文档：临床免疫学检验(理论)核心考点整理

杂交瘤技术【原理】以聚乙二醇）（HAT和单个细胞培养（克隆化，最终获得机能产生所需单克隆抗体又能长期体外繁殖的杂交瘤细（一）小鼠骨髓瘤细胞HGPRT或TK的缺陷株；④能与B⑤融合率高。目前最常用的是NS-1和SP2/O细胞株（二）免疫脾细胞多采用与骨髓瘤细胞同源的纯系BALB/c弗氏佐剂。（三）细胞融合是产生杂交瘤细胞的中心环节。一般用分子量1000D1500D4000DPEG作细胞融合剂，30~50基本方法是将骨髓瘤细胞与脾细胞按1:2~0例混合，加入PEG2minPEG融合作用，融合细胞形成具有两个或多个核的异核体，最终产生杂交细胞。（四）杂交瘤细胞的选择性培养肿瘤细胞合成DNA（氨基蝶呤另一条为替代途径，叶酸代谢受阻时，细胞通过HGPRT和TK苷酸，进而合成DNA。HAT培养液含三种成分：次黄嘌呤、氨基蝶呤）和胸腺嘧啶核苷T，经HAT培养液筛选后，只有具备两亲本细胞双重特性的杂交瘤细胞能长期生存并产生抗体，成为制造单克隆抗体的细胞源。细胞类型正常培养细胞TK胞缺陷细HGPRT胞缺陷细杂交瘤细胞正常培养基++++HAT基培养+--+成一定大小的免疫复合物，使反应也出现浊度。精确度高、简便快速、易于自动化【影响因素】1、抗原抗体的比例钩状效应highdosehookeffe：免疫浊度测定，抗原过量导致形成的免疫复合物分子小，发生再解离，浊度下降，光散射减少。2、抗体的质量：特异性强、效价高、亲和力强、R型抗体3、抗原抗体反应的环境：反应液最适pH6.5~8.，离子强度大（常用磷酸盐缓冲液PBS为反应液）4、增浊剂：如聚乙二醇PEG、吐温-20【分类】速率比浊法和终点比浊法；透射免疫浊法和散射免疫比浊法；免疫胶乳比浊法凝集反应与沉淀反应有何异同一、相同点：阶段；③有相同的反应机制和影响因素。二、不同点不同点反应时间稀释对象结果

凝集反应或可溶性抗原致敏的颗粒第一阶段：数秒至数分钟抗体出现凝集块

沉淀反应第一阶段：几秒至几十秒时抗原出现沉淀物时间分辨荧光免疫测定TRFIA命长、自然荧光干扰少、标准曲线范围宽等优点，已在临床检测中广泛使用。【基本原理】1、时间分辨：通常各种组织、蛋白或其他化合物，在激发光照射下都能发出一定波长的自荧1~10n20n（10~10002stokestoke（通常为273nm激发发射光谱不重叠，用简单的滤光片就能把激发光和发射光分开，可消除激发光散射引起的干扰。3613nm10nm615nm±5nm350~600nm615nm±5nm本底荧光。镧系元素的激发光谱则较宽，通常为300~350nm，非常有利于增加激发能，提高检测的灵敏度。4Eu3+1000秒，由光导纤维闪光管的控制系统。比活性是指单位时间内每个标记分子可被探测到的信号量。在测量时间内，Eu3+可被反复激发，每次激发后，他可很快由激发态回到基态，发射荧光；然后又可被重新激发，如此每秒可有1000次激发，这就大大提高了荧光标记物的比活性。5、信号增强：免疫反应完成后，形成Eu3+标记的抗原抗体复合物，其在弱碱性溶液中的激发荧光信号较弱，加入酸性增强液可使Eu3+标记的抗原抗体复合物的pH降至2~3，Eu3+从复合物上完全解离，游离的Eu3+可被增强液中的螯合剂所螯合，在协同剂等成分的作用下，与增强液中的β-二酮体生成以Eu3+为核心的保护性胶态分子团，它是具有高强度荧光的稳定螯合物，信号的增强效果可达上百万倍。（二）标记物和标记方法1、标记物：用于本技术测定的标记物是镧系元素，其中铕）和铽）命特别长且荧光强度高，多用这两元素作为标记物，其中Eu3+镧系元素在游离状态下的荧光相对较弱，与螯合剂如）螯合物后，可使荧光强度增强。螯合物的荧光寿命与配体有关。