免疫增殖性疾病的免疫学检验

第九单元

免疫增殖性疾病的免疫学检验概述免疫增殖病通常是指以浆细胞、淋巴细胞和巨噬细胞异常增生为特征的疾病，其表现往往有免疫功能异常及免疫球蛋白质和量的变化。与免疫学检验最为密切的是B淋巴细胞异常增殖或其他导致免疫球蛋白异常的免疫球蛋白病，免疫球蛋白病主要表现为高免疫球蛋白血症。当临床上考虑为多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症或其它浆细胞恶变等免疫球蛋白病时，一般先以血清蛋白区带电泳、免疫球蛋白定量检测或尿本－周蛋白定性作为初筛实验。如果发现有异常球蛋白区带，继而进行免疫固定电泳、免疫球蛋白亚型定量等检测做进一步定量分析和免疫球蛋白分类鉴定。实验一

血清免疫固定电泳实验实验目的本实验以血清免疫固定电泳实验为例进行实习通过实习，熟悉血清免疫固定电泳的实验过程及注意事项；掌握血清免疫固定电泳检测M蛋白的基本原理与临床意义。实验原理将患者血清在琼脂糖凝胶介质上经电泳分离后，将固定剂和各型Ig及其轻链抗血清加于凝胶表面的各自泳道上，经孵育让固定剂和抗血清在各自泳道对应的凝胶内渗透并扩散，若有对应抗原存在，则在适当位置形成抗原抗体复合物并沉淀下来。电泳凝胶在洗脱液中漂洗，去除未结合蛋白质，仅保留贮存在凝胶内的抗原抗体复合物。经染色后蛋白质电泳参考道和抗原抗体沉淀区带被AcideViolet染色液着色。根据电泳移动距离分离出单克隆组分。试剂与器材AcideViolet染色液：用1L10%冰醋酸溶解AcideViolet。脱色液：用1L蒸馏水溶解CitricAcidDestain。清洗液：8L蒸馏水溶解Tris-BufferedSaline。电泳仪：spife3000全自动电泳仪。Spife3000全自动电泳仪操作步骤样本处理：用生理盐水将血清标本适当稀释后备用，其中同一份血清第一泳道样本稀释3倍，第二至第六泳道样本稀释5倍。区带电泳上样

胶片准备

电泳沉淀反应加抗血清洗涤、烘干着色结果分析对染色烘干干后的胶片片进行判读读。将第一一泳道作为为血清蛋白白分子量参参考道，观观察第二至至第六泳道道有无对应应的特异性性单克隆免免疫球蛋白白条带。如如图12-1所示,其中sp泳道为血清清蛋白参考考道，由下下至上分别别为白蛋白白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白。第第2、3、4、5、6泳道分别为为IgG、IgA、IgM、κ、λ抗血清泳道道。注意事项标本需取新新鲜血清进进行分析，，为避免抗抗原过剩引引起的带现现象，血清清于加样前前应先作适适当稀释并并混匀。总免疫球蛋蛋白的水平平＞20g/L稀释剂量加加倍，当总总免疫球蛋蛋白水平＜＜5g/L稀释剂量减减半（除了了ELP泳道）。某些样本（（尤其是含含有冷球蛋蛋白或冷凝凝胶）冷藏藏或冰冻后后，可能变变得粘稠或或混浊。这这种样本可可能由于扩扩散障碍而而存在点样样问题。在在这样情况况下，加25μl液化剂于75μl血清中，混混匀15s。然后按规规定程序继继续进行。。某些单克隆隆蛋白质可可能因多聚聚体而导致致所有的免免疫固定泳泳道上均出出现单克隆隆片段。在在这样情况况下可加25μl还原剂（1％β-巯基乙醇））于75μl血清混匀并并令其反应应至少15min（至多3h)后按规定程程序继续进进行。在电泳之前前，凝胶与与电泳槽的的贴合面充充满电泳介介质，并确确保两者之之间无气泡泡。在抗血清加加入血清加加样孔后，，确保血清清与凝胶之之间无气泡泡。染色之前的的胶片一定定要置于洗洗涤液中充充分洗涤，，以出去游游离的血清清和抗血清清成分，降降低染色后后凝胶的背背景色。临床应用本法可对各各类Ig及其轻链进进行分型，，最常用于于临床常规规M蛋白的分型型与鉴定。。通常用于于单克隆Ig增殖病，单单克隆Ig病，本周蛋蛋白和游离离轻链病、、多组份单单克隆Ig病，重链病病、脑脊液液寡克隆蛋蛋白鉴别、、多克隆Ig病的诊断和和鉴别诊断断。免疫固定电电泳的优点点是分辨率率高、敏感感度高、操操作周期短短（仅需数数小时）、、结果易于于分析。思考题结合实验室室的免疫固固定电泳分分析系统，，简述血清清免疫固定定电泳的影影响因素及及其克服的方法。温州医学院院陶陶志华实验二血血清IgG定量检测的的可

