临床微生物学标本的采集-课件

临床微生物学标本的采集临床微生物学标本的采集1失误的不同分布

分析前时期约占总失误的55%,分析时期约占总失误的4%,分析后时期约占总失误的41%。4%41%55%失误的不同分布

分析前时期约占总失误的55%,分析时期约占总2标本质量的好坏直截了当影响诊断结果的正误,因此在标本采集、送检、保存等各个环节都要规范操作,严格控制,是确保实验结果准确可靠的前提。标本质量的好坏直截了当影响诊断结果的正误,因此在标本采集、送3标本采集的一般原则:

1、早期采集:采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时,而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集。

标本采集的一般原则:

1、早期采集:采集时间最好是病程早期42、无菌采集:采集的标本应无外源性污染。在采集血液、脑脊液、胸腔积液、关节液等无菌标本时,应注意对局部及周围皮肤的消毒,严格进行无菌操作;关于与外界相通的腔道,如窦道标本应由窦道底部取活组织检查,而不应从窦道口取标本,以免受皮肤表面正常菌群的污染,造成混淆和误诊;2、无菌采集:采集的标本应无外源性污染。在采集血液、脑脊液、5采集的标本均应盛于无菌容器内,盛标本的容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌,或用一次性无菌容器,而不能用消毒剂或酸类处理。采集的标本均应盛于无菌容器内,盛标本的容器须先经高压灭菌、煮63、依照目的菌的特性用不同的方法采集:厌氧菌、需氧或兼性厌氧菌,以及L型菌采纳的方法不同。如尿液标本,疑为厌氧菌感染时,应以无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取;若怀疑是需氧或兼性厌氧菌的感染,可通过自然导尿获取标本。

3、依照目的菌的特性用不同的方法采集:厌氧菌、需氧或兼性厌氧74、采集适量标本:采集量不应过少,而且要有代表性,同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。如伤寒副伤寒患者,发病的第1周应采集血液,第2周应采集粪便和尿液,否则影响细菌检出率。4、采集适量标本:采集量不应过少,而且要有代表性,同时有些标85、安全采集:采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染,同时也要注意安全,防止传播和自身感染。5、安全采集:采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的9一上呼吸道标本

一上呼吸道标本

10标本采集方法:

嘱患者先用清水漱口,由检查者将其舌外拉使悬雍垂尽估计向外牵引,用压舌板将舌向下向外压,用无菌棉拭子越过舌根到咽后壁或悬雍垂的后侧,反复擦拭数次然后送检,拭子应幸免触及舌、口腔粘膜和唾液。

标本采集方法:

嘱患者先用清水漱口,由检查者将其舌外拉使11临床微生物学标本的采集-课件12标本采集注意事项:

1采集时间:应于抗生素应用之前。时间上可无严格限制,但咽部是呼吸和食物的通路,应晨起后采集为佳。

2送检:应马上送检。

标本采集注意事项:

1采集时间:应于抗生素应用之前。时间上13二下呼吸道标本

二下呼吸道标本

14标本质量脓痰粘液样痰唾液or诱导痰(?)血痰标本质量脓痰粘液样痰唾液or诱导痰(?)血痰15用革兰氏染色来评估

呼吸道标本是否合格用革兰氏染色来评估

呼吸道标本是否16痰标本>10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收痰标本>10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收17白细胞>25个/每低倍视野,鳞状上皮细胞<10个/低倍视野为合格标本白细胞>25个/每低倍视野,鳞状上皮细胞<10个/低倍视野为18标本采集方法

1自然咳痰法:晨痰为佳,用温开水漱口数次(为减少口腔正常菌群污染标本),深咳呼吸道深部痰(非后鼻部分泌物、非唾液)留于无菌容器内。关于痰量少或无痰的患者可采纳雾化吸入45℃10％Nacl水溶液,使痰液易于排出。

标本采集方法

1自然咳痰法:晨痰为佳,用温开水漱口数次(为192支气管镜采集法:用支气管镜在肺内病灶附近用导管吸引或用支气管刷直截了当取。

3胃内采痰法:无自觉症状的肺结核病人尤其婴幼儿可不能咳嗽,有时将痰误咽入胃中,可采集胃内容物做结核分支杆菌培养。

2支气管镜采集法:用支气管镜在肺内病灶附近用导管吸引或用支204气管穿刺法:主要用于厌氧菌培养

5小儿取痰法:用弯压舌板向后压舌,将拭子伸入咽部,小儿经压舌刺激咳嗽,可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿可用手指轻叩胸骨柄上方,以诱发咳痰。

4气管穿刺法:主要用于厌氧菌培养

5小儿取痰法:用弯压舌21注意事项:

1晨痰为好。多数病人清晨痰较多,易于采集,且清晨痰含有的病理成分较多,会增加培养的阳性率。

2有1/4-1/2肺部感染患者估计发生菌血症,应同时作血培养。

3在抗菌药物应用之前采集标本。

注意事项:

1晨痰为好。多数病人清晨痰较多,易于采集,且清224、标本采集后应2小时内送检,否则可暂存于4℃冰箱,最长不超过24小时(然而肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛氧菌不喜低温,怀疑其感染者切勿冷藏)。痰培养连续3-4次有意义,每次间隔大于24小时。支气管镜纤刷物和肺泡灌洗液取出后及时送检。4、标本采集后应2小时内送检,否则可暂存于4℃冰箱,最长不超23三尿液标本

三尿液标本

24标本的采集方法:

1清洁中段尿标本,晨尿为佳,嘱咐患者睡前少饮水,保证与上次排尿时间间隔4小时以上。女性采样前用清水冲洗外阴部及尿道口,男性须翻转包皮冲洗,用清水冲洗尿道口,然后收集标本,方法是排尿弃去前段尿,无中断尿流时收集10ml中段尿于无菌容器内送检。于2小时内送检。

标本的采集方法:

