动物微生物-病毒的增殖和培养课件

病毒的增殖和培养病毒的增殖和培养学习目标知识目标理解复制的定义理解病毒复制的基本过程掌握病毒的人工培养方式及应用能力目标具备病毒分离培养及利用培养特性进行病毒鉴定的理论基础学习目标知识目标2主要内容病毒的增殖复制的概念复制的基本过程病毒的培养动物接种禽胚接种组织培养主要内容病毒的增殖病毒的培养3重点与难点重点病毒复制的基本过程病毒的人工培养方式难点病毒的复制过程重点与难点重点4病毒的增殖方式─复制复制概念是指病毒利用宿主细胞内的原料、能量、酶与场所，来合成病毒的核酸和蛋白质，然后装配成熟并释放到细胞外的过程，称为复制。病毒的增殖方式─复制复制概念5病毒复制的基本过程吸附穿入脱壳生物合成装配与释放病毒复制的基本过程吸附穿入脱壳生物合成装配与释放6吸附静电吸附非特异吸附可逆与受体结合病毒与宿主细胞之间有选择性和有特殊亲和力的特异性吸附不可逆吸附静电吸附7穿入有囊膜病毒的穿入囊膜与细胞膜融合吞饮作用无囊膜病毒的穿入

直接穿入

吞饮作用穿入有囊膜病毒的穿入无囊膜病毒的穿入8囊膜与细胞膜融合囊膜与细胞膜融合囊膜与细胞膜融合囊膜与细胞膜融合9吞饮作用吞饮作用10吞饮作用吞饮作用11形成内吞小体吞饮作用H+形成内吞小体吞饮作用H+12有囊膜病毒的穿入有囊膜病毒的穿入13穿入（无囊膜病毒）直接穿入穿入（无囊膜病毒）直接穿入14穿入（无囊膜病毒）直接穿入穿入（无囊膜病毒）直接穿入15穿入（无囊膜病毒）吞饮作用H+穿入（无囊膜病毒）吞饮作用H+16脱壳多数病毒的脱壳与穿入同时进行的。不同病毒的脱壳又各有特色，例如：新城疫病毒经溶酶体酶的作用脱壳。痘病毒的脱壳分为两个阶段进行。呼肠孤病毒只脱去外层衣壳，内层衣壳不脱去，形成亚病毒颗粒。小RNA病毒在吸附的同时，就发生衣壳蛋白消失，即吸附的同时就发生了脱壳。脱壳多数病毒的脱壳与穿入同时进行的。17脱壳脱壳18生物合成生物合成即病毒遗传信息的控制下合成病毒的各种组成成分。早期:病毒特异性酶的合成病毒核酸复制病毒结构蛋白质合成生物合成生物合成即病毒遗传信息的控制下合成病毒的各种组成成分19生物合成有囊膜病毒的生物合成无囊膜病毒的生物合成生物合成有囊膜病毒的生物合成无囊膜病毒的生物合成20装配新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的细胞内组装成新的子代病毒。装配新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的细胞内组装成新的子代病21成熟与释放成熟由新合成的病毒成分装配成完整的病毒。释放无囊膜的病毒：细胞完全裂解释放有囊膜的病毒：出芽释放成熟与释放成熟22成熟与释放有囊膜病毒的释放囊膜来自于细胞膜有囊膜病毒的释放囊膜来自于细胞核核膜无囊膜病毒的释放成熟与释放有囊膜病毒的释放有囊膜病毒的释放无囊膜病毒的释放23塞里基森林病毒的出芽释放塞里基森林病毒的出芽释放24HIV的出芽与成熟HIV的出芽与成熟25艾滋病毒的出芽释放正常的T.C艾滋病毒感染的T.C艾滋病毒的出芽释放艾滋病毒的出芽释放正常的T.C艾滋病毒感染的T.C艾滋病毒的26病毒复制的过程有囊膜病毒的复制病毒复制的过程有囊膜病毒的复制27病毒的培养方式动物接种禽胚接种组织培养病毒的培养方式动物接种28动物接种动物选择本动物实验动物最理想的是GF动物或SPF动物。