芳酸类非甾体抗炎药物的分析课件

药物分析

PharmaceuticalAnalysis药物分析

PharmaceuticalAnalysis1第六章

芳酸类非甾体抗炎药物的分析

典型药物的结构与性质

鉴别试验特殊杂质及其检查法含量测定4123体内药物分析5第六章

芳酸类非甾体抗炎药物的分析典型药物的结构与性质鉴2第六章熟悉:

主要芳酸类非甾体抗炎药物杂质的结构,危害,检查方法与限度了解:

影响芳酸类非甾体抗炎药物稳定性的主要因素,体内样品与临床监测掌握:

芳酸类非甾体抗炎药的结构和性质; 主要芳酸类药物的鉴别,检查和含量测定的原理与特点第六章熟悉:主要芳酸类非甾体抗炎药物杂质的结构,危害,检查3概述结构特点药物特点理化特性分析方法作用临床基本结构基本性质鉴别,检查含量测定;体内分析抗炎,抗风湿,

止痛,退热关节炎,发热,

慢性疼痛芳基取代羧酸游离羧基和苯环酸性;水解性;

光谱特性基团(酚)/元素(硫)特性Fe3+;UV,IR,LC中间体或水解产物酸碱滴定;UV;HPLC体内过程与分析非甾体抗炎药(NSAIDs)是一类不含有甾体骨架的抗炎药,是目前临床使用最多的药物种类之一概述结构特点药物特点理化特性分析方法作用临床基本结构基本性质4第一节

典型药物的结构与性质一、典型药物与结构特点

二、主要理化性质第一节

典型药物的结构与性质一、典型药物与结构特点二、主要5一、典型药物与结构特点

羧基状态

游离: 水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳, 甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛盐/酯:双氯芬酸钠,双水杨酯酰胺: 吡罗昔康,美洛昔康具有苯环和羧基(分类见表6-1)水杨酸阿司匹林双水杨酯二氟尼柳一、典型药物与结构特点羧基状态游离: 水杨酸,阿司匹林,6一、典型药物与结构特点

苯环结构特征邻羟基苯甲酸:

水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳邻胺基苯甲酸:

甲芬那酸二苯甲酮:

酮洛芬羟基不饱和酮:

吡罗昔康,美洛昔康杂环:

吲哚美辛,吡罗昔康,美洛昔康特殊元素:二氟尼柳(氟);双氯芬酸钠/吲哚美辛(氯)

吡罗/美洛昔康(硫)

结构上不属于芳酸类的药物：尼美舒利：甲磺酰基对乙酰氨基酚：苯胺对乙酰氨基酚尼美舒利一、典型药物与结构特点苯环结构特征邻羟基苯甲酸:水杨酸7二、主要理化性质(一)酸性酸性强度受苯环取代位置及苯环上其他取代基的影响:邻位效应：阿司匹林＞苯甲酸酸性分子内氢键：水杨酸＞阿司匹林pKa=3.492.954.26二、主要理化性质(一)酸性酸性强度受苯环取代位置8二、主要理化性质

(一)酸性双氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛: 羧基不与苯环直接相连,酸性较弱吡罗昔康,美洛昔康,尼美舒利,对乙酰氨基酚: 酰胺结构,无明显酸性

较强酸性:原料药可在中性乙醇或甲醇,丙酮等 水溶性有机溶剂中,用氢氧化钠直接滴定二、主要理化性质(一)酸性双氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普9二、主要理化性质

(二)水解性酯键:

阿司匹林/双水杨酯酰胺键:

吲哚美辛,吡罗昔康,美洛昔康,尼美舒利, 对乙酰氨基酚水解反应及其产物的特性反应——鉴别水解可快速,定量——含量测定(剩余碱量法)美洛昔康——定量过量的氢氧化钠水解 剩余的氢氧化钠用盐酸回滴定美洛昔康二、主要理化性质(二)水解性酯键: 阿司匹林/双水杨酯美10二、主要理化性质

(三)吸收光谱特性紫外特征光谱:

鉴别;含量均匀度,溶出度/释放度红外特征光谱

:

鉴别酮洛芬酚羟基:

对乙酰氨基酚,水杨酸与Fe3+显色——鉴别

二苯甲酮:

酮洛芬与苯肼缩合显色——鉴别

硫: 美洛昔康热分解后产生的硫化氢 与醋酸铅生成黑色硫化铅——鉴别(四)基团/元素特性美洛昔康二、主要理化性质(三)吸收光谱特性紫外特征光谱: 鉴别11第二节

鉴别试验一、与三氯化铁反应二、缩合反应三、重氮化-偶合反应四、氧化反应五、水解反应六、特征元素反应七、光谱法八、色谱法第二节

鉴别试验一、与三氯化铁反应12一、与三氯化铁反应中性或弱酸性(pH值4~6)条件下进行,强酸性溶液中配位化合物分解阿司匹林加水煮沸双水杨酯在氢氧化钠试液中煮沸水解生成水杨酸钠,与三氯化铁试液显紫色二氟尼柳于乙醇中与三氯化铁试液呈深紫色1.水杨酸反应二氟尼柳阿司匹林双水杨酯紫堇色紫堇色一、与三氯化铁反应中性或弱酸性(pH值4~6)条件下进行,13一、与三氯化铁反应对乙酰氨基酚:水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色吡罗昔康(三氯甲烷):与三氯化铁显玫瑰红色美洛昔康显淡紫红色

