玉树獐牙菜对小鼠实验性肝损伤的爱惜及肝糖原的阻碍

玉树獐牙菜对小鼠实验性肝损伤的爱惜及肝

糖原的阻碍丁莉，陈志，金兰，罗桂花【摘要】目的研究玉树獐牙菜对小鼠实验性肝损伤的爱惜作用。方式采纳一次性腹腔注射四氯化碳花生油％）方式制作染毒小鼠模型,别离给予不同剂量玉树獐牙菜对模型动物进行干与性爱惜，测定不同实验组动物的生化指标。结果该药能明显降低四氯化碳引发的小鼠血清ALT,AST升高;提高肝糖原含量。结论玉树獐牙菜对小鼠实验性肝损伤具有必然的爱惜作用。【关键词】玉树獐牙菜；四氯化碳；肝损伤；肝糖原TheProtectiveEffectofHerbaSwertiaeMussot11onExperimentalLiverInjuryandtheGlycogenContentofLiverinMiceAbstract：ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectsofHerbaSwertiaeMussotllliverinjuryinmice.MethodsThemodelofliverinjurywasinducedbyintraperitonealinjectionofearthnutoilmixedwithCC14%)andtheserumandlivertissuewerecollected.BiochemicalindexesexaminationwereSwertiaeMussotllobviouslyinhibitedtheincreaseofserumALTandASTcausedbyCC14;theglycogencontentofliverwasraised.ConclusionHerbaSwertiaeMussotllcanprotectliverfromdamagewhenexposedtocarbontetrachloride.Keywords:HerbaSwertiaeMussotll;Carbontetrachloride；Liverinjury；Glycogenofliver玉树獐牙菜SwertiamussotllFranch,藏茵陈的一种，属龙胆科(Gentianaceae)植物，生于海拔2800〜4000m的高寒地域,要紧产于玉树一带。亦叫川西獐牙菜。一年生草本，全草入药，有清热解毒，舒肝利胆之功效，对急慢性黄疸型肝炎、病毒型肝炎和黄疸型肝炎有专门好的医治成效，为肝炎特效臧药植物［1］。目前对藏茵陈的药理和化学性质的研究有诸多报导，而对川西獐牙菜的报导却很少。本文通过观看不同剂量的玉树獐牙菜对四氯化碳性肝损伤模型血清ALT,AST和肝糖原的含量阻碍，研究该药对动物化学性肝损伤的爱惜作用，为玉树獐牙菜在临床上应用提供必然的理论基础，同时为开发利用这一天然高寒植物资源提供科学依据。1材料与方式材料动物昆明种健康小鼠雌雄各一半，体重18〜20g（由兰州生物制品厂提供）。药品和试剂醇提取的玉树獐牙菜浸膏；四氯化碳试剂（分析纯,在实验中应用花生油配制成含％的试剂，由广东西陇化工厂生产）;食用鲁花花生油；吐温80;谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（ALS）试剂盒（由南京建成生物工程研究所提供）。仪器与设备721分光光度计；高速冷冻离心机;低温冰箱;电热水浴锅等。方式玉树獐牙菜药物的提取将该药粉碎称取1kg加8L食用酒精回镭煮2h,滤出提取液,再加8L的食用酒精重复3次归并提取液并浓缩（回收酒精）在60℃的烘箱里烘干，实验历时用花生油：吐温80：水为1：1：8配制生药：浓度为，，g/mlo小鼠的处置将70只小鼠在实验室饲养2d后,按体重随机分为A组（正常对照组）、B组（CC14肝损伤组）、C组（低剂量玉树獐牙菜组）、D组（中剂量玉树獐牙菜组）、E组（高剂量玉树獐牙菜组）。自由摄取常规颗粒状饲料和自来水，空白对照组不做任何处置,CC14模型组用药物助溶剂以10ml/kg剂量按体重给药1个礼拜,药物组高、中、低3个剂量组别离按，，g/kg体重灌胃给药6周。末次给药后2h,除空白对照组的小鼠外,其它各组均按以10ml/kg的剂量按体重一次性腹腔注射%CC14花生油溶剂,禁食不由水，13h后断颈取血,并取肝组织冷冻。血清样处置在3500r/min,离心15min,取上清液低温保留。ALT活性测定参照改良赖氏法测定［2］血清中的ALT能与丙氨酸和酮戊二酸反映生成丙酮酸及谷氨酸，丙酮酸与2,4-二硝基苯肺生成2,4-二硝基苯胺在碱性液中显棕红色,在505nm处有最大吸收值。