2（或抗体））-EDTA-EDTA-DTTA和（DTPAEu3+螯合剂可先螯合Eu3+（一步法Eu3+（两步法（牛血清白蛋白，多聚赖氨酸等）接，再标记Eu3+（三）方法类型1Eu3+标记抗体结合，形成固相抗体-待测抗原-Eu3+Eu3+340nmEu3+613nm的荧光。经时间分辨荧光检测仪测定并推算出待检抗原的含量。2Eu3+固相中加入荧光增强液，测定荧光强度，所得荧光强度与待检抗原含量负相关。3、固相抗原竞争法：与固相抗体竞争法类似，只是第一步改成将待检抗原和固相抗原竞争性结合定量的Eu3+标记抗体。（四）方法评价1、优点：灵敏度高，检出下限为10^-18mol/（普通荧光免疫计数仅为10^-8mol/。分析4~5个数量级。标记结合物稳定，有效使用期长。测量快速，易于自动化。本法在灵敏度、稳定性和测量自动化程度等方面均可与RIA法中最有发展前途的一项技术。2酶联免疫吸附试验）（即形成固相抗原或抗体（既保留免疫活性又保留酶的活性（测定其中的抗体或抗原和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体（一）ELISA检测抗原的方法主要有：1、双抗体夹心法：适用于至少两个抗原决定簇）的Ag体复合物，为“双抗体夹心催化底物成为有色产物，根据产物的显色程度进行抗原的定性或定量检测。临床上常用于乙肝表面抗原HBsAg、甲胎蛋白AFP、人绒毛膜促性腺激素HCG等项目的检测。2、双位点一步法：该法是针对抗原分子上两个不同且空间距离较远的抗原决定簇，效应，甚至出现假阴性结果，必要时可将标本适当稀释后重新测定）3、竞争法：适用于小分子Ag（只有一个AD。显色。（二）ELISA检测抗体的方法主要有：1、间接法：检测Ab最常用的方法。常用酶标记羊抗人IgG。2、双抗原夹心法：灵敏度和特异性高于间接法，临床上乙型肝炎表面抗体HBsAb的测定常用此法。3、竞争法：当相应抗原材料中含有难以去除的杂质，不易得到足够的纯化抗原或抗原性质不稳定时，可采用此方法。主要用于测定HBcAb和HBeAb。原理见下：HBcAb的竞争法：先将核心抗原包被在固相载体上形成固相抗原本和酶标记的特异性核心抗体，此时待测标本中的HBcAb与酶标记HBcAb竞争性地与固HBcAb的含量负相关。HBeAbHBeAb包被在固相载体上形成固相抗体，同时加入待测标本和中和抗原HBeAg，此时待测标本中的HBeAb和固相抗体竞争性地结合中和抗原HBeAg，温育后洗涤，加入酶标记的HBeAb，酶标记抗体与结合于固相抗体上的特异性抗原结合，温育后洗涤，加入底物显色，显色强弱与待测标本中HBeAb的含量呈负相关。4、捕获法：又称反向间接法，主要用于血清中特定Ig类别的测定，最常用于病原体急性感染诊断中IgM型抗体检测。原理：首先将针对IgM中所有的IgM（特异非特异）即可被固相抗体捕获。第二步加入特异性抗原，其与固相载体上捕获的IgM特异性抗体结合，再加入针对特异性抗原的酶标记抗体，形成固相抗人μ链IgM-抗原-酶标记抗体复合物，最后加入底物显色，即可对待测标本中抗原特异性IgM进行定性或定量测定。此法临床上常用于病原体急性感染的实验室诊断，如急性甲肝时可检测HAV-IgM抗体，急性乙型肝炎时可检测抗HBc-IgM抗体。电化学发光免疫分析（ECLIA）【原理】是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体（抗原，以三丙胺（TPA）为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应（它包括电化学和化学发光两个过程。在啶钌标记抗体复合物，复合物进入流动室，同时注入TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表TPA在电极表面进行电子转移，产影响标记物的理化特性；③试剂灵敏度高，稳定性好。