烯醇式羟基具有酚羟基性质,与FeCl3生成红色配位化合物2.酚羟基反应美洛昔康一、与三氯化铁反应对乙酰氨基酚:水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色14二、缩合反应酮洛芬的二苯甲酮,在酸性下与二硝基苯肼缩合生成橙色沉淀（腙）二、缩合反应酮洛芬的二苯甲酮,在酸性下与二硝基苯肼缩合生成15三、重氮化-偶合反应对乙酰氨基酚酸中水解生成对氨基酚,游离芳伯氨基与亚硝酸钠试液重氮化,重氮盐再与碱性β-萘酚偶合生成红色偶氮化合物三、重氮化-偶合反应对乙酰氨基酚酸中水解生成对氨基酚,游离16四、氧化反应甲芬那酸:溶于硫酸,被重铬酸钾氧化显深蓝色→随即变为棕绿色吲哚美辛:溶液在硫酸酸性下与重铬酸钾溶液共热,被氧化显紫色在盐酸溶液中与亚硝酸钠溶液反应显绿色,放置后渐变黄色四、氧化反应甲芬那酸:溶于硫酸,被重铬酸钾氧化显深蓝色→17五、水解反应阿司匹林,水解得水杨酸钠与醋酸钠,酸化生成水杨酸白色沉淀;并发生醋酸的臭气双水杨酯水解后酸化,生成白色水杨酸沉淀;2CH3COONa+H2SO4→2CH3COOH+Na2SO4五、水解反应阿司匹林,水解得水杨酸钠与醋酸钠,酸化生成水18六、特征元素的反应氯的鉴别——与碱共热分解产生氯化物,显氯化物的鉴别反应双氯芬酸钠:与碳酸钠炽灼灰化,加水煮沸,滤过,滤液显氯化物鉴别反应

硫的鉴别——经高温分解产生硫化氢气体,遇醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀美洛昔康:试管中炽灼,产生的气体使湿润的醋酸铅试纸显黑色六、特征元素的反应氯的鉴别——与碱共热分解产生氯化物,显氯19七、光谱法(一)紫外-可见分光光度法最大吸收波长法:双氯芬酸钠溶液:276nm有最大吸收吡罗昔康片,含量测定溶液:243与334nm最大吸收最大与最小吸收波长法:布洛芬及制剂氢氧化钠溶液:265,273nm最大吸收245,271nm最小吸收259nm肩峰

七、光谱法(一)紫外-可见分光光度法20七、光谱法(一)紫外-可见分光光度法吸光度法:甲芬那酸盐酸-甲醇溶液:279与350nm最大吸收吸光度(20µg/ml)分别:0.69~0.74与0.56~0.60吸光度比值法:二氟尼柳盐酸-乙醇溶液:251与315nm最大吸收吸光度比值应为4.2~4.6

七、光谱法(一)紫外-可见分光光度法21七、光谱法(二)红外分光光度法 阿司匹林

峰位(cm-1)归属3300~2300vO-H(羧基)1760,1690vC=O(羧酸酯和羧酸)1610,1570,1480,1460vC=C(苯环)1310,1230,1180vC-O(羧酸酯和羧酸)775δAr-H(邻位取代苯环)3300~23001760,16901610~14601310~1180775七、光谱法(二)红外分光光度法峰位(cm-1)归属330022八、色谱法(一)薄层色谱法个别药物制剂采用溶剂提取法去除辅料后IR鉴别;部分药物制剂采用TLC鉴别:二氟尼柳,美洛昔康等

(二)高效液相色谱法随着HPLC在药物制剂含量测定中的大量应用,更多应用HPLC进行制剂的鉴别:阿司匹林等多种制剂均直接取含量测定项下记录的HPLC色谱图进行鉴别

当TLC和HPLC均有收载时:二者可任选其一 如美洛昔康片的鉴别八、色谱法(一)薄层色谱法23药物名称特殊杂质游离水杨酸与有关物质/FeCl3阿司匹林/双水杨酯甲芬那酸二氟尼柳第三节