病毒增殖结果观察动物死亡、症状、病变等。动物接种的用途病原学检查，传染病诊断，疫苗生产及疫苗效力检验等。动物接种动物选择29禽胚培养禽胚选择最好选择SPF胚病毒增殖结果观察常见病变有死亡，充血、出血或出现坏死灶，禽胚畸形，绒毛尿囊膜上出现痘斑。接种途径禽胚接种的用途家禽传染病的诊断、病毒病原性的研究以及生产诊断抗原和疫苗等方面。禽胚培养禽胚选择30禽胚接种途径绒毛尿囊膜接种10～13日龄鸡胚，如传喉。尿囊腔接种9～12日龄鸡胚，如新城疫。卵黄囊接种6～8日龄鸡胚，主要用于虫媒披膜病毒、鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的增殖。羊膜腔接种10～11日龄鸡胚，主要用于正粘病毒和副粘病毒。1．气室2．卵壳3．卵黄囊4．卵白5．尿囊腔6．绒毛尿囊7．胚胎8．羊水腔9．胚外体液膜用的鸡胚禽胚接种途径绒毛尿囊膜接种1．气室2．卵壳3．卵31组织培养组织培养细胞培养细胞选择增殖结果观察优缺点应用于病毒研究、疫苗生产和病毒病诊断的良好方法组织培养组织培养32细胞选择兽医上通常用的细胞：CEF（鸡胚成纤维细胞）、PK-15株（猪肾上皮细胞）、K-L株（中国仓鼠肺）、D-K株（中国仓鼠肾）等。细胞选择兽医上通常用的细胞：CEF（鸡胚成纤维细胞）、PK-33增殖结果观察病毒的致细胞病变作用（简称CPE），借助倒置显微镜即可观察到。有的细胞不发生病变，但培养物出现红细胞吸附及血凝现象（如流感病毒等）。有时用免疫荧光技术等血清学试验检查细胞中的病毒。增殖结果观察病毒的致细胞病变作用（简称CPE），借助倒置显微34组织细胞培养病毒优缺点组织细胞培养病毒优点：离体活组织细胞不受机体免疫力影响，很多病毒易于生长。便于人工选择多种敏感细胞供病毒生长。易于观察病毒的生长特征。便于收集病毒作进一步检查。细胞培养病毒缺点成本和技术水平要求较高，操作复杂，在基层单位尚未广泛应用。组织细胞培养病毒优缺点组织细胞培养病毒优点：35谢谢！谢谢！病毒的增殖和培养病毒的增殖和培养学习目标知识目标理解复制的定义理解病毒复制的基本过程掌握病毒的人工培养方式及应用能力目标具备病毒分离培养及利用培养特性进行病毒鉴定的理论基础学习目标知识目标38主要内容病毒的增殖复制的概念复制的基本过程病毒的培养动物接种禽胚接种组织培养主要内容病毒的增殖病毒的培养39重点与难点重点病毒复制的基本过程病毒的人工培养方式难点病毒的复制过程重点与难点重点40病毒的增殖方式─复制复制概念是指病毒利用宿主细胞内的原料、能量、酶与场所，来合成病毒的核酸和蛋白质，然后装配成熟并释放到细胞外的过程，称为复制。病毒的增殖方式─复制复制概念41病毒复制的基本过程吸附穿入脱壳生物合成装配与释放病毒复制的基本过程吸附穿入脱壳生物合成装配与释放42吸附静电吸附非特异吸附可逆与受体结合病毒与宿主细胞之间有选择性和有特殊亲和力的特异性吸附不可逆吸附静电吸附43穿入有囊膜病毒的穿入囊膜与细胞膜融合吞饮作用无囊膜病毒的穿入