报告告范围评价价实验可报告范围围指可以报报告的所有有结果范围围，包含两两种类型的的范围，即即分析测量量范围和临临床可报告告范围。分析测量范范围指对没没有进行任任何预处理理（稀释，，浓缩等））的标本，，分析方法法能够直接接测定出的的待测物范范围，也就就是系统最最终的输出出值（活性性或浓度））与被分析析物的活性性或浓度成成线性比例例的范围，，它反映整整个系统的的输出特性性。概述临床可报告告范围是是指对临临床诊断、、治疗有意意义的待测测物浓度范范围。此范范围如果超超出了分析析测量范围围，可将标标本通过稀稀释、浓缩缩等预处理理使待测物物浓度处于于分析测量量范围内，，最后结果果乘以稀释释倍数。实验目的掌握血清IgG定量检测的的可报告范范围评价的的原理和方方法学，了了解血清IgG测定方法学学的性能。。实验原理由于抗原抗抗体反应的的特殊性，，免疫学检检测项目应应使用多点点定标绘制制标准曲线线，在绘制制的标准曲曲线上查阅阅结果。由由于计算机机技术的发发展，仪器器可对反应应响应呈不不同表现的的结果做适适当的处理理，直接以以最终计量量单位方式式报告检验验结果，在在此情况下下，评价患患者结果可可报告范围围时，可不不必再去评评价响应结结果的真实实曲线状态态，只要将将样品作不不同程度的的稀释或配配制后，将将预期值和和实际检测测值作比较较，绘制在在坐标纸上上应呈一条条通过原点点、斜率为为1的直线。直直线所达的的限值即为为该方法的的患者结果果可报告范范围。试剂与器材材选用与检测测仪器相配配套的试剂剂、校准品品及其他辅辅助试剂参考选用检检测系统中中血清IgG的检测范围围选择低浓浓度标本和和高浓度标标本操作步骤按标本操作作规程做好好项目校准准、常规质质控，保证证检测系统统处于良好好状态。实验标本的的配制，将将血清IgG的高（H）和低（L）样品按：：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H关系各自配配制混合，，形成系列列评价的实实验样品。。并计算各各样品的预预期值。将系列评价价的实验样样品上机检检测，每标标本重复检检测2~4次，结果记记录于下表表。依照稀释关关系，计算算各实验样样品的预期期值。按实实验要求，，每个样品品做6次重复测定定，得6个实测值，，它们和预预期值形成成6对数据。结果分析观察结果有有无明显的的数据差异异，若有明明显差异时时，应判断断是否为离离群点。在坐标纸上上，以X表示各样品品的预期值值，以Y表示各样品品的实测值值，将实验验结果点在在图上。若所有实验验点在坐标标纸上呈明明显直线趋趋势，用直直线回归对对数据进行行统计，得得直线回归归方程Y=bX+a，若b在0.97～1.03范围内，a接近于0，则可直接接判断测定定方法可报报告范围在在实验已涉涉及浓度。。若b不在0.97～1.03范围内，a较大，试着着舍去某组组数据，另另作回归统统计。若缩缩小分析范范围后，回回归式有明明显改善，，若b接近于1，a趋于0。此时，缩缩小的分析析范围可作作为真实的的可报告范范围。注意事项进行可报告告范围实验验评价的样样品必须与与真实标本本尽可能相相似，也要要与真实标标本具有相相同的基质质状态。评价样品要要5个或以上系系列浓度的的实验样品品，浓度范范围遍及整整个预期可可报告范围围。最高浓浓度的样品品应达到可可报告范围围的上限。。若收不到低低值样品，，可收集高高值样品，，经系列不不同程度稀稀释，形成成系列评价价样品。一天内做完完本实验，，一般每个个实验样品品做2～4次重复测定定。综合所所有结果作作统计学处处理。应仔细阅读读试剂说明明书，某些些检测项目目不适宜用用稀释方法法获取系列列浓度的临临床新鲜血血清标本，，可采用商商品质控物物、校准品品等。临床可报告告范围的评评价要对分分析标本进进行最大稀稀释度的评评价实验，，以此作为为临床可报报告范围的的上限；如如果低限有有临床意义义时，可增增加分析标标本反应量量来进行检检测下限评评价实验，，并以此作作为临床可可报告范围围下限。临床应用可报告范围围评价是评评价在此范范围内不同同患者标本本报告结果果间的比值值与各标本本内含有的的分析物确确实存在这这样的比例例关系。