特殊杂质及其检查法2.3-二甲基苯胺有关物质

6-甲氧基-2-萘乙酮

氨基酚和对氯苯乙酰胺A.TLC;B.HPLCGC萘普生对乙酰氨基酚药物名称特殊杂质游离水杨酸与有关物质/FeCl3阿司匹林/双24一、阿司匹林与双水杨酯(一)阿司匹林与双水杨酯的合成一、阿司匹林与双水杨酯(一)阿司匹林与双水杨酯的合成25一、阿司匹林与双水杨酯(二)阿司匹林中游离水杨酸与有关物质游离水杨酸:

酚羟基易被空气(氧)逐渐氧化生成淡黄,红棕至深棕色醌型化合物为什么要检查游离水杨酸？一、阿司匹林与双水杨酯(二)阿司匹林中游离水杨酸与有关物质26游离水杨酸检查方法：ChP用水杨酸与Fe3+生成紫堇色配离子的原理,用稀硫酸铁铵溶液显色法检查

供试品溶液制备过程中阿司匹林水解ChP2010采用1%冰醋酸甲醇溶液制备供试品溶液(防阿司匹林水解);并用RP-HPLC检查原料药和制剂均要检查游离水杨酸！游离水杨酸检查方法：ChP用水杨酸与Fe3+生成紫堇272.有关物质:阿司匹林中“有关物质”系指除“游离水杨酸”外的合成原料(苯酚)及副产物2.有关物质:阿司匹林中“有关物质”系指除“游离水杨酸”外282.有关物质:阿司匹林

水杨酸

乙酰水杨酰水杨酸a:阿司匹林供试品(10mg/ml)；b:0.5%自身对照(50g/ml)；c:水杨酸对照(10g/ml)；d:e:空白2.有关物质:阿司匹林a:阿司匹林供试品(10mg/ml)29一、阿司匹林与双水杨酯(三)双水杨酯中游离水杨酸利用水杨酸与三价铁生成有色配离子的原理,用硝酸铁溶液显色,在530nm的波长处测定吸光度,限度为0.5%;双水杨酯片同法检查,限度为1.5%

一、阿司匹林与双水杨酯(三)双水杨酯中游离水杨酸利用水杨酸30二、甲芬那酸(一)合成工艺甲芬那酸主要以邻-氯苯甲酸(o-chloroben-zoicacid)和2,3-二甲基苯胺(2,3-dimethyl-aniline)为原料,在铜的催化下缩合而成二、甲芬那酸(一)合成工艺甲芬那酸主要以邻-氯苯甲酸(o31二、甲芬那酸(二)2,3-二甲基苯胺的检查ChP曾采用HPLC法检查: 单一杂质的限量为0.1% 杂质总量为0.5%ChP2010规定

HPLC法检查:“有关物质”

GC检查:2,3-二甲基苯胺(0.01%)二、甲芬那酸(二)2,3-二甲基苯胺的检查ChP曾采用32三、二氟尼柳(一)合成工艺原料(I)

:2,4-二氟苯胺中间体(II):2,4-二氟联苯中间体(III)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯乙酮中间体(IV)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯酚乙酯中间体(V):4-(2‘,4’-二氟苯基)苯酚产品(VI):二氟尼柳三、二氟尼柳(一)合成工艺原料(I):2,4-二氟苯33三、二氟尼柳(二)有关物质A和B的检查1.有关物质A的检查——TLC(正相): 极性较小的杂质 单1杂质的限量为0.5%2.有关物质B的检查——HPLC(反相): 极性较大的杂质 各面积的和为0.5%三、二氟尼柳(二)有关物质A和B的检查1.有关物质A34四、萘普生

(一)合成工艺原料(I)

:2-萘甲醚中间体(II):6-甲氧基-2-乙酰萘(6-甲氧基-2-萘乙酮)中间体(III):2-羟基-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸产品(IV):萘普生

四、萘普生(一)合成工艺原料(I):2-萘甲醚35四、萘普生(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有关物质1.溶液制备供试品溶液:0.5mg/ml流动相溶液对照品溶液:6-甲氧基-2-萘乙酮(杂质I),

50μg/ml对照溶液:供试品溶液1ml+对照品溶液2ml→200ml2.限度

杂质I:

不得大于杂质I峰面积(0.1%)

其他单个杂质:

不得大于杂质I峰面积的2倍(0.2%)各杂质总量:

不得大于对照溶液中萘普生峰面积(0.5%)

四、萘普生(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有关物质1.36五、对乙酰氨基酚

(一)合成工艺(二)有关杂质:

对硝基酚,对氨基酚,对氯苯胺,对氯苯乙酰胺,o-乙酰 基对乙酰氨基酚,偶氮苯,氧化偶氮苯,苯醌和醌亚胺1.对氨基酚及(其它)有关物质——HPLC对氨基酚:0.005%有关物质:单个0.1%;总量0.5%2.