直接穿入

吞饮作用穿入有囊膜病毒的穿入无囊膜病毒的穿入44囊膜与细胞膜融合囊膜与细胞膜融合囊膜与细胞膜融合囊膜与细胞膜融合45吞饮作用吞饮作用46吞饮作用吞饮作用47形成内吞小体吞饮作用H+形成内吞小体吞饮作用H+48有囊膜病毒的穿入有囊膜病毒的穿入49穿入（无囊膜病毒）直接穿入穿入（无囊膜病毒）直接穿入50穿入（无囊膜病毒）直接穿入穿入（无囊膜病毒）直接穿入51穿入（无囊膜病毒）吞饮作用H+穿入（无囊膜病毒）吞饮作用H+52脱壳多数病毒的脱壳与穿入同时进行的。不同病毒的脱壳又各有特色，例如：新城疫病毒经溶酶体酶的作用脱壳。痘病毒的脱壳分为两个阶段进行。呼肠孤病毒只脱去外层衣壳，内层衣壳不脱去，形成亚病毒颗粒。小RNA病毒在吸附的同时，就发生衣壳蛋白消失，即吸附的同时就发生了脱壳。脱壳多数病毒的脱壳与穿入同时进行的。53脱壳脱壳54生物合成生物合成即病毒遗传信息的控制下合成病毒的各种组成成分。早期:病毒特异性酶的合成病毒核酸复制病毒结构蛋白质合成生物合成生物合成即病毒遗传信息的控制下合成病毒的各种组成成分55生物合成有囊膜病毒的生物合成无囊膜病毒的生物合成生物合成有囊膜病毒的生物合成无囊膜病毒的生物合成56装配新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的细胞内组装成新的子代病毒。装配新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的细胞内组装成新的子代病57成熟与释放成熟由新合成的病毒成分装配成完整的病毒。释放无囊膜的病毒：细胞完全裂解释放有囊膜的病毒：出芽释放成熟与释放成熟58成熟与释放有囊膜病毒的释放囊膜来自于细胞膜有囊膜病毒的释放囊膜来自于细胞核核膜无囊膜病毒的释放成熟与释放有囊膜病毒的释放有囊膜病毒的释放无囊膜病毒的释放59塞里基森林病毒的出芽释放塞里基森林病毒的出芽释放60HIV的出芽与成熟HIV的出芽与成熟61艾滋病毒的出芽释放正常的T.C艾滋病毒感染的T.C艾滋病毒的出芽释放艾滋病毒的出芽释放正常的T.C艾滋病毒感染的T.C艾滋病毒的62病毒复制的过程有囊膜病毒的复制病毒复制的过程有囊膜病毒的复制63病毒的培养方式动物接种禽胚接种组织培养病毒的培养方式动物接种64动物接种动物选择本动物实验动物最理想的是GF动物或SPF动物。病毒增殖结果观察动物死亡、症状、病变等。动物接种的用途病原学检查，传染病诊断，疫苗生产及疫苗效力检验等。动物接种动物选择65禽胚培养禽胚选择最好选择SPF胚病毒增殖结果观察常见病变有死亡，充血、出血或出现坏死灶，禽胚畸形，绒毛尿囊膜上出现痘斑。接种途径禽胚接种的用途家禽传染病的诊断、病毒病原性的研究以及生产诊断抗原和疫苗等方面。禽胚培养禽胚选择66禽胚接种途径绒毛尿囊膜接种10～13日龄鸡胚，如传喉。尿囊腔接种9～12日龄鸡胚，如新城疫。卵黄囊接种6～8日龄鸡胚，主要用于虫媒披膜病毒、鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的增殖。羊膜腔接种10～11日龄鸡胚，主要用于正粘病毒和副粘病毒。1．气室2．卵壳3．卵黄囊4．卵白5．尿囊腔6．绒毛尿囊7．胚胎8．羊水腔9．胚外体液膜用的鸡胚禽胚接种途径绒毛尿囊膜接种1．气室2．卵壳3．卵67组织培养组织培养细胞培养细胞选择增殖结果观察优缺点应用于病毒研究、疫苗生产和病毒病诊断的良好方法组织培养组织培养68细胞选择兽医上通常用的细胞：CEF（鸡胚成纤维细胞）、PK-15株（猪肾上皮细胞）、K-L株（中国仓鼠肺）、D-K株（中国仓鼠肾）等。细胞选择兽医上通常用的细胞：CEF（鸡胚成纤维细胞）、PK-69增殖结果观察病毒的致细胞病变作用（简称CPE），借助倒置显微镜即可观察到。有的细胞不发生病变，但培养物出现红细胞吸附及血凝现象