上清丸

对照液1/7/202370总论药物的杂质分析注意事项强调用配制供试液的试剂做空白试验，消除硫酸、硝酸、盐酸和氨试液等试剂可能夹带的重金属对测定的干扰灼烧样品时，温度必须控制在500～600℃加入硫酸和硝酸可促使有机物完全分解,且必须加热挥尽硫酸和硝酸，否则影响测定1/7/202371总论药物的杂质分析第三法硫化钠法适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物。稀酸1.原理2.方法

对照法SR1/7/202372总论药物的杂质分析第一法第二法第三法共同点限量检查、对照法、比浊pH条件醋酸盐缓冲液（3.5）NaOH显色剂硫代乙酰胺硫化钠特殊处理500-600℃炽灼适用范围溶于水、稀酸和乙醇含芳环、杂环及不溶于水,稀酸和乙醇溶于碱不溶于酸1/7/202373总论药物的杂质分析ChPJPUSPBP古蔡氏法Ag-DDC法次磷酸法各国药典砷盐检查法比较砷盐检查法

★意义三价砷盐毒性极强，多由药物生产过程中所使用的无机溶剂引入。《中国药典》规定了砷盐限量检查项目，如阿胶中砷盐含量不得过3ppm，黄连上清丸中砷盐含量不得过2ppm。1/7/202374总论药物的杂质分析（一）古蔡氏法1.原理(黄色～棕色)有机破坏1/7/202375总论药物的杂质分析2.方法（平行操作）H2O至28ml

Zn2g放置

10′供试液对照液1HCl5ml2

KI5ml3SnCl25滴4Pb(Ac)2

棉花5HgBr2

试纸6

45′25～40℃7比较砷斑8立即观察1/7/202376总论药物的杂质分析结果判断样品溶液标准砷溶液样品砷斑标准砷斑醋酸铅棉花

H2S↑

AsH3↑

还原反应(25-40℃)溴化汞试纸

供试品砷斑颜色比标准砷斑颜色浅，则砷盐限量检查符合规定反之则砷盐限量检查不符合规定1/7/202377总论药物的杂质分析3.测定条件（1）标准溶液三氧化二砷

(临用新配)1gAs/ml√药典规定用2ml制备标准砷斑（2）KI-SnCl2试液78A.使As5+→As3+AsO43-＋2I-＋2H+AsO33-＋I2＋H2OAsO43-＋Sn2+＋2H+AsO33-＋Sn4+＋H2O1/7/202378总论药物的杂质分析（2）KI-SnCl2试液I2＋Sn2+2I-＋Sn4+4I-＋Zn2+[ZnI4]2-B.使I2褪色，有利于H3As的形成C.氯化亚锡在锌粒表面形成Zn-Sn齐，起去极化的作用，有利于H2均匀连续发生D.抑制SbH3的生成，消除微量Sb干扰

1/7/202379总论药物的杂质分析（3）醋酸铅棉花[Pb(Ac)2]消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰（4）溴化汞试纸[Hg(Br)2]与砷化氢作用形成砷斑醋酸铅棉花60mg装管高度60～80mm801/7/202380总论药物的杂质分析测砷瓶测砷管Hg(Br)2试纸Pb(Ac)2棉花玻璃试管古蔡法Ag(DDC)反应液Ag(DDC)法适用不含或含Sb小于100g供试品

适用含Sb量小于500g的供试品1/7/202381总论药物的杂质分析（二）Ag-DDC法直接比色或于510nm波长处测定吸收度1.原理(红色胶态)1/7/202382总论药物的杂质分析Sb干扰更严重（含锑药物）例如：葡萄糖酸锑钠SbH3+HgBr2SbH2(HgBr)+HBr（灰色）白田道夫(Betterdorff)法干扰：

2As3＋+3SnCl2+6HCl→2As↓+3SnCl4+6H＋

(棕褐色的胶态砷)干扰砷斑检查1/7/202384总论药物的杂质分析酸碱滴定法pH法指示剂法酸碱性的差异酸碱度检查法1/7/202385总论药物的杂质分析酸碱滴定法例：己酸羟孕酮中正己酐、对甲苯磺酸的检查要求：V<0.50ml

规定消耗滴定液的体积本品0.20g(NaOH0.02mol/L)显微蓝色中性乙醇溴麝香草酚蓝Vml1/7/202386总论药物的杂质分析主要检查在合成原料药，辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去有机溶剂第一类：应该避免使用第二类：应该限制使用第三类：GMP或其他质控要求限制使用第四类：尚无足够毒理学资料残留溶剂检查法1/7/202387总论药物的杂质分析第一法：毛细管柱顶空进样等温法有机溶剂数量不多、极性差异较小第二法：毛细管柱顶空进样程序升温法有机溶剂数量较多、极性差异较大第三法：溶液直接进样法采用填充柱、适宜极性的毛细管柱测定方法ChP采用GC法1/7/202388总论药物的杂质分析顶空分析也称液上气相色谱分析，是指用气相色谱法来分析封闭系统中与液体（或固体）样品相平衡的气体的一种方法顶空进样器顶空进样瓶1-2g固体或3-5mL液体（平衡30-45min）1/7/202389总论药物的杂质分析内标法外标法

限度检查被测溶剂峰面积与内标峰面积之比不得大于对照品溶液的相应比值被测溶剂峰面积不得大于对照品溶液的相应峰面积结果判断内标法外标法

定量测定1/7/202390总论药物的杂质分析第三节降解物和杂质的分离与鉴定

最大日剂量报告限度鉴定限度质控限度原料药≤2g

0.05%0.10%或1.0mg0.15%或1.0mg

＞2g0.03%0.05%0.05%制剂≤1g0.1%＞1g0.