生物素-亲合素系统【特点】：高特异性、高敏感性、稳定强、实用性强（或分离）节一、应用于固相载体的包被环节链霉亲合素（亲合素）为弱酸性蛋白，可以吸附在固相载体（聚苯乙烯微孔板或纳米微球（或抗体（抗体）通过生物素与固相材料表面的链霉亲合素结合，实现间接包被。此种包被模式不但可增加抗原（或抗体）包被数量，也可减少空间位阻效应，提高抗原（或抗体）的利用效率。此外，若固相材料不与生物素化抗原（或抗体）结合，待生物素化抗原（或抗体）体（或抗原）二、应用于检测系统的信号放大生物素-亲合素系统用于检测信号放大，可提高标记免疫分析的敏感性。基本方式有生物素））素标记在第一抗体上称为直接法，如生物素标记在第二抗体上称为间接法。（酶蛋白4物素，且一个生物素大分子可标记多个生物素而产生级联放大效应，提升检测敏感性。②实际应用中的ABC法：预先按一定比例将亲合素与生物素标记示踪物质（如生物素标记ALP）混合，形成可溶性的亲合素-生物素化酶标复合物，同时确保预留一定位点与生物素化的抗体（或抗原）结合。此种方法能减少操作步骤，又能实现标准化操作（ABC法应用于双抗体夹心ELISA中，形成ABC-ELISA，为常用方法。（（一）斑点金免疫渗滤试验（DIGFA）快速结合并起到浓缩作用，达到快速检测目的（一般5min左右完成）阳性反应在膜上呈现红色斑点。本法简化了操作步骤，达到简便的目的，已成为“床旁检测POCT”的主要方法之一。【方法类型】：中央呈红色斑点（胶体金聚集。②间接法：将抗原包被在硝酸纤维素膜上，依次滴加待测标本、洗涤液和胶体金标记抗人IgG抗体，再加洗涤液洗涤，阳性者即在膜中央呈红色斑点（胶体金聚集的IgG的干扰，易产生假阳性，临床上较少使用。（二）斑点金免疫层析试验（DICA）【原理】是将胶体金标记和蛋白质层析技术相结合的，以硝酸纤维素膜为载体的快速固相DICA中，滴加在膜一端的标本溶液受载体末的毛细管作用向另一端移被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。【方法类型】：双抗体夹心法、竞争法、间接法（三）临床应用及评价1、特点：操作简便、快捷以及操作人员不需技术培训，无需特殊仪器设备，试剂稳定、便于保存等特点。2、灵敏度问题：灵敏度不及酶标法和酶发光免疫测定法，临床应用中应引起高度重视。3、临床应用：临床只能作为定性半定量试验，目前主要应用于正常体液中不存在的物质（如传染病抗原和抗体以及毒品类药物）和正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质（如人绒毛膜促性腺激素HCG。斑点酶免疫吸附试验（Dot-ELISA）【原理】与常规的ELISA-ELISA附力（100%）的硝酸纤维素）NC染色。【技术要点】1、抗原包被膜：加少量（1~2μL）抗原于膜上。由于NC膜吸附力强，故需在包被后进行封闭。2、抗原抗体反应：滴加样品血清，其中的待检抗体即与NC膜上抗原结合；洗涤后再滴加酶标二抗。3、显色反应：滴加能形成不溶有色沉淀的底物溶液（HRP标记物，常用二氨基联苯胺阳性者即可在膜上出现肉眼可见的染色斑点。【方法评价】斑点-ELISA的优点为：ELISA高6~8ELISA约节约10NC膜可长期保存-2℃可长达半年，不影响其活性。免疫印迹试验（IBT）亦称酶联免疫电转移印迹法EITB，通常又称Western-blt性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。