1清洁中段尿标本,晨尿为佳,嘱咐患者睡前25该方法简单、易行,是最常用的尿培养标本收集方法,但特别容易受到会阴部细菌污染,应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。该方法简单、易行,是最常用的尿培养标本收集方法,但特别容易受262耻骨上膀胱穿刺:使用无菌注射器直截了当从耻骨上经皮穿入膀胱吸取尿液,是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法,但有一定的痛苦,病人难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。

2耻骨上膀胱穿刺:使用无菌注射器直截了当从耻骨上经皮穿入膀273直截了当导尿:按常规方法对会阴部进行清洗消毒后,用导尿管直截了当经尿道插入膀胱,获取膀胱尿液。可减少尿液标本的污染,准确地反映膀胱感染情况,但有估计将下尿道的细菌引入膀胱,导致继发感染,一般不提倡使用。

3直截了当导尿:按常规方法对会阴部进行清洗消毒后,用导尿管284小儿收集包:关于无控制能力的小儿可应用收集包收集尿液,这种装置由于特别难幸免会阴部菌群污染产生假阳性,因此只有在检验结果为阴性时才有意义。假如检验结果为阳性,应结合临床进行分析,必要时可使用耻骨上膀胱穿刺或导尿法留取尿液进行复查。

4小儿收集包:关于无控制能力的小儿可应用收集包收集尿液,这295留置导尿管收集尿液:利用留置导尿管采集标本时,应先消毒导尿管外部,按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液,操作时应防止混入消毒剂,不能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿管患者,应在更换新尿管时留取尿标本。

5留置导尿管收集尿液:利用留置导尿管采集标本时,应先消毒导306集尿法:尿查抗酸杆菌时,留24小时尿液盛于洁净容器内,取其沉渣10mL送检。

6集尿法:尿查抗酸杆菌时,留24小时尿液盛于洁净容器内,取31标本采集注意事项:

1通常取清晨第一次尿液送检。

2多数药物均通过尿液排泄,因此,不管用何种方法采集尿液均宜在用药之前进行细菌培养。

3尿培养不得加防腐剂或消毒剂。

标本采集注意事项:

1通常取清晨第一次尿液送检。

2多数324标本采集后应2小时内送检,不能送检的4℃保存,最长不超过6小时。当培养出的细菌革兰阴性杆菌>105/ml、革兰阳性球菌>104/ml、真菌>103/ml时有意义,有3种或者3种以上生长时可怀疑污染。如病人有发热伴随症状可同时做血培养。

4标本采集后应2小时内送检,不能送检的4℃保存,最长不超33四大便标本

四大便标本

34标本的采集方法

1自然排便采集法:自然排便后,挑取有脓血、粘液部位的粪便2-3g,液状粪便取絮状物1-3ml盛于无菌的容器中送检。

标本的采集方法

1自然排便采集法:自然排便后,挑取有脓血、352直肠拭子法:适于排便困难者或婴幼儿。可用肥皂水将肛门周围洗净,用无菌盐水、保存液或增菌液湿润的无菌棉拭子插入肛门,成人约4-5cm,儿童约2-3cm,与直肠粘膜表面接触,轻轻转动,放灭菌试管内送检。

2直肠拭子法:适于排便困难者或婴幼儿。可用肥皂水将肛门周围36标本采集注意事项

1采集时间:应在急性期采样,以提高检出率,最好在用药前。

2送检:要采集新鲜标本马上送检。

标本采集注意事项

1采集时间:应在急性期采样,以提高检出率37五血液标本

五血液标本

38关于血培养指征

只有在发热时,才需要进行血培养。

想采就采？关于血培养指征

只有在发热时,才需要进行血培养。

想采就39怀疑患者有血流感染的症状有:

不明原因的发烧(＞38℃)或体温过低(＜36℃)

白细胞增多(＞10000/ul)

粒细胞减少(＜1000/ul)

严重的局部感染(脑膜炎,心内膜炎,肺炎,肾盂肾炎,腹部术后感染等)

休克、寒颤、僵直、心率异常加快、低血压或高血压、呼吸频率加快等。

怀疑患者有血流感染的症状有:

不明原因的发烧(＞38℃)或体40关于采血时机何时采血进行血培养,无特别时间要求。？关于采血时机何时采血进行血培养,无特别时间要求。？41细菌浓度体温血培养采血时机时间(分钟)03060细菌浓度体温血培养采血时机时间(分钟)0306042关于采血套数及部位

为减轻患者痛苦,只从一个穿刺部位采一份血液标本即可。？关于采血套数及部位？43基本注意事项:

成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个,也叫“一份”

注意:一次穿刺采血,算“一套”,采集第二套应从另一个穿刺点获得。

儿童一般只做需氧培养,但仍需从多个部位采集多次。特别患者才考虑厌氧培养。

基本注意事项:

成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各44采血套数采血套数45污染菌致病菌？2－3套血培养,有助于污染的判断。采集1套无法判断是病原菌依然污染菌。污染菌致病菌？2－3套血培养,有助于污染的判断。采集1套无法46关于采血量每瓶采集多少血液无特别要求？关于采血量每瓶采集多少血液无特别要求？47采血量(ml)与检出率的关系血培养物每增加一毫升,真性菌血症成年人微生物的检出率增加3％但并非越多越好,超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤,使肉汤无法有效中和血中的抑制物质(补体、抗体、抗生素)。因此血液与肉汤的最佳比例为1:5－1:10采血量(ml)与检出率的关系血培养物每增加一毫升,真性菌血症48标本的采集方法

防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染是血培养的关键问题,采血前严格执行消毒程序是十分重要的。标本的采集方法

防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染是血培养491皮肤消毒程序:

严格按以下三步法进行:

(1)70%酒精擦拭静脉穿刺部位30s以上。

(2)用碘酊或聚维酮碘(碘伏)棉签消毒皮肤,1-2％碘酊作用30s或聚维酮碘作用60s,从穿刺点向外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上。

(3)70％酒精脱碘。

对碘过敏的病人只能用70%酒精消毒,消毒60s,待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。

1皮肤消毒程序:

