动物实验考试-转基因

外源DNA整合 上的机①整合常发生在匹配较差的序列之间的不正常交 外源DNA整合时间和 嵌合体产 ③使用显微注射法导入DNA，每1000次注射可以产10个随机整合和一个同源重组整合 座控制区座控制区是调 正确表达的一种重元件座控制区的作用机制是通过改变其相邻因的染色质结构，导致这 被转录核基质附着区到称为核基质的蛋白质支架上，构成组中各个功能域的边界，相当于组中的“标点符号”。此外，MAR序列的功能没有组织特异表达结构的构建和功能域转①构建用于生产转动物的表达结构，一般都是在目的的两端各增加一个1～5kb的DN段，②若要可靠和有效表达目的，必须构建和转移完整的功能域，使被转移的表达结构包含一切必

： (YYYYYY)＃＃＃＃＃(YYYYYY)=插入片段标示 Zzz 方 HR代表经过逆转录 N Im插入突变；Rp报告

NcSnEtPtC57BL/6J-TgN(CD8Ge)23 W.Gordon(Jwg) β－半乳糖苷酶（beta-galactosidasereporter 动完 剔除(entirelyknock-out)又称敲除、打靶，指应用一段与胚胎 DNA，通过同源重组直接将靶在动物中的活性完全消除，来观察靶失活、不表达的情况下会对动物产生哪些影响。 二、ES细三、构建打靶载1、置换型载臂、正选择标记、细菌质粒序列和载体上同源2、插入型载3、选择性标 物代谢成对细胞性的物质，剔除后的细胞正选择标记neo，入到靶功能最关键的外显子中，或通过同源重组删除靶最重要的功能域，以使靶彻底失活。胸腺嘧啶激酶(HSVtk)作为负选择标插入到同源序列的一侧。HSVtk产物以核苷酸类似物(FIAU，GANC)为底物，将其代谢成对细性的物质，使细胞被杀4、囊胚注射获得嵌合体小 129-129-KM嵌合 重组P1噬菌体的位点专一性重 时，整合和表达效率就会提高几十别位点，通过位点专一性同源重组将目的装到二、Cre/LoxP重组酶系①Cre重组酶介导的DNA重排都仅仅需要整合酶和②LoxP都是由34bp构建的回文序列，是一个由不对称 区分开的两个13bp的反向重复序列③根据重组位点的方向和分子的数量，相应地导DNA序列的缺失、重复、整合、倒位、易位ACre重组酶介导的删除；BCre重组酶介导的易位；CCre重组酶介导三、组织特异 剔Flox-and- ； Flox-and-replace和flox-and- 有被删除但已经没有功能。通读的问题，因此，倒位可以应用在大的内部的外显子四、可诱导的组织特异 剔 ①将四环素阻遏蛋白(TetR)的结构和单纯疱疹的基②含有四环素抗 （CMV）基本启(TRE)则与 断靶的转录。 一、乙烷亚硝基脲（ENU）诱变的机ENU能不依赖于代谢过程，将乙烷基转移到碱基的氧原子或氮原子上加合了乙烷基的碱基，在中会被细胞系ENU在小鼠中主要引起 突变在蛋白质水平上导致不同的小鼠对ENU耐受的能力不同二、ENU诱导突变的策大规模ENU 小规模ENU略①应用Cre-LoxP系统研制了带24cM倒位的小鼠。在11号染色体上P53和Writ3之间的倒位隐性致死，并带有一个显性标记K14Agouti毛色转。 交，（Re突变导致小ENU处理后 用小鼠胚胎干细胞进行的ENU诱变实 一、 小鼠的饲 切除雄小鼠 二、嵌合体的鉴定和传嵌合体的检测和鉴 葡萄糖磷酸异构 速培育以验证突变经生殖系的传递。雌性来源的XX②X连锁的突变和杂合效在含有X连锁突变的雄性ES细胞中，因为嵌合体小鼠是突变等位的杂合子，表现为何种表型与携三、培养