对氯苯乙酰胺(极性较小)——HPLC(0.005%)

五、对乙酰氨基酚(一)合成工艺(二)有关杂质:137第四节

含量测定一、酸碱滴定法二、紫外-可见分光光度法三、高效液相色谱法第四节

含量测定一、酸碱滴定法二、紫外-可见分光光38一、酸碱滴定法（原料药）酸碱滴定法水解后剩余量滴定法阿司匹林

USP,BP,JP非水溶液滴定法吡罗昔康具有吡啶环,显碱性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定

剩余量滴定法美洛昔康水及与水混溶的有机溶剂中难溶,溶于氢氧化钠滴定液后盐酸回滴定

直接滴定法水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,尼美舒利一、酸碱滴定法（原料药）酸碱水解后剩余量滴定法阿司匹林非水39(一)直接滴定法1.测定法本品约0.4g,精密称定,加中性乙醇(对酚酞指示液显中性)20ml溶解后,加酚酞指示液3滴,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定T=18.02mg2.讨论中性乙醇：对所选用的指示剂显中性的乙醇目的：a.

乙醇：溶解样品，减少水解b.中性：消除乙醇中对酚酞显酸性物质的影响滴定在不断振摇下稍快进行,防阿司匹林水解受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰(一)直接滴定法1.测定法40(二)剩余量滴定法1.原理美洛昔康含有与羰基共轭的烯醇式羟基,具有羧酸性质,可用氢氧化钠滴定液滴定本品甲醇,乙醇,丙酮及水中难溶,定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后,用盐酸滴定液回滴定2.测定法本品约0.4g,精密称定,精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)25ml,微温溶解,加中性乙醇(对溴麝香草酚蓝指示液显中性)100ml与指示液10滴,用盐酸滴定液(0.1mol/L)滴定;T=35.14mg美洛昔康(二)剩余量滴定法1.原理美洛昔康41(三)水解后剩余量滴定法1.原理阿司匹林酯结构在碱性溶液中易水解,加入定量过量的氢氧化钠滴定液,加热使酯键水解后,再用硫酸滴定液回滴定剩余的氢氧化钠滴定液

2NaOH+H2SO4→Na2SO4+2H2O2.测定法(USP32-NF27)本品约1.5g,精密称定,加氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)50.0ml,缓缓煮沸10min,放冷,加酚酞指示液,用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定，并将滴定结果用空白试验校正。T=45.40mg为什么要做空白试验？(三)水解后剩余量滴定法1.原理42(三)水解后剩余量滴定法3.两步滴定法——水解后剩余量滴定法的改进阿司匹林片剂:水解产物水杨酸及醋酸;稳定剂酒石酸或枸橼酸两步滴定法:第1步:中和,中和干扰物和阿司匹林的游离羧基第2步:水解与滴定,水解后剩余量滴定法阿司匹林片含量测定方法(ChP2005)如下:

本品10片,精密称定,研细,精密称取片粉(阿司匹林0.3g),中性乙醇(酚酞指示液显中性)20ml,振摇,加指示液3滴,滴加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)至溶液显粉红色,精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)40ml,加热15min,放冷,用硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定;并将滴定结果用空白试验校正。T=18.02mg(三)水解后剩余量滴定法3.两步滴定法——水解后剩余量滴43第一步中和第一步中和44第二步水解后剩余滴定水解：

剩余滴定：2NaOH（过量）＋H2SO4

＝Na2SO4＋2H2O

反应摩尔比为1∶1优点：本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰

第二步水解后剩余滴定水解：剩余滴定：2NaOH（过量45(三)水解后剩余量滴定法含量计算 供试品中阿司匹林的含量,由水解时消耗的碱量计算第1步:中和时,阿司匹林的游离羧酸中和第2步:水解后剩余量滴定法时阿司匹林与氢氧化钠反应的摩尔比为1:1滴定度:T=0.1×(1/1)×180.16=18.02(mg/m1)片剂含量:(三)水解后剩余量滴定法含量计算46(四)非水溶液滴定法1.原理吡罗昔康具有吡啶环,显碱性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定2.测定法本品约0.2g,精密称定,加冰醋酸20ml使溶解,加结晶紫指示液1滴,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色,并将滴定的结果用空白试验校正T=33.14mg/ml(四)非水溶液滴定法1.原理47二、紫外-可见分光光度法(一)直接分光光度法二氟尼柳,美洛昔康,尼美舒利制剂,对乙酰氨基酚及其部分制剂;二氟尼柳胶囊含量测定:精密称取内容物适量(二氟尼柳0.1g),置100ml量瓶,加溶剂(0.1mol/L的盐酸乙醇溶液)适量,超声处理10min,用溶剂稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,置l00ml量瓶,用溶剂稀释至刻度,摇匀,在315nm的波长处测定吸光度;另取二氟尼柳对照品,用溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含50µg的溶液作为对照品溶液,同法测定,计算式中,D为供试品溶液稀释体积(ml,

D=100100/5=2000);标示量为胶囊剂的规格(mg/粒)