严格按以下三步法进行:

(1)70%酒502培养瓶消毒程序

(1)用70％酒精消毒血培养瓶橡皮塞子。

(2)酒精作用60s。

(3)在血液注入血培养瓶之前,用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精,然后注入血液。

2培养瓶消毒程序

(1)用70％酒精消毒血培养瓶橡皮塞子513培养瓶接种程序

抽取血液后,不要换针头,直截了当注入血培养瓶中,轻轻颠倒混匀,以防血液凝固。假如同时作需氧和厌氧培养,应先将标本接种到厌氧瓶中,然后再注入需氧瓶,防止将空气注入厌氧瓶中。

3培养瓶接种程序

抽取血液后,不要换针头,直截了当注入血培52标本采集注意事项

1血培养采集的时间和频率

(1)采血培养应尽量在抗菌药物使用之前,在24h内采集2-3份血培养(一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养),每次2瓶。研究已证实,2-3份血培养足以检测所有的菌血症和真菌血症。

标本采集注意事项

1血培养采集的时间和频率

(1)采血培53(2)入院前2周内接受抗菌药物治疗的患者,可连续3天采集,每天采集2份,

(3)对间歇性寒战或发热的患者,应在寒战或体温高峰到来之前0、5h采集血液,或于寒战或发热后1h采集,因为发热时血液中估计没有细菌。

(2)入院前2周内接受抗菌药物治疗的患者,可连续3天采集54(4)可疑为急性原发性菌血症、真菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎的患者,应在不同部位采集2-3份血培养。

(5)不明原因发热,如隐性脓肿、伤寒热和波浪热,先采集2-3份血标本,24-36h后估计体温升高之前,再采集2份以上。

(4)可疑为急性原发性菌血症、真菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关55(6)可疑为菌血症或真菌血症,但血培养持续阴性,应改变血培养方法,选择其它种类的培养瓶,如高渗培养瓶,中和抗生素培养瓶,结核菌培养瓶等,以获得罕见的或苛氧的微生物。

(6)可疑为菌血症或真菌血症,但血培养持续阴性,应改变血培56(7)可疑为细菌性心内膜炎者,在1-2h内多部位采集3份血标本,假如24h阴性,再采取3份以上的血标本。

(7)可疑为细菌性心内膜炎者,在1-2h内多部位采集3572采血量

成人:推荐每个血培养瓶应加的血量为5-10ml,血液和肉汤比为1:5-10(体积:体积)。骨髓采量一般为1-2ml。

儿童:因特别难获得大量的血液,一般静脉采血3-5ml用于血培养。

2采血量

成人:推荐每个血培养瓶应加的血量为5-10ml,58标本的保存

接种标本后应马上送检,如不能马上送检,室温保存,但不能超过12小时。切勿冷藏,因为某些苛氧菌可在冰箱温度中死亡,而使培养阳性率下降。在运往实验室的途中假如天气寒冷,应采取一定的保温措施。

标本的保存

接种标本后应马上送检,如不能马上送检,室温保存,59六脑脊液六脑脊液60标本的采集方法

用腰穿的方法采集脑脊液,假如用于检测细菌或病毒,脑脊液量应大于或等于1ml,假如用于检测真菌或抗酸杆菌,脑脊液量应大于或等于2ml。标本采集容器为无菌试管或小瓶。标本的采集方法

用腰穿的方法采集脑脊液,假如用于检测细菌或61标本采集注意事项

1采集时间:应马上采集,且最好于抗生素使用之前。

2送检:穿刺过程中要严格无菌操作,防止污染。收集标本后,常温下15分钟内送到实验室。如不能可在25-37度保存,保存时间应小于2小时,绝不可冷藏。如只做培养可直截了当注入血培养瓶内,及时送检。

标本采集注意事项

1采集时间:应马上采集,且最好于抗生素使62脑脊液标本不可放冰箱保存,否则会使一些细菌漏检(如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和嗜血杆菌)。标本运送过程中必须保证其安全,防止溢出,幸免细菌污染。脑脊液标本不可放冰箱保存,否则会使一些细菌漏检(如脑膜炎奈瑟63七胸腹水胆汁心包液

关节液鞘膜积液穿刺液七胸腹水胆汁心包液

关节液鞘膜积液穿刺液64标本的采集方法

1首先用2%碘酊消毒穿刺要通过的皮肤。

2用针穿刺法或外科手术引流法采集标本,然后放入无菌试管或小瓶内。为防止凝固,应在试管中先加入灭菌肝素。

3尽估计采取更多的液体,至少为1ml。标本的采集方法

1首先用2%碘酊消毒穿刺要通过的皮肤。65标本采集注意事项

1采集时间:怀疑感染存在,应尽早采集,一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后1-2日采集。

2送检:应在常温下15分钟内送到实验室,在常温下可保存24小时。假如做真菌培养,只能放4℃保存。

标本采集注意事项

1采集时间:怀疑感染存在,应尽早采集663

如怀疑厌氧菌感染则保证不被正常菌群污染,并尽量幸免接触空气,用针筒抽取抽出后排出一滴标本于酒精棉球上,然后用橡皮塞封住针头,及时送检。

3如怀疑厌氧菌感染则保证不被正常菌群污染,并尽量幸免接触空67八生殖道标本八生殖道标本68应依照感染的部位和估计的病原体决定用于病原学诊断的标本种类、采集部位和采集方法等。由于正常菌群的存在,因此在采集标本时应注意尽量减少和幸免正常菌群的污染。

应依照感染的部位和估计的病原体决定用于病原学诊断的标本种类、691、生殖器溃疡标本:用无菌盐水清洗溃疡面并用无菌手术刀清除坏死组织和覆盖的分泌物,暴露出溃疡基底;待渗出物积聚较明显时,轻压溃疡基地并用拭子或吸管采集渗出物;疑有肉芽肿荚膜杆菌感染时可在溃疡边缘取肉芽肿组织标本。

