细菌的初步鉴定

细菌的初步鉴定一、启动条件：1、目地样：同一取样原因，取表现性状相同的任意1—2包进行细菌初步鉴定。如表现性状不同的，需分别进行鉴定；不同取样原因，需分别取样进行鉴定。2、随机样：相同时段出现坏包，取表现性状相同的任意1—2包进行细菌初步鉴定；不同时段出现坏包，需分别进行鉴定。3、坏包产品的包装无明显破损。4、由微生物污染引起的坏包：酶类及化学反应用不同的查验方式。二、样品处理准备1、酸包：检测时发现产品感官及PH值有明显变化时，需快速将酸包产品的内容物移入无菌容器内（移入时需用75%的酒精棉对操作员手及开包产品的移出口进行擦试灭菌），并需快速检测。如不能检测，需冷藏保存2小时内进行检测。2、胀包：使用75%酒精棉对样品外表面擦试消毒后放于超净台内待检。检测时，以无菌操作在无横纵封处剪一半圆或三角取样。三、检测（划线，接种培养）：低酸产品：检测细菌、芽孢、耐热芽孢，必要时检测霉菌、酵母菌。高酸产品：检测细菌、霉菌、酵母菌。1、细菌：采用无菌手续取1ml样品接种于培养皿中，使用普通营养琼脂于36±1°C/48小时条件下培养;另采用无菌操作使用接种环于营养琼脂上作划线培养（37C/48h）2、芽抱、耐热芽抱：以无菌操作取10ml样品于两个小试管中，分别在80C和100C的水浴中加热10min。冷却后使用营养琼脂培养基的无菌操作，分别作芽孢（36±1C/72h）和耐热芽子包（55±1C/72h）的接种与划线培养。80C10min一杀灭全部未形成孢子的细菌细胞，孢子可存活。100C10min--杀灭部分细菌孢子，耐热孢子可存活。3、霉菌、酵母菌：采用接种环以无菌手续于专用培养基上作划线培养，另采用1ml吸管以无菌操作，接种1ml样品于专用培养基中培养。（条件25—28C/5天）四、记录样品：名称、批号、取样原因、时间、样品感官、PH值、酸度、气体形成、包装密封性、凝块、分离等。五、初步粗略鉴定：（一一对应）1、菌落形态记录：此时计数不重要，观察单一菌丛还是混合菌丛。a、大小：<1mm为露滴状菌落，1-2mm为小菌落，2-4mm为中等小菌落,4-6mm大菌落,>6mm为巨大菌落。艮形状：圆形、不规则状，假根状等。隆起度：扩展，台状、低凸状、乳头状等。菌落边缘：边缘整齐、锯齿状、毛刷状等。表面性状：光滑、褶皱、同心环状等。表面光泽：金属光泽、腊状等。颜色透明度：透明、半透明、不透明等。H、气味、湿润度、颜色等其他。2、鉴别：（1）、初染：选取不同形态的单一菌落。属阴性染色，微生物不着色，在黑背景处观察清晰、闪亮点鉴别：球菌、杆菌。G-菌易扭曲变形，造成鉴别困难方法：滴一滴苯胺黑（2%水溶液）或结品紫染液于载玻片上，用接种环挑取少量菌于涂液的载玻片处，完全涂匀。待自然干燥后，滴香柏油，使用显微镜的油镜观察。（2）、G染色a、球菌：对于球菌，不一致需要G染色，因为G-球菌不会成为液体食品中的腐败菌，可直接进行h2o2酶实验。鉴别h2o2酶阳性、阴性球菌。B、杆菌：需进行G染色，鉴别G-或G+，有无芽孢形成。1、G染色固定的目的：①防止菌落被水冲掉②杀死细菌，固定菌落结构。②改变细菌对染液的通透性。2、媒染：增强染液与菌体间的作用力。3、脱色：测知燃料与被染物之间结合的牢固程度，具有鉴别细菌的作用。G+C壁主要由肽聚糖组成；着色能力强。G-C壁主要由磷脂、脂多糖组成；着色能力弱。脱色时间控制：时间长：G+fG-时间短：G-fG+4、复染：使已脱色的菌体重新染上与前染液颜色成明显对比的颜色。（3）、H2O2酶试验：是一个裂解H2O2，产生02的过程。鉴别H2O2酶试验阴性或阳性的G+杆菌。方法：滴一滴10%的h2o2溶液于载玻片上，使用接种环挑取少量与菌落形态、初染、G染色均对应的菌落，于涂有H2O2的载玻片，完全涂开观察。结果：有气体生成fH2O2酶阳性；无气体生成fH2O2酶阴性。4、氧化酶试验：鉴别氧化酶试验阳性、阴性的G-杆菌。方法：取一试纸条，使用接种环挑取少量相对应的菌落涂于试纸条有药品的一端，观察。结果：不变色f氧化酶阴性变色f氧化酶阳性坏包分析：坏包率=加工残留+再污染加工残留的微生物生长繁殖相对缓慢，1-2小时/代再污染的微生物生长繁殖相对快些，1-10分钟/代1、混合感染、菌丛：空气、水、包装不严密表明产品的再污染（产品在通过杀菌机中的保温管以后，通常是在温度低于100°C的区域）密封圈损坏杀菌机的冷却部分泄漏（再生和终末冷却器）、不严密的包装等主要原因。2、纯污染：相对较少主要是清洗和预灭菌不充分。A、由细菌孢子引起的污染常见原因：杀菌不充分、产品中有特殊物质、在80C以上的温度条件下再污染、包装材料的消毒、在无菌灌装机中的无菌空气系统。B、由耐热细菌孢子引起的污染常见原因：产品杀菌（超高温处理）、工厂消毒、包装材料消毒、空气杀菌、灌装机的杀菌、清洗不彻底（耐热芽孢在设备上蓄积）

坏包微生物鉴定记录样品名称样品批号坏包类型取样编号（原因、时间）坏包PH值坏包酸度坏包包装完整性坏包样品感官详细描述：检验员：微生物培养菌落描述：不同形态菌分别描述（指划线上生长的菌落）细菌总数芽孢总数耐热芽孢其它菌培养空白试验：菌落描述：1#2#3#空白试验：菌落描述：1#2#3#空白试验：菌落描述：1#2#3#空白试验：菌落描述：1#2#3#微生物培养菌落鉴别：不同形态菌分别鉴别（指划线上生长的菌落）初染实验结果细菌总数芽孢总数耐热芽孢其它菌培养空白试验：1#2#3#空白试验：1#2#3#空白试验：1#2#3#空白试验：1#2#3#兰染结及胞态述革氏色果细形描细菌总数芽孢总数耐热牙孢其它菌培养空白试验：1#2#3#空