【技术要点】1SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS：抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，在不可见（只有染色后才显出电泳区带。2、电转移：将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，选用低电压）电流1~2A，通电45min转移即可完成。此阶段分离效果肉眼仍不可见。3、酶免疫定位：将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜（相当于包被了抗原的固相载体）依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后常用的HRP底物为3,3（呈棕色）或4-1（呈蓝紫色带清晰可辨。并可根据SDS时加入的分子量标准，确定各组分的分子量。【方法学评价】1只有那些能识别耐变形表位的抗体可与抗原结合，所以在该试验中常选用多克隆抗体。2、IBT3、IBT法在临床应用中存在一定局限性。非标记抗体酶免疫组织化学染色抗原联系在一起。该方法避免了酶标记时对抗体的损伤，同时也提高了方法的敏感性【技术类型】（一）过氧化物酶抗过氧化物酶酶）法（抗酶抗体与酶组成可溶性复合物（PAP复合物构，非常稳定。通过桥抗体（第二抗体，将特异性识别组织抗原的第一抗体与PAP起来，此时要求特异性第一抗体与第三抗体的动物种属相同法操作简便，分三步；落的弊端；敏感性高；背景着色淡（二）双桥PAP法该法建立在PAP法的基础上。其基本原理是在PAP法中通过两次连接桥抗体和PAP复合物而建立起来的，通过双桥可结合更多的PAP复合物于抗原分子上，以增强敏感性。这种放大方式重复使用桥抗体，使桥抗体与PAP复合物中抗酶抗体的未饱和Fc段结合，或桥抗体与特异性第一抗体未饱和的Fc段结合。如此对抗原有明显放大作用，对于组织细胞微量抗原的检测又实用价值。（三）碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法）法因部分组织细胞内含内源性过氧化物酶，限制了HRP化学反应。本法是用碱性磷酸酶）代替HRP建立的碱性磷酸酶）法，简称APAAP。其技术要点与PAP法相似。流式细胞术FCM性进行多参数定量分析和分选的新技术。一、细胞分析原理1、样品进入流动室：将悬浮分散的单细胞悬液，经特异荧光染料染色后，放人样品管。在气体压力的作用下，悬浮在样品管中的单细胞悬液形成样品流垂直进入流式细胞仪的流动室，沿流动室的轴心向下流动。23、信号的产生与接收：染色的细胞在测量区受激光照射后发出荧光，同时产生光散射。这就可得到细胞大小和核酸含量等指标。二、细胞分选原理当某类细胞的特性与要分选的细胞相同时分离液法主要用于分离PBMCsl分离时先将分层液置试管底层，然后将肝素抗HanksPBS晰的界面。水平式离心后，离心管中会出现几个不同层次的液体和细胞带：Ficol95%90~9580%25℃时可影响细胞收率。热的蛋白质。补体的三条激活途经比较：经典途径

MBL

旁路途径激活物质

抗原抗体复合物

MBL相关丝氨酸蛋白肽聚糖、酵母多糖、脂酶 多糖起始分子C1qC2C4C3参与成分C1C4C2C3C4C2C3MASPC3BD因子共同末端C5~C9C5~C9C5~C9所需离子Ca2+，Mg2+Ca2+Mg2+C3转化酶C4b2bC4b2bC3bBb（p）C5转化酶C4b2b3bC4b2b3bC3bnBb（p）是否依赖Ab是否否生物学作用参与特异性免疫的效参与非特异性免疫的参与非特异性免疫的应阶段于感染后期发效应阶段于感染早期效应阶段于感染早挥作用 发挥作用 发挥作用乙型肝炎病毒的检验1HBsAg（乙肝病毒表面抗原RIAELISA是乙型肝炎早期诊断的重要指标。