二、紫外-可见分光光度法(一)直接分光光度法48二、紫外-可见分光光度法(二)柱分配色谱-紫外分光光度法

USP32-NF27则采用柱色谱分离法消除阿司匹林胶囊和栓剂中辅料及降解产物的干扰柱分配色谱-紫外分光光度法不需特殊仪器,结果重现性较好,但操作较繁琐二、紫外-可见分光光度法(二)柱分配色谱-紫外分光光度法49阿司匹林的含量测定填充剂：硅藻土+NaHCO3除去中性，碱性杂质上样样品的三氯甲烷溶液，水杨酸、阿司匹林均生成钠盐，保留柱上洗脱1.三氯甲烷2.冰醋酸-三氯甲烷阿司匹林游离，被洗脱，收集280nm处测定供试液和标准溶液吸光度，计算含量酸性强弱:水杨酸＞醋酸＞阿司匹林阿司匹林的含量测定除去中性，碱性杂质上样样品的三氯甲烷溶液，50三、高效液相色谱法阿司匹林栓的含量测定:

（离子抑制色谱）取本品5粒,精密称定,置小烧杯中,在40~50℃水浴上微温熔融,在不断搅拌下冷却至室温,精密称取适量(阿司匹林0.1g),置50ml量瓶中,加溶剂(1%冰醋酸的甲醇溶液)适量,在40~50℃水浴中充分振摇使阿司匹林溶解,放冷,用溶剂稀释至刻度,摇匀,置冰浴中冷却1小时,取出,迅速滤过,取续滤液作为供试品贮备液;精密量取供试品贮备液5ml,置100ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀,精密量取10µl进样分析;按外标法以峰面积计算流动相（乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70））中添加冰醋酸是为抑制阿司匹林的解离,消除色谱峰拖尾;同时,流动相及供试液中的醋酸也可抑制阿司匹林的水解D为稀释体积(ml,D=50100/5=1000);标示量为栓剂规格(mg/支)

三、高效液相色谱法阿司匹林栓的含量测定:（离子抑制色谱）51ThankYou!ThankYou!52药物分析

PharmaceuticalAnalysis药物分析

PharmaceuticalAnalysis53第六章

芳酸类非甾体抗炎药物的分析

典型药物的结构与性质

鉴别试验特殊杂质及其检查法含量测定4123体内药物分析5第六章

芳酸类非甾体抗炎药物的分析典型药物的结构与性质鉴54第六章熟悉:

主要芳酸类非甾体抗炎药物杂质的结构,危害,检查方法与限度了解:

影响芳酸类非甾体抗炎药物稳定性的主要因素,体内样品与临床监测掌握:

芳酸类非甾体抗炎药的结构和性质; 主要芳酸类药物的鉴别,检查和含量测定的原理与特点第六章熟悉:主要芳酸类非甾体抗炎药物杂质的结构,危害,检查55概述结构特点药物特点理化特性分析方法作用临床基本结构基本性质鉴别,检查含量测定;体内分析抗炎,抗风湿,

止痛,退热关节炎,发热,

慢性疼痛芳基取代羧酸游离羧基和苯环酸性;水解性;

光谱特性基团(酚)/元素(硫)特性Fe3+;UV,IR,LC中间体或水解产物酸碱滴定;UV;HPLC体内过程与分析非甾体抗炎药(NSAIDs)是一类不含有甾体骨架的抗炎药,是目前临床使用最多的药物种类之一概述结构特点药物特点理化特性分析方法作用临床基本结构基本性质56第一节

典型药物的结构与性质一、典型药物与结构特点

二、主要理化性质第一节

典型药物的结构与性质一、典型药物与结构特点二、主要57一、典型药物与结构特点

羧基状态

游离: 水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳, 甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛盐/酯:双氯芬酸钠,双水杨酯酰胺: 吡罗昔康,美洛昔康具有苯环和羧基(分类见表6-1)水杨酸阿司匹林双水杨酯二氟尼柳一、典型药物与结构特点羧基状态游离: 水杨酸,阿司匹林,58一、典型药物与结构特点

苯环结构特征邻羟基苯甲酸:

水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳邻胺基苯甲酸:

甲芬那酸二苯甲酮:

酮洛芬羟基不饱和酮:

吡罗昔康,美洛昔康杂环:

吲哚美辛,吡罗昔康,美洛昔康特殊元素:二氟尼柳(氟);双氯芬酸钠/吲哚美辛(氯)

吡罗/美洛昔康(硫)

结构上不属于芳酸类的药物：尼美舒利：甲磺酰基对乙酰氨基酚：苯胺对乙酰氨基酚尼美舒利一、典型药物与结构特点苯环结构特征邻羟基苯甲酸:水杨酸59二、主要理化性质(一)酸性酸性强度受苯环取代位置及苯环上其他取代基的影响:邻位效应：阿司匹林＞苯甲酸酸性分子内氢键：水杨酸＞阿司匹林pKa=3.492.954.26二、主要理化性质(一)酸性酸性强度受苯环取代位置60二、主要理化性质