1、生殖器溃疡标本:用无菌盐水清洗溃疡面并用无菌手术刀清除坏702、宫颈标本:用无菌生理盐水湿润窥阴器(不用润滑油)暴露宫颈;用拭子清除阴道和宫颈局部分泌物,弃拭子;轻压宫颈以使宫颈分泌物流出,用拭子采集分泌物或用专用拭子插入宫颈内口1-2cm,旋转数周后停留20s,以充分吸附分泌物,拔出拭子,注意不要将拭子接触阴道壁。

2、宫颈标本:用无菌生理盐水湿润窥阴器(不用润滑油)暴露宫颈713、阴道标本:先用拭子清除阴道表面分泌物,弃拭子;在后穹窿或阴道上端用无菌拭子或吸管采集黏膜分泌物;B群链球菌筛查培养应在阴道口(和/或直肠肛门部位)采集拭子标本。

3、阴道标本:先用拭子清除阴道表面分泌物,弃拭子;在后穹窿或724、子宫内膜标本:用无菌生理盐水湿润窥阴器(不用润滑油);用拭子清除阴道和宫颈局部分泌物,弃拭子;用双腔的真空吸引器吸取标本或用拭子取子宫内膜标本,注意防止宫颈和阴道正常菌群的污染。

4、子宫内膜标本:用无菌生理盐水湿润窥阴器(不用润滑油);用735、腹腔炎性渗出物标本:通过后穹隆穿刺术获得;亦可直截了当在手术过程中获得。

6、前庭大腺标本:用碘伏等无刺激性消毒液消毒皮肤,急性感染用拭子采取腺管分泌物;脓肿形成时,用注射器吸取脓液。

5、腹腔炎性渗出物标本:通过后穹隆穿刺术获得;亦可直截了当在747、尿道分泌物:标本采集应最少在病人排尿1h后进行,先用无菌拭子清除尿道口分泌物,用另一无菌拭子采集尿道分泌物,分泌物过少时女性可经阴道按摩尿道,男性可从阴茎的腹面向龟头方向按摩,使分泌物溢出。如不能获得尿道分泌物,可将尿道拭子插入尿道约2cm左右,轻轻转动后取出。

7、尿道分泌物:标本采集应最少在病人排尿1h后进行,先用无菌758、前列腺液:被检者前1周内停服抗生素,外阴消毒后,留取排出的首段尿液10ml为第一份标本,接着排尿200ml后,留取10ml尿液为第二份标本,即行前列腺按摩,收集按摩液为前列腺液,随之马上排尿,收集首段尿液10ml为第三份标本。4份标本均送细菌培养、菌落计数和药敏试验。

8、前列腺液:被检者前1周内停服抗生素,外阴消毒后,留取排出769、淋球菌培养标本应马上送检或床旁接种,勿放冰箱保存。淋病奈瑟菌感染如能同时采集直肠标本会增加阳性率,其采集方法为将拭子插入肛管2、5cm左右,穿过肛门括约肌后转动拭子,停留10-30s,取出的粪便标本不能受到污染。如有尿道症状时可采集尿道分泌物。

9、淋球菌培养标本应马上送检或床旁接种,勿放冰箱保存。淋病奈7710、支原体:男性:用细的无菌棉拭子沾取无菌盐水少许深入尿道口内2、5-3cm。女性:用无菌拭子抹去宫颈口粘液,然后用新的拭子插入宫颈管l-2cm旋转取材。支原体培养取分泌物时,持拭子用力擦下尽估计多的细胞。尚可用前列腺液、精液、尿液离心沉淀物作标本。支原体对干、热抵抗力差,标本采集后应尽快接种支原体运送培养基送检。

10、支原体:男性:用细的无菌棉拭子沾取无菌盐水少许深入尿道78九分泌物标本

九分泌物标本

791、眼分泌物采集:先用无菌生理盐水冲洗眼部,然后用棉拭子拭干,再用无菌棉拭子采集分泌物。

2、耳、鼻咽分泌物采集:直截了当用拭子在病灶部位擦拭数次,切勿接触周围粘膜或皮肤。

1、眼分泌物采集:先用无菌生理盐水冲洗眼部,然后用棉拭子拭干803、伤口、创口、开放性感染、溃破的化脓灶:感染部位与外界相通,先用无菌生理盐水冲洗其表面分泌物和杂菌,然后用灭菌棉拭子擦取病灶深部新生组织边缘的分泌物。

3、伤口、创口、开放性感染、溃破的化脓灶:感染部位与外界相通814、脓肿:抽吸前用无菌生理盐水冲去表面分泌物,以幸免污染。闭合性脓肿抽吸脓肿壁,开放性伤口尽量抽吸深部脓液送检。深部脓肿常由包括厌氧菌在内的混合细菌感染所致,应同时作厌氧菌培养。

4、脓肿:抽吸前用无菌生理盐水冲去表面分泌物,以幸免污染。闭825烧伤标本:以无菌棉拭子直截了当采取多个部位创面的脓汁分泌物放入无菌试管中及时送检。

5烧伤标本:以无菌棉拭子直截了当采取多个部位创面的脓汁分泌83十静脉导管标本十静脉导管标本84静脉导管的微生物学培养主要用于检测血流感染是否与导管相关。导管相关性血流感染(CABSI)的定义为:患者在留置导管期间或者拔除导管48小时内发生的原发性,且与其他部位存在的感染无关的血流感染。静脉导管的微生物学培养主要用于检测血流感染是否与导管相关。导85导管相关性血流感染的诊断标准:

参照美国感染病协会、疾病控制中心公布的《血管内导管相关感染处理指南》

(1)具有血管内导管的患者;

(2)具有明确的临床感染表现,如发热、寒战;

(3)不具有其他明确的感染灶;

(4)外周血细菌或真菌培养至少1次(+);

导管相关性血流感染的诊断标准:

参照美国感染病协会、疾病控制86(5)从导管片段和血标本分离出同一病原微生物,包括以下几种情况之一:

①导管远端部分半定量培养≥15个菌落或定量培≥100个菌落;

②从中心静脉导管得到血标本细菌定量≥外周静脉血标本5倍;

③从中心静脉导管得到血标本定性培养呈(+)时间较外周静脉血标本早2h以上。

(5)从导管片段和血标本分离出同一病原微生物,包括以下几种情87临床微生物学标本的采集-课件881、采集方法

(1)常规导管部位皮肤消毒。

(2)无菌方法从病人体内拔出静脉导管,剪下导管尖端5cm,放入无菌瓶中。

(3)马上(15min内)送检,幸免标本干燥。

1、采集方法

(1)常规导管部位皮肤消毒。

(2)无菌方法从892、接种方法

(1)半定量培养法:用无菌镊子将5cm导管在血琼脂平板上来回滚动,然后在二氧化碳孵箱35c过夜培养后如血琼脂平皿上生长15个菌落,提示有潜在导管相关性感染。2、接种方法

(1)半定量培养法:用无菌镊子将5cm导管在血90临床微生物学标本的采集-课件91

(2)定量培养法:将导管放入无菌杯中,抽吸1ml无菌盐水反复冲洗,吸出0、1ml涂布接种,次日菌落数×10即为计数结果。菌落计数≥100个菌落即可判断为导管相关性血流感染。

(2)定量培养法:将导管放入无菌杯中,抽吸1ml无菌盐水923、导管尖端结合血培养结果的分析血培养

导管半定量法培养菌落数是否CABSI注解1或2套阳性＋15是1或2套阳性－否金葡、念珠菌时不能否认2套阴性＋不论多少否导管定置菌2套阴性－否3、导管尖端结合血培养结果的分析导管半定量法是否CABS934、注意事项

(1)剪下的导管马上接种血平皿,可提高阳性率。

(2)肉汤反复冲洗导管腔内,冲洗液做定量培养。

(3)剪下的导管置不能接种于肉汤增菌液或培养瓶中,因为此法不能区分导管感染菌与少量定植菌。

4、注意事项

(1)剪下的导管马上接种血平皿,可提高阳性率。945、防治措施

马上拔管是最有效的治疗措施。拔管就能使一部分感染治愈,其余病例在拔管后使用的抗菌药物恰当,则感染也可得到有效控制。换部位重新置管只能作为不得已情况下的权宜之计。因为血流中的病原容易挂在新插入的管头上,并在纤维蛋白鞘的保护下逃避机体免疫系统及抗菌药物的攻击,经过一段时间的生长繁殖就不断向血流中释放病菌,成为新的感染源。

5、防治措施

马上拔管是最有效的治疗措施。拔管就能使一部分感95十一引流液十一引流液96感谢您的聆听！感谢您的聆听！97临床微生物学标本的采集临床微生物学标本的采集98失误的不同分布

分析前时期约占总失误的55%,分析时期约占总失误的4%,分析后时期约占总失误的41%。4%41%55%失误的不同分布

分析前时期约占总失误的55%,分析时期约占总99标本质量的好坏直截了当影响诊断结果的正误,因此在标本采集、送检、保存等各个环节都要规范操作,严格控制,是确保实验结果准确可靠的前提。标本质量的好坏直截了当影响诊断结果的正误,因此在标本采集、送100标本采集的一般原则:

1、早期采集:采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时,而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集。

标本采集的一般原则:

1、早期采集:采集时间最好是病程早期1012、无菌采集:采集的标本应无外源性污染。在采集血液、脑脊液、胸腔积液、关节液等无菌标本时,应注意对局部及周围皮肤的消毒,严格进行无菌操作;关于与外界相通的腔道,如窦道标本应由窦道底部取活组织检查,而不应从窦道口取标本,以免受皮肤表面正常菌群的污染,造成混淆和误诊;2、无菌采集:采集的标本应无外源性污染。在采集血液、脑脊液、102采集的标本均应盛于无菌容器内,盛标本的容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌,或用一次性无菌容器,而不能用消毒剂或酸类处理。采集的标本均应盛于无菌容器内,盛标本的容器须先经高压灭菌、煮1033、依照目的菌的特性用不同的方法采集:厌氧菌、需氧或兼性厌氧菌,以及L型菌采纳的方法不同。如尿液标本,疑为厌氧菌感染时,应以无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取;若怀疑是需氧或兼性厌氧菌的感染,可通过自然导尿获取标本。

3、依照目的菌的特性用不同的方法采集:厌氧菌、需氧或兼性厌氧1044、采集适量标本:采集量不应过少,而且要有代表性,同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。如伤寒副伤寒患者,发病的第1周应采集血液,第2周应采集粪便和尿液,否则影响细菌检出率。4、采集适量标本:采集量不应过少,而且要有代表性,同时有些标1055、安全采集:采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染,同时也要注意安全,防止传播和自身感染。5、安全采集:采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的106一上呼吸道标本

一上呼吸道标本

107标本采集方法:

嘱患者先用清水漱口,由检查者将其舌外拉使悬雍垂尽估计向外牵引,用压舌板将舌向下向外压,用无菌棉拭子越过舌根到咽后壁或悬雍垂的后侧,反复擦拭数次然后送检,拭子应幸免触及舌、口腔粘膜和唾液。

标本采集方法:

嘱患者先用清水漱口,由检查者将其舌外拉使108临床微生物学标本的采集-课件109标本采集注意事项:

1采集时间:应于抗生素应用之前。时间上可无严格限制,但咽部是呼吸和食物的通路,应晨起后采集为佳。

2送检:应马上送检。

标本采集注意事项:

1采集时间:应于抗生素应用之前。时间上110二下呼吸道标本

二下呼吸道标本

111标本质量脓痰粘液样痰唾液or诱导痰(?)血痰标本质量脓痰粘液样痰唾液or诱导痰(?)血痰112用革兰氏染色来评估

呼吸道标本是否合格用革兰氏染色来评估

呼吸道标本是否113痰标本>10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收痰标本>10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收114白细胞>25个/每低倍视野,鳞状上皮细胞<10个/低倍视野为合格标本白细胞>25个/每低倍视野,鳞状上皮细胞<10个/低倍视野为115标本采集方法