目前可采用CLIA对血清中的HBsAg进行定量检测，对肝炎患者动态评价病情与药物疗效很有价值。HBV的外壳部分。血清中检出HBsAgALT升高周，到恢复期HBsAg滴度逐渐降低乃至消失。仅为HBV感染的标志，不反映病毒有无复制、复制程度及预后。2HBsAb（乙肝病毒表面抗体目前常用固相RIA与ELISA法检测之。接受HBVHBsAbHBVHBs以外的标志物，则应视为HBsAb阳性可提示急性感染后的恢复期。3HBeAg（乙肝病毒e抗原：为病毒复制标志，多存在于HBsAg肝患者血清HBeAg持续阳性3在血清中的出现时间稍后于HBsAg，是HBV肝脏损害程度成正比，因此HBeAg是乙肝患者有较强传染性的标志。4HBeAb（乙肝病毒e抗体：多出现于急性肝炎恢复期的患者中，比HBsAb常在HBsAg即将消失或已经消失时检出，可长期存在。当血清HBeAgHBe（但不是保护性抗体HBeAg的血清学转换是指HBeAg含量消失同时伴HBeAb出现，是目前临床上慢性乙肝治疗的近期目标（最初目标是减少乙肝病毒的DNA复制。5HBcAb（乙肝病毒核心抗体）IgMIgG。抗HBcIgM是机体感染后最早在血液中出现的特异抗体，是新近感染或病毒复制的标志。抗HBc-IgG高滴度的HBcAb存在常表示体内有HBV复制。HBcAb阳性时表示乙肝现症感染或既往感染。抗HBc不是保护性抗体，高滴度抗HBc-IgM是急性或近期感染的重要指标，在慢性肝炎活动期也可呈阳性，标志着乙肝病毒在复制，有传染性。抗HBc-IgG可持续存在数年至数十年，是既往感染的标志。大三阳：以上指标中的1、3、5为阳性；小三阳：以上指标中的1、4、5为阳性。6、HBcAb-IgM：是早期HBV感染的特异性血清标志。初次感染早期即上升，数月后无论HBsAg消失与否，HBcAb-IgM表达稳定，对于急性肝炎诊断很有价值。其效价降低常提示预后较好。长期不降至正常范围者，提示有转化为慢性肝炎的可能。7：即乙肝病毒前S1HBVDane粒上，在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面有着十分重要的意义。S1抗原与HBV-DNA、HBeAgS1抗原可以随HBeAgHBeAb阳性的慢性乙肝患者和HBV慢性无症状的携带者中，前S1S1抗原阳性常提示急性乙肝向慢性乙肝的转变。该指标阴转越早、疗程越短，预后也越好。8：即乙肝病毒前S2抗原，其上具有高免疫性的抗原决定簇和多聚蛋白受体，为人T/BHBV了解预后及制备乙肝高效疫苗有重要意义。前S2抗原与HBsAg阳性存在显著相关性。在急性乙肝中，前S2抗原与HBsAg都可作为HBVS2S2HBV的感染，而且对观测疾病预后、药物选择及疗效观察也有作用，是对乙肝两对半的有效补充。以上指标中的1、2、3、4、5、7、8项，在临床上称为乙肝七项~HbsAg HbsAb HbeAg HbeAb HbcAb+-+--+-+-++--++-+-++-+--++-+

临床意义潜伏期或急性乙肝早期急性或慢性感染，以HbcAb-IgM鉴别；病毒复制活跃，传染性强（大三阳）急性HBV感染趋于恢复；慢性乙肝携带者（小三阳）急性HBV感染恢复期，有免疫力乙肝恢复期，已有免疫力过去感染，但无法检出HbsAg；低水平慢性感染；无症状携带者成功接种过乙肝疫苗，或以前感染过HBV，现已康复，有免疫力初次介导组分血管活性胺补体、MACIFN初次介导组分血管活性胺补体、MACIFNIL-4/、eotaxi、PGD2PAF细胞因子体复合物溶酶体酶细胞毒素毒素、炎症介质超敏反应类型I型速发型II型细胞毒型III型免疫复合物型IV型迟发型参与成IgEIgG/MIgGTh1，Th2，CTL分效应细肥大细胞FcR+细胞（吞噬细FcR+细胞巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、胞和成嗜碱性粒细胞胞、NK细胞）补体CTL分PS：II/II超敏反应是AIDIV型超敏反应是排斥反应的机制。