(一)酸性双氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛: 羧基不与苯环直接相连,酸性较弱吡罗昔康,美洛昔康,尼美舒利,对乙酰氨基酚: 酰胺结构,无明显酸性

较强酸性:原料药可在中性乙醇或甲醇,丙酮等 水溶性有机溶剂中,用氢氧化钠直接滴定二、主要理化性质(一)酸性双氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普61二、主要理化性质

(二)水解性酯键:

阿司匹林/双水杨酯酰胺键:

吲哚美辛,吡罗昔康,美洛昔康,尼美舒利, 对乙酰氨基酚水解反应及其产物的特性反应——鉴别水解可快速,定量——含量测定(剩余碱量法)美洛昔康——定量过量的氢氧化钠水解 剩余的氢氧化钠用盐酸回滴定美洛昔康二、主要理化性质(二)水解性酯键: 阿司匹林/双水杨酯美62二、主要理化性质

(三)吸收光谱特性紫外特征光谱:

鉴别;含量均匀度,溶出度/释放度红外特征光谱

:

鉴别酮洛芬酚羟基:

对乙酰氨基酚,水杨酸与Fe3+显色——鉴别

二苯甲酮:

酮洛芬与苯肼缩合显色——鉴别

硫: 美洛昔康热分解后产生的硫化氢 与醋酸铅生成黑色硫化铅——鉴别(四)基团/元素特性美洛昔康二、主要理化性质(三)吸收光谱特性紫外特征光谱: 鉴别63第二节

鉴别试验一、与三氯化铁反应二、缩合反应三、重氮化-偶合反应四、氧化反应五、水解反应六、特征元素反应七、光谱法八、色谱法第二节

鉴别试验一、与三氯化铁反应64一、与三氯化铁反应中性或弱酸性(pH值4~6)条件下进行,强酸性溶液中配位化合物分解阿司匹林加水煮沸双水杨酯在氢氧化钠试液中煮沸水解生成水杨酸钠,与三氯化铁试液显紫色二氟尼柳于乙醇中与三氯化铁试液呈深紫色1.水杨酸反应二氟尼柳阿司匹林双水杨酯紫堇色紫堇色一、与三氯化铁反应中性或弱酸性(pH值4~6)条件下进行,65一、与三氯化铁反应对乙酰氨基酚:水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色吡罗昔康(三氯甲烷):与三氯化铁显玫瑰红色美洛昔康显淡紫红色

烯醇式羟基具有酚羟基性质,与FeCl3生成红色配位化合物2.酚羟基反应美洛昔康一、与三氯化铁反应对乙酰氨基酚:水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色66二、缩合反应酮洛芬的二苯甲酮,在酸性下与二硝基苯肼缩合生成橙色沉淀（腙）二、缩合反应酮洛芬的二苯甲酮,在酸性下与二硝基苯肼缩合生成67三、重氮化-偶合反应对乙酰氨基酚酸中水解生成对氨基酚,游离芳伯氨基与亚硝酸钠试液重氮化,重氮盐再与碱性β-萘酚偶合生成红色偶氮化合物三、重氮化-偶合反应对乙酰氨基酚酸中水解生成对氨基酚,游离68四、氧化反应甲芬那酸:溶于硫酸,被重铬酸钾氧化显深蓝色→随即变为棕绿色吲哚美辛:溶液在硫酸酸性下与重铬酸钾溶液共热,被氧化显紫色在盐酸溶液中与亚硝酸钠溶液反应显绿色,放置后渐变黄色四、氧化反应甲芬那酸:溶于硫酸,被重铬酸钾氧化显深蓝色→69五、水解反应阿司匹林,水解得水杨酸钠与醋酸钠,酸化生成水杨酸白色沉淀;并发生醋酸的臭气双水杨酯水解后酸化,生成白色水杨酸沉淀;2CH3COONa+H2SO4→2CH3COOH+Na2SO4五、水解反应阿司匹林,水解得水杨酸钠与醋酸钠,酸化生成水70六、特征元素的反应氯的鉴别——与碱共热分解产生氯化物,显氯化物的鉴别反应双氯芬酸钠:与碳酸钠炽灼灰化,加水煮沸,滤过,滤液显氯化物鉴别反应

硫的鉴别——经高温分解产生硫化氢气体,遇醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀美洛昔康:试管中炽灼,产生的气体使湿润的醋酸铅试纸显黑色六、特征元素的反应氯的鉴别——与碱共热分解产生氯化物,显氯71七、光谱法(一)紫外-可见分光光度法最大吸收波长法:双氯芬酸钠溶液:276nm有最大吸收吡罗昔康片,含量测定溶液:243与334nm最大吸收最大与最小吸收波长法:布洛芬及制剂氢氧化钠溶液:265,273nm最大吸收245,271nm最小吸收259nm肩峰