1自然咳痰法:晨痰为佳,用温开水漱口数次(为减少口腔正常菌群污染标本),深咳呼吸道深部痰(非后鼻部分泌物、非唾液)留于无菌容器内。关于痰量少或无痰的患者可采纳雾化吸入45℃10％Nacl水溶液,使痰液易于排出。

标本采集方法

1自然咳痰法:晨痰为佳,用温开水漱口数次(为1162支气管镜采集法:用支气管镜在肺内病灶附近用导管吸引或用支气管刷直截了当取。

3胃内采痰法:无自觉症状的肺结核病人尤其婴幼儿可不能咳嗽,有时将痰误咽入胃中,可采集胃内容物做结核分支杆菌培养。

2支气管镜采集法:用支气管镜在肺内病灶附近用导管吸引或用支1174气管穿刺法:主要用于厌氧菌培养

5小儿取痰法:用弯压舌板向后压舌,将拭子伸入咽部,小儿经压舌刺激咳嗽,可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿可用手指轻叩胸骨柄上方,以诱发咳痰。

4气管穿刺法:主要用于厌氧菌培养

5小儿取痰法:用弯压舌118注意事项:

1晨痰为好。多数病人清晨痰较多,易于采集,且清晨痰含有的病理成分较多,会增加培养的阳性率。

2有1/4-1/2肺部感染患者估计发生菌血症,应同时作血培养。

3在抗菌药物应用之前采集标本。

注意事项:

1晨痰为好。多数病人清晨痰较多,易于采集,且清1194、标本采集后应2小时内送检,否则可暂存于4℃冰箱,最长不超过24小时(然而肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛氧菌不喜低温,怀疑其感染者切勿冷藏)。痰培养连续3-4次有意义,每次间隔大于24小时。支气管镜纤刷物和肺泡灌洗液取出后及时送检。4、标本采集后应2小时内送检,否则可暂存于4℃冰箱,最长不超120三尿液标本

三尿液标本

121标本的采集方法:

1清洁中段尿标本,晨尿为佳,嘱咐患者睡前少饮水,保证与上次排尿时间间隔4小时以上。女性采样前用清水冲洗外阴部及尿道口,男性须翻转包皮冲洗,用清水冲洗尿道口,然后收集标本,方法是排尿弃去前段尿,无中断尿流时收集10ml中段尿于无菌容器内送检。于2小时内送检。

标本的采集方法:

1清洁中段尿标本,晨尿为佳,嘱咐患者睡前122该方法简单、易行,是最常用的尿培养标本收集方法,但特别容易受到会阴部细菌污染,应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。该方法简单、易行,是最常用的尿培养标本收集方法,但特别容易受1232耻骨上膀胱穿刺:使用无菌注射器直截了当从耻骨上经皮穿入膀胱吸取尿液,是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法,但有一定的痛苦,病人难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。

2耻骨上膀胱穿刺:使用无菌注射器直截了当从耻骨上经皮穿入膀1243直截了当导尿:按常规方法对会阴部进行清洗消毒后,用导尿管直截了当经尿道插入膀胱,获取膀胱尿液。可减少尿液标本的污染,准确地反映膀胱感染情况,但有估计将下尿道的细菌引入膀胱,导致继发感染,一般不提倡使用。

3直截了当导尿:按常规方法对会阴部进行清洗消毒后,用导尿管1254小儿收集包:关于无控制能力的小儿可应用收集包收集尿液,这种装置由于特别难幸免会阴部菌群污染产生假阳性,因此只有在检验结果为阴性时才有意义。假如检验结果为阳性,应结合临床进行分析,必要时可使用耻骨上膀胱穿刺或导尿法留取尿液进行复查。

4小儿收集包:关于无控制能力的小儿可应用收集包收集尿液,这1265留置导尿管收集尿液:利用留置导尿管采集标本时,应先消毒导尿管外部,按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液,操作时应防止混入消毒剂,不能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿管患者,应在更换新尿管时留取尿标本。

5留置导尿管收集尿液:利用留置导尿管采集标本时,应先消毒导1276集尿法:尿查抗酸杆菌时,留24小时尿液盛于洁净容器内,取其沉渣10mL送检。

6集尿法:尿查抗酸杆菌时,留24小时尿液盛于洁净容器内,取128标本采集注意事项:

1通常取清晨第一次尿液送检。

2多数药物均通过尿液排泄,因此,不管用何种方法采集尿液均宜在用药之前进行细菌培养。

3尿培养不得加防腐剂或消毒剂。

标本采集注意事项:

1通常取清晨第一次尿液送检。

2多数1294标本采集后应2小时内送检,不能送检的4℃保存,最长不超过6小时。当培养出的细菌革兰阴性杆菌>105/ml、革兰阳性球菌>104/ml、真菌>103/ml时有意义,有3种或者3种以上生长时可怀疑污染。如病人有发热伴随症状可同时做血培养。

4标本采集后应2小时内送检,不能送检的4℃保存,最长不超130四大便标本

四大便标本

131标本的采集方法

1自然排便采集法:自然排便后,挑取有脓血、粘液部位的粪便2-3g,液状粪便取絮状物1-3ml盛于无菌的容器中送检。

标本的采集方法

1自然排便采集法:自然排便后,挑取有脓血、1322直肠拭子法:适于排便困难者或婴幼儿。可用肥皂水将肛门周围洗净,用无菌盐水、保存液或增菌液湿润的无菌棉拭子插入肛门,成人约4-5cm,儿童约2-3cm,与直肠粘膜表面接触,轻轻转动,放灭菌试管内送检。