常见I型超敏反应性疾病：全身超敏反应（敏性休克，局部性超敏反应（呼吸道过敏反应、消化道过敏反应、皮肤过敏反应）常见II型超敏反应性疾病：输血反应，HDN，AIHA，药物过敏性血细胞减少，肺出血肾炎综合征、甲亢。常见II型超敏反应性疾病：局部免疫复合物病Arhus反应、类Arthu反应合物病（血清病、链球菌感染后的肾小球肾炎、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮SLE）常见IV型超敏反应性疾病：感染性迟发型超敏反应、接触性皮炎、移植排斥反应。新生儿溶血病）母子间血型不合是引起HDN的主要原因。如母亲为Rh阴性血型，胎儿为Rh阳性血型，在首次分娩时，胎儿血进入母体内，母亲被胎儿的Rh阳性红细胞致敏，产生以IgG类为主的RhRhRh抗体便可通过胎盘进入胎儿体内，与其红细胞膜上的RhD抗原结合，使红细胞被溶解破坏（血管外溶血或发生新生儿溶血。初次分娩后，72h内给母体内注射Rh抗体，能及时清除母体内的Rh阳性红细胞，可有效预防再次妊娠时发生HDN。【抗血细胞抗体的检测】抗血细胞抗体大多属于不完全抗体，这种抗体与相应抗原结合后不发生凝集现象。Rh抗体的检测：为防止Rh血型不合所致死胎或HDN的发生，可对孕妇血清或胎儿羊水的Rh抗体进行检测，最为常用的是酶介质法。酶介质法原理：Rh(D)抗体多为IgG与红细胞上的特异性抗原结合。但由于IgG型不完全抗原的两个抗原决定簇的跨度小于红细胞因排斥力而产生的最小间距（250nm，所以不能将相邻的红细胞彼此连接形成肉眼可IgG型不完全抗体在两个红细胞抗原位点间连接，产生肉眼可见的凝集。最常用的酶是1%木瓜菠萝蛋白酶。【临床意义】Rh血型抗原主要有5种，其中D抗原的抗原性最强，出现频率高。凡带有D抗原者称Rh阳性，不带D抗原者为Rh阴性。当Rh阴性的个体受到D抗原的刺激（输血、妊娠、器官移植）后，可产生D抗体，若该个体再次受到D抗原阳性血液就可发生溶血反应。Rh血型不合所致的HDN中，母亲为Rh阴性血型，但体内产生了抗Rh抗体。为及早发Rh16周应作首次Rh抗体检测，6~8202~4Rh抗体滴度≥1:161:32Rh抗体超过1:64即应立即采取措施，如孕妇血浆交换术等。青霉素引起的超敏反应：青霉素可导致全部四型超敏反应。一、I型：全身超敏反应，青霉素可引发过敏性休克（是全身超敏反应中最常见的。IgE抗白可通过交联结合靶细胞表面的特异性IgE二、II型：药物过敏性血细胞减少症从而刺激机体产生抗药物抗原表位的特异性抗体Fc三、III型：类血清病样反应【机制】有时使用大剂量青霉素后可出现，主要临床症状是发热、皮疹（风疹为主、淋巴（及其降解产物）体（机制同上，与体内青霉素（及其降解产物）结合，形成循环免疫复合物所致。四、IV型：接触性皮炎（霉素）可引起。青霉素及其降解产物与体内蛋白质结合，变为完全抗原，致敏T淋巴细胞。当机体再次接触青霉素时，可发生接触性皮炎，出现IV型超敏反应。皮损表现为：红肿、皮疹、水疱，重者可出现剥脱性皮炎。（PIDD所致的疾病。包括：一、原发性B细胞缺陷病包括：B细胞先天发育不全、或不能接受T细胞传递的信号，Ig水平低或缺陷。【检验】主要包括B细胞（及其♘类）数量和功能检测，以及B细胞产物Ig的检测Ig（BrutonSCID和选择性IgM缺陷症B细胞表面膜免疫球蛋白）CD抗原检测。二、原发性T细胞缺陷病包括T细胞的发生分化和功能障碍。