思考题若血清IgG低值为0.5g/L（L）、高值为为40.0g/L（H），请计算算按：5L、4L+1H、3L+2H、1L+4H、5H关系配制的的系列实验验样品理论论浓度分别别为多少？？温州医学院院陶陶志华病案讨论免免疫疫增殖性疾疾病某患者，男男，48岁。主述““乏力，脸脸色苍白，，骨骼疼痛痛、背痛””六个月，，体检发现现：皮肤黏黏膜苍白，，局限性骨骨骼压痛，，伴肝脾肿肿大。辅助助检查发现现：（1）血象：Hb8.2g/dl，WBC血小板红红细胞胞、白细胞胞和血小板板镜检形态态学正常，，分类可见见幼粒、幼幼红细胞，，红细胞呈呈缗钱状排排列；（2）骨髓象：：增生活跃跃，浆细胞胞占20％，并发现现形态异常常的骨髓瘤瘤细胞。其其余各系细细胞大致正正常；（3）骨X线片、CT或同位素扫扫描：可发发现多部位位穿凿样溶溶骨性病变变或广泛性性骨质疏松松。问题根据以上初初步检查结结果，该患患者初步诊诊断为什么么疾病？根据你的理理论知识，，该患者还还需做哪些些免疫学检检验项目？？可能结果果如何？与哪些疾病病需进行鉴鉴别诊断？？温州医学院院陶陶志华9、静夜四无无邻，荒居居旧业贫。。。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、雨中黄叶叶树，灯下下白头人。。。03:52:3503:52:3503:5212/29/20223:52:35AM11、以我独沈沈久，愧君君相见频。。。12月-2203:52:3503:52Dec-2229-Dec-2212、故人人江海海别，，几度度隔山山川。。。03:52:3503:52:3503:52Thursday,December29,202213、乍见翻翻疑梦，，相悲各各问年。。。12月-2212月-2203:52:3503:52:35December29,202214、他乡生白白发，旧国国见青山。。。29十二二月20223:52:35上上午03:52:3512月-2215、比不了了得就不不比，得得不到的的就不要要。。。十二月223:52上午午12月-2203:52December29,202216、行行动动出出成成果果，，工工作作出出财财富富。。。。2022/12/293:52:3503:52:3529December202217、做做前前，，能能够够环环视视四四周周；；做做时时，，你你只只能能或或者者最最好好沿沿着着以以脚脚为为起起点点的的射射线线向向前前。。。。3:52:35上上午午3:52上上午午03:52:3512月月-229、没有有失败败，只只有暂暂时停停止成成功！！。12月月-2212月月-22Thursday,December29,202210、很多事情情努力了未未必有结果果，但是不不努力却什什么改变也也没有。。。03:52:3503:52:3503:5212/29/20223:52:35AM11、成功就是是日复一日日那一点点点小小努力力的积累。。。12月-2203:52:3503:52Dec-2229-Dec-2212、世间间成事事，不不求其其绝对对圆满满，留留一份份不足足，可可得无无限完完美。。。03:52:3503:52:3503:52Thursday,December29,202213、不知香香积寺，，数里入入云峰。。。12月-2212月-2203:52:3503:52:35December29,202214、意志坚强强的人能把把世界放在在手中像泥泥块一样任任意揉捏。。29十二二月20223:52:35上上午03:52:3512月-2215、楚塞塞三湘湘接，，荆门门九派派通。。。。十二月月223:52上上午午12月月-2203:52December29,202216、少年年十五五二十十时，，步行行夺得得胡马马骑。。。2022/12/293:52:3503:52:3529December202217、空山新新雨后，，天气晚晚来秋。。。3:52:35上午午3:52上午午03:52:3512月-229、杨柳柳散和和风，，青山山澹吾吾虑。。。12月月-2212月月-22Thursday,December29,202210、阅读一切切好书如同同和过去最最杰出的人人谈话。03:52:3503:52:3503:5212/29/20223:52:35AM11、越越是