2直肠拭子法:适于排便困难者或婴幼儿。可用肥皂水将肛门周围133标本采集注意事项

1采集时间:应在急性期采样,以提高检出率,最好在用药前。

2送检:要采集新鲜标本马上送检。

标本采集注意事项

1采集时间:应在急性期采样,以提高检出率134五血液标本

五血液标本

135关于血培养指征

只有在发热时,才需要进行血培养。

想采就采？关于血培养指征

只有在发热时,才需要进行血培养。

想采就136怀疑患者有血流感染的症状有:

不明原因的发烧(＞38℃)或体温过低(＜36℃)

白细胞增多(＞10000/ul)

粒细胞减少(＜1000/ul)

严重的局部感染(脑膜炎,心内膜炎,肺炎,肾盂肾炎,腹部术后感染等)

休克、寒颤、僵直、心率异常加快、低血压或高血压、呼吸频率加快等。

怀疑患者有血流感染的症状有:

不明原因的发烧(＞38℃)或体137关于采血时机何时采血进行血培养,无特别时间要求。？关于采血时机何时采血进行血培养,无特别时间要求。？138细菌浓度体温血培养采血时机时间(分钟)03060细菌浓度体温血培养采血时机时间(分钟)03060139关于采血套数及部位

为减轻患者痛苦,只从一个穿刺部位采一份血液标本即可。？关于采血套数及部位？140基本注意事项:

成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个,也叫“一份”

注意:一次穿刺采血,算“一套”,采集第二套应从另一个穿刺点获得。

儿童一般只做需氧培养,但仍需从多个部位采集多次。特别患者才考虑厌氧培养。

基本注意事项:

成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各141采血套数采血套数142污染菌致病菌？2－3套血培养,有助于污染的判断。采集1套无法判断是病原菌依然污染菌。污染菌致病菌？2－3套血培养,有助于污染的判断。采集1套无法143关于采血量每瓶采集多少血液无特别要求？关于采血量每瓶采集多少血液无特别要求？144采血量(ml)与检出率的关系血培养物每增加一毫升,真性菌血症成年人微生物的检出率增加3％但并非越多越好,超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤,使肉汤无法有效中和血中的抑制物质(补体、抗体、抗生素)。因此血液与肉汤的最佳比例为1:5－1:10采血量(ml)与检出率的关系血培养物每增加一毫升,真性菌血症145标本的采集方法

防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染是血培养的关键问题,采血前严格执行消毒程序是十分重要的。标本的采集方法

防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染是血培养1461皮肤消毒程序:

严格按以下三步法进行:

(1)70%酒精擦拭静脉穿刺部位30s以上。

(2)用碘酊或聚维酮碘(碘伏)棉签消毒皮肤,1-2％碘酊作用30s或聚维酮碘作用60s,从穿刺点向外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上。

(3)70％酒精脱碘。

对碘过敏的病人只能用70%酒精消毒,消毒60s,待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。

1皮肤消毒程序:

严格按以下三步法进行:

(1)70%酒1472培养瓶消毒程序

(1)用70％酒精消毒血培养瓶橡皮塞子。

(2)酒精作用60s。

(3)在血液注入血培养瓶之前,用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精,然后注入血液。

2培养瓶消毒程序

(1)用70％酒精消毒血培养瓶橡皮塞子1483培养瓶接种程序

抽取血液后,不要换针头,直截了当注入血培养瓶中,轻轻颠倒混匀,以防血液凝固。假如同时作需氧和厌氧培养,应先将标本接种到厌氧瓶中,然后再注入需氧瓶,防止将空气注入厌氧瓶中。

3培养瓶接种程序

抽取血液后,不要换针头,直截了当注入血培149标本采集注意事项

1血培养采集的时间和频率

(1)采血培养应尽量在抗菌药物使用之前,在24h内采集2-3份血培养(一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养),每次2瓶。研究已证实,2-3份血培养足以检测所有的菌血症和真菌血症。

标本采集注意事项

1血培养采集的时间和频率

(1)采血培150(2)入院前2周内接受抗菌药物治疗的患者,可连续3天采集,每天采集2份,

(3)对间歇性寒战或发热的患者,应在寒战或体温高峰到来之前0、5h采集血液,或于寒战或发热后1h采集,因为发热时血液中估计没有细菌。

(2)入院前2周内接受抗菌药物治疗的患者,可连续3天采集151(4)可疑为急性原发性菌血症、真菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎的患者,应在不同部位采集2-3份血培养。

(5)不明原因发热,如隐性脓肿、伤寒热和波浪热,先采集2-3份血标本,24-36h后估计体温升高之前,再采集2份以上。

(4)可疑为急性原发性菌血症、真菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关152(6)可疑为菌血症或真菌血症,但血培养持续阴性,应改变血培养方法,选择其它种类的培养瓶,如高渗培养瓶,中和抗生素培养瓶,结核菌培养瓶等,以获得罕见的或苛氧的微生物。

(6)可疑为菌血症或真菌血症,但血培养持续阴性,应改变血培153(7)可疑为细菌性心内膜炎者,在1-2h内多部位采集3份血标本,假如24h阴性,再采取3份以上的血标本。

(7)可疑为细菌性心内膜炎者,在1-2h内多部位采集31542采血量

成人:推荐每个血培养瓶应加的血量为5-10ml,血液和肉汤比为1:5-10(体积:体积)。骨髓采量一般为1-2ml。

儿童:因特别难获得大量的血液,一般静脉采血3-5ml用于血培养。

2采血量

成人:推荐每个血培养瓶应加的血量为5-10ml,155标本的保存

接种标本后应马上送检,如不能马上送检,室温保存,但不能超过12小时。切勿冷藏,因为某些苛氧菌可在冰箱温度中死亡,而使培养阳性率下降。在运往实验室的途中假如天气寒冷,应采取一定的保温措施。

标本的保存

接种标本后应马上送检,如不能马上送检,室温保存,156六脑脊液六脑脊液157标本的采集方法

用腰穿的方法采集脑脊液,假如用于检测细菌或病毒,脑脊液量应大于或等于1ml,假如用于检测真菌或抗酸杆菌,脑脊液量应大于或等于2ml。标本采集容器为无菌试管或小瓶。标本的采集方法