【检验】主要包括T细胞（及其♘类）功能和数量的检测（一）功能检测：主要包括体内和体外功能试验1、皮肤试验：主要检测T细胞的迟发型超敏反应能力，常用皮试抗原包括：结核菌素、白色念珠菌素、毛发菌素、链激酶-链道酶（SK-SD）和腮腺炎病毒等。三种以上抗原批示阳性者为正常，少于2种阳性或在48h反应直径＜10mm，则提示免疫缺陷或反应性降低。2、体外试验：通常用PHA刺激淋巴细胞的增殖、转化实验来判断T细胞的功能。（二）T细胞数量及其♘群检测通常应用CD系列单克隆抗体，使用荧光抗体技术或流式细胞仪对T细胞总数及♘群进行检测。最常检测的CD标志：CD3/4/8/25等三、原发性联合免疫缺陷病包括：胸腺、淋巴组织发育不全及Ig四、原发性吞噬细胞缺陷病或粘附功能、杀菌活性等异常导致的疾病（中性粒细胞还原试验、黏附分子检测五、原发性补体缺陷病。【检验】一般认为CH50、C1q、C4、C3、B因子等几项检测可大致反映补体缺陷的情况。继发性免疫缺陷病SIDD诱发因素导致的免疫功能障碍引起的疾病。一、获得性免疫缺陷综合症AIDS：又称艾滋病，是人类免疫缺陷病毒HIV）感染引起的一组综合征，患者的CD4+T统退行性病变。【致病机制】1HIV入侵靶细胞的机制：分子是HIV糖蛋白的特异性受体，故其主要侵犯CD4+T细胞（树突状神经胶质细胞也是其重要的靶细胞。HIV通过gp120与靶细胞表面的CD4体（CXCR4/5）结合，再由gp412HIV损伤感染的CD4+T细胞：CD4+T细胞。3、HIV可通过各种机制逃避免疫识别攻击【免疫学特征】1、CD4+T细胞数量显著减少、功能严重障碍，CD4+/CD8+比例倒置，低于0.5。2Th1Th2Th1IL-2刺激CD4+T细胞增殖；至AIDS期则以Th2细胞占优势，分泌Th1细胞分泌CTL的细胞毒效应。3HIV感染巨噬树突状细胞后，可损伤其抗原处理和呈递能力（但不易杀死细胞，反而使之成为HIV的庇护所，成为晚期AIDS主要来源。4Bgp120BIg血症和产生多种自身抗体。【临床表现】典型的有：AIDS（有巨细胞病毒、带状孢疹病毒、隐球菌等；②恶性肿瘤：AIDS恶性淋巴瘤，也是患者死亡的常见原因；③神经系统损害：约60%AIDS患者出现AIDS痴呆症。【检验】1、HIV抗原检测：常用ELISA法检测HIV核心抗原p24。2HIV抗体检测：分为初筛和确认试验，初筛试验常用ELISA/胶乳凝集免疫金层析法。确认试验主要用免疫印迹法。3、CD4+T细胞计数：计数低于500/μl易导致机会性感染；低于200/μl则发生AIDS。机体抗肿瘤的免疫效应机制【细胞免疫机制】一、T细胞MHC-I限制的CD8+细胞毒性T细胞CTL细胞的机制：分泌多种细胞因子（如IFNγTNF等，间接杀伤肿瘤细胞。MHC-II限制的CD4+辅助性T细胞Th胞因子（如IL-2等）激活NK细胞、巨噬细胞，并增强CD8+CTL的杀伤功能而实现，但也有一定的直接杀伤肿瘤的作用，其在很多情况下对抗肿瘤细胞免疫应答的诱导及免疫记忆的维持是必不可少的。γδ+T细胞与CTL相似，可直接杀伤肿瘤细胞，发挥抗肿瘤作用，但不受MHC限制，此类细胞还可分泌5GM-CSF和TNF-αIL-2的作用下细胞能够以肿瘤浸润淋巴细胞或淋巴因子激活杀伤细胞的形式杀伤肿瘤细胞。二、NK细胞NK细胞是能的机制：①释放细胞毒性因子或穿孔素介导溶细胞作用，其杀伤作用无肿瘤特异性、MHC限制性和免疫记忆性；②通过Fas/FasL途径诱导肿瘤细胞凋亡；③NK细胞表面的FcγR可与覆盖在肿瘤细胞表面抗体的Fc段结合，通过ADCC在体内外增强NK细胞的细胞毒作用，故T细胞免疫应答可增强NK细胞活性。三、巨噬细胞既可作为抗原提呈细胞）伤肿瘤细胞的机制如下：APCT促进其激活，以诱导特异性抗瘤细胞（其强弱与进入肿瘤细胞内的酶的量有关；③巨噬细胞表面有FcR，可通过