microRNA论文：子宫内膜样腺癌组织中microRNA差异表达谱分析及其靶基因预测的研究

microRNA论文：子宫内膜样腺癌组织中microRNA差异表达谱分析及其靶基因预测的研究【中文摘要】与子宫内膜癌是累及女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,在很多欧美国家,其发病率居女性生殖系统癌症的首位。而在我国,子宫内膜癌的发病率也仅次于子宫颈癌,居女性生殖系统癌症的第二位，且有逐年上升趋势。子宫内膜癌中有85%-90%为I型子宫内膜样腺癌(雌激素依赖型),严重危害女性健康。目前认为子宫内膜癌的发生可能与长期持续的雌激素刺激或者肥胖、高血压、糖尿病、不孕等因素相关，但其机制尚不明确。因此对子宫内膜癌尤其是内膜样腺癌发病机制和新诊断方法的探讨与研究十分必要。microRNA(MicroRNA)是一种由22-25个核苷酸组成的非编码单链小RNA,目前认为在哺乳动物体内microRNA与靶基因作用，使靶基因的mRNA在转录后的翻译过程中被抑制或直接降解导致靶基因的蛋白表达水平降低,从而间接参与到包括生长发育、造血、器官形成、细胞增殖、凋亡乃至肿瘤发生的过程中。近些年来,很多研究围绕着microRNA与各种肿瘤间的关系展开而针对子宫内膜样腺癌中microRNA变化的研究目前尚不多。本研究通过筛查子宫内膜样腺癌组织与正常对照组子宫内膜组织中microRNA的表达差异,同时结合已有资料对表达差异明显的microRNA进行靶基因预测，并使用微阵预测分析(PAM)工具初步预测一组可以用于区分不同病理分化子宫内膜样腺癌的microRNA。进而从分子学水平探讨子宫内膜样腺癌的发病机制。方法：1•使用丹麦ExiqonTM公司microRNA芯片检测出子宫内膜样腺癌组织和正常内膜组织microRNA表达谱，筛选出表达差异明显的microRNA。2.挑选出上调及下调明显的microRNA各1例使用实时定量逆转录PCR(realtimeRT-PCR)进行验证。3.结合以往研究中与子宫内膜样腺癌及子宫内膜癌关系密切的基因结果，使用三种不同的预测软件对本实验中出现明显差异表达的microRNA进行靶基因预测，并统合结果。4.使用微阵预测分析工具处理高、中、低分化子宫内膜样腺癌及正常内膜中表达的microRNA数据,初步得出一组能够区分以上四组样本的microRNA标记。结果：1.在芯片覆盖的847条人microRNA中，子宫内膜样腺癌组织相较于正常内膜组织出现18个明显上调,31个明显下调的microRNA。2.包括PTEN、FOX家族等基因在内的51种基因被认为是上述差异表达的microRNA的预测靶基因。3.Mir-200c等9种microRNA是一组可用于鉴别不同分化子宫内膜样腺癌的生物标记microRNA。结论：1•相较于正常内膜组织多种microRNA在子宫内膜样腺癌中出现明显表达差异。2.mir-205等microRNA在子宫内膜样腺癌中表现出明显的变化趋势可能是影响子宫内膜样腺癌发生发展的关键microRNA。3.mir-205、mir-200家族、mir-183家族等多种成簇排列的microRNA家族在子宫内膜样腺癌中出现集体性变化。4.PTEN、FOX等多种基因被预测为子宫内膜样腺癌中差异表达microRNA的靶基因,microRNA可能通过调控这些靶基因从而影响子宫内膜样腺癌的发生发展过程。【英文摘要】Backgroundand:Endometrialcarcinomaisoneofthemostcommongynecologicalmalignanttumors.TheincidenceofendometrialcarcinomainAmericaandEuropeancountriesranksfirstinthegynecologicmalignancy.InChina,thisdiseaseisthesecondcommongynecologicmalignancyandranksaftercervicalcancer.Anditsincidenceisincreasingyearbyyear.Asadiseasedoesgreatharmtowomen'shealth,about85%-90%ofallendometrialcarcinomasareestrogen-relatedendometrialcancer(typeI).AndmostoftypeIendomtetrialcancercasesareendometrioidendometrialadenocarcinoma(EEC).Excessivestimulationofestrogen,obesity,hypertension,diabetes,infertilityandotherfactorsareconsideredrelatedtothetumorigenesisofendometrialcancercurrently,butthemechanismisunclear.So,itismeaningfultoexplorethepathogenesisofendometrialcancer,especiallyEEC.MicroRNAisaclassofnon-proteincoding,single-strandedsmallRNAsof22-25nucleotideslength.Theycanregulatemultipletargetgenes.Inmammals,targetgeneexpressionisrepressedbypost-transcriptionally.Andittakespartinmanyphysiologicalprocessesincludingbodygrowthanddevelopment,hematopoiesis,organformation,cellproliferation,apoptosiseventumorigenesis.Inrecentyears,therearemanystudiesontherelationshipbetweenmicroRNAandtumorgenesis.ButfewofthemreferredEEC.Inourstudy,differentialexpressionmicroRNAsprofilewasdetectedfromEECcomparedwithnormalendometrium.ThentargetsofthesedifferentialexpressionmicroRNAswerepredictedthroughwebdatabases.Predictionanalysisformicroarray(PAM)wasusedforthefirsttimetopredictagroupofmicroRNAbiomarkers.ThesemarkerscouldbeusedtoidentifydifferentdifferentiationofEEC.Methods:MicroRNAmicroarraywasusedtodetectthedifferentialexpressionmicroRNAs,andrealtimeRT-PCRwasusedtoverifytheresults.ThentargetsofthesemicroRNAsinEECwerepredictedthroughwebdatabases.PAMwasusedtopredictagroupofmicroRNAbiomarkers,whichcouldbeusedtoidentifydifferentiationofEEC.Results:18obviouslyup-regulatedand31obviouslydown-regulatedmicroRNAsintumorgroupwereidentified.51geneswerepredictedastargetsofthesedysregulatedmicroRNAs.Mir-200candother8microRNAswereconsideredasmembersofthebiomarkersthatcouldidentifydifferentiation.ManymembersfromsamemicroRNAfamilies(microRNAcluster)changedatthesametimeinEEC.Conclusion:SeveralmicroRNAswerefoundhavespecialchangesinEECandthesemicroRNAsandtheirpredictedtargetsmightplayanimportantroleinEEC.TherewerealotofcollectivemicroRNAsfromthefamilychangedtogetherinEECinourstudy.Theycouldco-expressthesameroleintumorigenesis.ThepredictedtargetsofdysregulatedmicroRNAinEECjustlikePTENandFOXmightberegulatedbymicroRNAandtookpartintumorigenesis.【关键词】icroRNA子宫内膜样腺癌microRNA芯片靶基因微阵预测分析【英文关键词】MicroRNAEndometrioidendometrialadenocarcinomaMicroRNAmicroarrayTargetgenePredictionanalysisformicroarray【目录】子宫内膜样腺癌组织中microRNA差异表达谱分析及其靶基因预测的研究中文摘要6-8ABSTRACT8-9英文缩写词表