七、光谱法(一)紫外-可见分光光度法72七、光谱法(一)紫外-可见分光光度法吸光度法:甲芬那酸盐酸-甲醇溶液:279与350nm最大吸收吸光度(20µg/ml)分别:0.69~0.74与0.56~0.60吸光度比值法:二氟尼柳盐酸-乙醇溶液:251与315nm最大吸收吸光度比值应为4.2~4.6

七、光谱法(一)紫外-可见分光光度法73七、光谱法(二)红外分光光度法 阿司匹林

峰位(cm-1)归属3300~2300vO-H(羧基)1760,1690vC=O(羧酸酯和羧酸)1610,1570,1480,1460vC=C(苯环)1310,1230,1180vC-O(羧酸酯和羧酸)775δAr-H(邻位取代苯环)3300~23001760,16901610~14601310~1180775七、光谱法(二)红外分光光度法峰位(cm-1)归属330074八、色谱法(一)薄层色谱法个别药物制剂采用溶剂提取法去除辅料后IR鉴别;部分药物制剂采用TLC鉴别:二氟尼柳,美洛昔康等

(二)高效液相色谱法随着HPLC在药物制剂含量测定中的大量应用,更多应用HPLC进行制剂的鉴别:阿司匹林等多种制剂均直接取含量测定项下记录的HPLC色谱图进行鉴别

当TLC和HPLC均有收载时:二者可任选其一 如美洛昔康片的鉴别八、色谱法(一)薄层色谱法75药物名称特殊杂质游离水杨酸与有关物质/FeCl3阿司匹林/双水杨酯甲芬那酸二氟尼柳第三节

特殊杂质及其检查法2.3-二甲基苯胺有关物质

6-甲氧基-2-萘乙酮

氨基酚和对氯苯乙酰胺A.TLC;B.HPLCGC萘普生对乙酰氨基酚药物名称特殊杂质游离水杨酸与有关物质/FeCl3阿司匹林/双76一、阿司匹林与双水杨酯(一)阿司匹林与双水杨酯的合成一、阿司匹林与双水杨酯(一)阿司匹林与双水杨酯的合成77一、阿司匹林与双水杨酯(二)阿司匹林中游离水杨酸与有关物质游离水杨酸:

酚羟基易被空气(氧)逐渐氧化生成淡黄,红棕至深棕色醌型化合物为什么要检查游离水杨酸？一、阿司匹林与双水杨酯(二)阿司匹林中游离水杨酸与有关物质78游离水杨酸检查方法：ChP用水杨酸与Fe3+生成紫堇色配离子的原理,用稀硫酸铁铵溶液显色法检查

供试品溶液制备过程中阿司匹林水解ChP2010采用1%冰醋酸甲醇溶液制备供试品溶液(防阿司匹林水解);并用RP-HPLC检查原料药和制剂均要检查游离水杨酸！游离水杨酸检查方法：ChP用水杨酸与Fe3+生成紫堇792.有关物质:阿司匹林中“有关物质”系指除“游离水杨酸”外的合成原料(苯酚)及副产物2.有关物质:阿司匹林中“有关物质”系指除“游离水杨酸”外802.有关物质:阿司匹林

水杨酸

乙酰水杨酰水杨酸a:阿司匹林供试品(10mg/ml)；b:0.5%自身对照(50g/ml)；c:水杨酸对照(10g/ml)；d:e:空白2.有关物质:阿司匹林a:阿司匹林供试品(10mg/ml)81一、阿司匹林与双水杨酯(三)双水杨酯中游离水杨酸利用水杨酸与三价铁生成有色配离子的原理,用硝酸铁溶液显色,在530nm的波长处测定吸光度,限度为0.5%;双水杨酯片同法检查,限度为1.5%

一、阿司匹林与双水杨酯(三)双水杨酯中游离水杨酸利用水杨酸82二、甲芬那酸(一)合成工艺甲芬那酸主要以邻-氯苯甲酸(o-chloroben-zoicacid)和2,3-二甲基苯胺(2,3-dimethyl-aniline)为原料,在铜的催化下缩合而成二、甲芬那酸(一)合成工艺甲芬那酸主要以邻-氯苯甲酸(o83二、甲芬那酸(二)2,3-二甲基苯胺的检查ChP曾采用HPLC法检查: 单一杂质的限量为0.1% 杂质总量为0.5%ChP2010规定

HPLC法检查:“有关物质”

GC检查:2,3-二甲基苯胺(0.01%)二、甲芬那酸(二)2,3-二甲基苯胺的检查ChP曾采用84三、二氟尼柳(一)合成工艺原料(I)