用腰穿的方法采集脑脊液,假如用于检测细菌或158标本采集注意事项

1采集时间:应马上采集,且最好于抗生素使用之前。

2送检:穿刺过程中要严格无菌操作,防止污染。收集标本后,常温下15分钟内送到实验室。如不能可在25-37度保存,保存时间应小于2小时,绝不可冷藏。如只做培养可直截了当注入血培养瓶内,及时送检。

标本采集注意事项

1采集时间:应马上采集,且最好于抗生素使159脑脊液标本不可放冰箱保存,否则会使一些细菌漏检(如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和嗜血杆菌)。标本运送过程中必须保证其安全,防止溢出,幸免细菌污染。脑脊液标本不可放冰箱保存,否则会使一些细菌漏检(如脑膜炎奈瑟160七胸腹水胆汁心包液

关节液鞘膜积液穿刺液七胸腹水胆汁心包液

关节液鞘膜积液穿刺液161标本的采集方法

1首先用2%碘酊消毒穿刺要通过的皮肤。

2用针穿刺法或外科手术引流法采集标本,然后放入无菌试管或小瓶内。为防止凝固,应在试管中先加入灭菌肝素。

3尽估计采取更多的液体,至少为1ml。标本的采集方法

1首先用2%碘酊消毒穿刺要通过的皮肤。162标本采集注意事项

1采集时间:怀疑感染存在,应尽早采集,一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后1-2日采集。

2送检:应在常温下15分钟内送到实验室,在常温下可保存24小时。假如做真菌培养,只能放4℃保存。

标本采集注意事项

1采集时间:怀疑感染存在,应尽早采集1633

如怀疑厌氧菌感染则保证不被正常菌群污染,并尽量幸免接触空气,用针筒抽取抽出后排出一滴标本于酒精棉球上,然后用橡皮塞封住针头,及时送检。

3如怀疑厌氧菌感染则保证不被正常菌群污染,并尽量幸免接触空164八生殖道标本八生殖道标本165应依照感染的部位和估计的病原体决定用于病原学诊断的标本种类、采集部位和采集方法等。由于正常菌群的存在,因此在采集标本时应注意尽量减少和幸免正常菌群的污染。

应依照感染的部位和估计的病原体决定用于病原学诊断的标本种类、1661、生殖器溃疡标本:用无菌盐水清洗溃疡面并用无菌手术刀清除坏死组织和覆盖的分泌物,暴露出溃疡基底;待渗出物积聚较明显时,轻压溃疡基地并用拭子或吸管采集渗出物;疑有肉芽肿荚膜杆菌感染时可在溃疡边缘取肉芽肿组织标本。

1、生殖器溃疡标本:用无菌盐水清洗溃疡面并用无菌手术刀清除坏1672、宫颈标本:用无菌生理盐水湿润窥阴器(不用润滑油)暴露宫颈;用拭子清除阴道和宫颈局部分泌物,弃拭子;轻压宫颈以使宫颈分泌物流出,用拭子采集分泌物或用专用拭子插入宫颈内口1-2cm,旋转数周后停留20s,以充分吸附分泌物,拔出拭子,注意不要将拭子接触阴道壁。

2、宫颈标本:用无菌生理盐水湿润窥阴器(不用润滑油)暴露宫颈1683、阴道标本:先用拭子清除阴道表面分泌物,弃拭子;在后穹窿或阴道上端用无菌拭子或吸管采集黏膜分泌物;B群链球菌筛查培养应在阴道口(和/或直肠肛门部位)采集拭子标本。

3、阴道标本:先用拭子清除阴道表面分泌物,弃拭子;在后穹窿或1694、子宫内膜标本:用无菌生理盐水湿润窥阴器(不用润滑油);用拭子清除阴道和宫颈局部分泌物,弃拭子;用双腔的真空吸引器吸取标本或用拭子取子宫内膜标本,注意防止宫颈和阴道正常菌群的污染。

4、子宫内膜标本:用无菌生理盐水湿润窥阴器(不用润滑油);用1705、腹腔炎性渗出物标本:通过后穹隆穿刺术获得;亦可直截了当在手术过程中获得。

6、前庭大腺标本:用碘伏等无刺激性消毒液消毒皮肤,急性感染用拭子采取腺管分泌物;脓肿形成时,用注射器吸取脓液。

5、腹腔炎性渗出物标本:通过后穹隆穿刺术获得;亦可直截了当在1717、尿道分泌物:标本采集应最少在病人排尿1h后进行,先用无菌拭子清除尿道口分泌物,用另一无菌拭子采集尿道分泌物,分泌物过少时女性可经阴道按摩尿道,男性可从阴茎的腹面向龟头方向按摩,使分泌物溢出。如不能获得尿道分泌物,可将尿道拭子插入尿道约2cm左右,轻轻转动后取出。

7、尿道分泌物:标本采集应最少在病人排尿1h后进行,先用无菌1728、前列腺液:被检者前1周内停服抗生素,外阴消毒后,留取排出的首段尿液10ml为第一份标本,接着排尿200ml后,留取10ml尿液为第二份标本,即行前列腺按摩,收集按摩液为前列腺液,随之马上排尿,收集首段尿液10ml为第三份标本。4份标本均送细菌培养、菌落计数和药敏试验。

8、前列腺液:被检者前1周内停服抗生素,外阴消毒后,留取排出1739、淋球菌培养标本应马上送检或床旁接种,勿放冰箱保存。淋病奈瑟菌感染如能同时采集直肠标本会增加阳性率,其采集方法为将拭子插入肛管2、5cm左右,穿过肛门括约肌后转动拭子,停留10-30s,取出的粪便标本不能受到污染。如有尿道症状时可采集尿道分泌物。

9、淋球菌培养标本应马上送检或床旁接种,勿放冰箱保存。淋病奈17410、支原体:男性:用细的无