:2,4-二氟苯胺中间体(II):2,4-二氟联苯中间体(III)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯乙酮中间体(IV)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯酚乙酯中间体(V):4-(2‘,4’-二氟苯基)苯酚产品(VI):二氟尼柳三、二氟尼柳(一)合成工艺原料(I):2,4-二氟苯85三、二氟尼柳(二)有关物质A和B的检查1.有关物质A的检查——TLC(正相): 极性较小的杂质 单1杂质的限量为0.5%2.有关物质B的检查——HPLC(反相): 极性较大的杂质 各面积的和为0.5%三、二氟尼柳(二)有关物质A和B的检查1.有关物质A86四、萘普生

(一)合成工艺原料(I)

:2-萘甲醚中间体(II):6-甲氧基-2-乙酰萘(6-甲氧基-2-萘乙酮)中间体(III):2-羟基-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸产品(IV):萘普生

四、萘普生(一)合成工艺原料(I):2-萘甲醚87四、萘普生(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有关物质1.溶液制备供试品溶液:0.5mg/ml流动相溶液对照品溶液:6-甲氧基-2-萘乙酮(杂质I),

50μg/ml对照溶液:供试品溶液1ml+对照品溶液2ml→200ml2.限度

杂质I:

不得大于杂质I峰面积(0.1%)

其他单个杂质:

不得大于杂质I峰面积的2倍(0.2%)各杂质总量:

不得大于对照溶液中萘普生峰面积(0.5%)

四、萘普生(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有关物质1.88五、对乙酰氨基酚

(一)合成工艺(二)有关杂质:

对硝基酚,对氨基酚,对氯苯胺,对氯苯乙酰胺,o-乙酰 基对乙酰氨基酚,偶氮苯,氧化偶氮苯,苯醌和醌亚胺1.对氨基酚及(其它)有关物质——HPLC对氨基酚:0.005%有关物质:单个0.1%;总量0.5%2.

对氯苯乙酰胺(极性较小)——HPLC(0.005%)

五、对乙酰氨基酚(一)合成工艺(二)有关杂质:189第四节

含量测定一、酸碱滴定法二、紫外-可见分光光度法三、高效液相色谱法第四节

含量测定一、酸碱滴定法二、紫外-可见分光光90一、酸碱滴定法（原料药）酸碱滴定法水解后剩余量滴定法阿司匹林

USP,BP,JP非水溶液滴定法吡罗昔康具有吡啶环,显碱性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定

剩余量滴定法美洛昔康水及与水混溶的有机溶剂中难溶,溶于氢氧化钠滴定液后盐酸回滴定

直接滴定法水杨酸,阿司匹林,双水杨酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,尼美舒利一、酸碱滴定法（原料药）酸碱水解后剩余量滴定法阿司匹林非水91(一)直接滴定法1.测定法本品约0.4g,精密称定,加中性乙醇(对酚酞指示液显中性)20ml溶解后,加酚酞指示液3滴,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定T=18.02mg2.讨论中性乙醇：对所选用的指示剂显中性的乙醇目的：a.

乙醇：溶解样品，减少水解b.中性：消除乙醇中对酚酞显酸性物质的影响滴定在不断振摇下稍快进行,防阿司匹林水解受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰(一)直接滴定法1.测定法92(二)剩余量滴定法1.原理美洛昔康含有与羰基共轭的烯醇式羟基,具有羧酸性质,可用氢氧化钠滴定液滴定本品甲醇,乙醇,丙酮及水中难溶,定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后,用盐酸滴定液回滴定2.测定法本品约0.4g,精密称定,精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)25ml,微温溶解,加中性乙醇(对溴麝香草酚蓝指示液显中性)100ml与指示液10滴,用盐酸滴定液(0.1mol/L)滴定;T=35.14mg美洛昔康(二)剩余量滴定法1.原理美洛昔康93(三)水解后剩余量滴定法1.原理阿司匹林酯结构在碱性溶液中易水解,加入定量过量的氢氧化钠滴定液,加热使酯键水解后,再用硫酸滴定液回滴定剩余的氢氧化钠滴定液

2NaOH+H2SO4→Na2SO4+2H2O2.测定法(USP32-NF27)本品约1.5g,精密称定,加氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)50.0ml,缓缓煮沸10min,放冷,加酚酞指示液,用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定，并将滴定结果用空白试验校正。T=45.40mg为什么要做空白试验？(三)水解后剩余量滴定法1.原理94(三)水解后剩余量滴定法3.两步滴定法——水解后剩余量滴定法的改进阿司匹林片剂:水解产物水杨酸及醋酸;稳定剂酒石酸或枸橼酸两步滴定法:第1步:中和,中和干扰物和阿司匹林的游离羧基第2步:水解与滴定,水解后剩余量滴定法阿司匹林片含量测定方法(ChP2005)如下:

本品10片,精密称定,研细,精密称取片粉(阿司匹林0.3g),中性乙醇(酚酞指示液显中性)20ml,振摇,加指示液3滴,滴加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)至溶液显粉红色,精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)40ml,加热15m