先用丙酮酸标准液作标准曲线,然后测定样品的吸光度,查阅标准曲线，而且乘以血清稀释倍数,计算ALT的活力。AST活性测定参照改良赖氏法测定［2］血清中的AST能与天冬氨酸和a-酮戊二酸反映生成草酰乙酸和谷氨酸，草酰乙酸与2,4-二硝基苯明生成2,4-二硝基苯腺在碱性液中显棕红色，在505nm处有最大吸收值。同上法计算AST的活力。肝糖原的测定小鼠于末次给药30min后，当即处死掏出肝脏,经生理盐水空白漂洗，滤纸吸干,精准称取肝脏100mg于试管内，加入8ml三氯醋酸匀浆1min,3000r/min,离心15min。取上清液于另一支试管内，用意酮法于650nm处测其吸光度测定肝糖原含量数据处置所有实验结果用土s表示采纳t查验。2结果对血清中ALT和AST的含量的阻碍结果见表lo表1玉树獐牙菜提取液对CC14肝损伤小鼠血清ALT和AST的阻碍（略）与空白对照组比较,OP＜,OOP＜；与模型组比较,*P＜；n=14从上表可看出，CC14肝损伤模型组小鼠血清ALT和AST的活性明显高于空白对照组;与模型组比较,药物组小鼠血清ALT和AST的活性明显降低。对小鼠肝糖原含量的阻碍结果见表2。由表2可见，中、高剂量组肝糖原含量明显高于空白对照组和模型组，不同有显著性意义（PO，提示玉树獐牙菜能增加小鼠肝糖原的含量。对照组与模型组相较，模型组小鼠肝糖元含量下降，说明肝损伤模型是成功的,CC14可能破坏肝功能，使代谢下降。表2玉树獐牙菜不同剂量对小鼠肝糖元含量的阻碍（略）与模型组比较，*P<;与对照组比较，△PV;n=143讨论玉树獐牙菜醇提物对小鼠CC14化学性急性肝损伤的爱惜作用本实验说明CC14对小鼠肝组织有损伤作用，表此刻血清中ALT,AST的含量比空白对照组有显著性的增高。CC14是一种典型的肝脏毒物,经肝脏微粒体细胞色素P-450激活后，发生均裂产生自由基（CC13・）o一方面,CC13能够解决细胞膜上的磷脂分子，引发脂质过氧化,并与膜蛋白结合，破坏了膜的结构和功能;另一方面CC14抑制内质网上的钙离子泵，使钙离子升高,从而激活肝细胞膜上的磷酸化酶，引发脂质过氧化，致使肝细胞膜损伤［4］。当肝细胞受损时，由于肝细胞内的转氨酶的浓度比血清中的高,胞浆内的ALT和AST因浓度差释放入血，造成高血清ALT和AST,故血清中的ALT和AST的含量是反映肝受损的灵敏指标,也能反映肝细胞损伤的程度。CC14可引发化学性肝损伤,致使肝细胞变性、坏死、间质细胞浸润，也能引发肝纤维化，其中成纤维细胞在肝纤维化中起着要紧作用L4]o玉树獐牙菜己知有8种酮,其中藏茵陈酮是新发觉的，另外还有齐墩果酸、芒果甘、苦龙胆甘、当药黄素等其它有效成份[l]o玉树獐牙菜醇提物明显降低CC14引发的大鼠血清ALT和AST增高，有量效关系，说明玉树獐牙菜有效成份在必然程度爱惜肝细胞膜结构，减少自由基的解决而减轻肝细胞的损伤。对实验性肝损伤具有较好的降酶、爱惜肝细胞和医治作用。玉树獐牙菜醇提物对小鼠肝糖原含量的阻碍肝脏是药物代谢的要紧器官，肝对糖的存储、散布和调剂起重要作用[5]o肝细胞有丰硕的线粒体，为活跃的代谢活动提供足够的能量。肝细胞还有丰硕的内质网、高尔基体和大量的核糖体，是肝脏合成血浆蛋白质及肝内参与物质代谢有关酶类的场所。另外肝细胞中还含有各类活性较高和完备的酶体系，因此在全身物质代谢及生物转化中起着专门重要的作用。对照组与模型组相较较，模型组肝糖原含量下降，这可能与肝组织损伤而引发糖代谢改变有关。当肝细胞发生弥漫性严峻损害时,肝糖原合成障碍及贮存减少，以多种途径阻碍糖代谢，要紧表现为磷酸戊糖途径及糖醇解途径相对增强；糖有氧氧化及三叛酸循环运转不佳，肝中葡萄糖-6-磷酸酶活性增加，使肝糖原迅速分解为6-磷酸葡萄糖，并在催化下，生成葡萄糖补充血糖，致使模型组的肝糖原含量明显下降。有文献报导[6],肝糖原的合成进程大致如下：肝细胞内的6-磷酸葡萄糖在葡萄糖磷酸变位酶的催化下转化为「磷酸葡萄，肝脏(及肾脏)还含有一些酶，能催化某些非糖物质如生糖氨基酸、乳酸及甘油等均转变成糖原。实验说明：药物组的肝糖原的含量明显高于模型组，可能是玉树獐牙菜增进了糖原合成途径或提高糖原储蓄能力,从而较好地操纵肝细胞坏死和增进损伤肝细胞的修复，有效地爱惜肝细胞，幸免有毒物质的侵害和自由基大量的产生，并有提高肝细胞糖原的合成或储蓄能力药理作用。不同剂量的玉树獐牙菜对急性化学性损伤小鼠都有爱惜作用，何种剂量的用药效价更好还有待进一步的研究。【参考文献】[1]纪兰菊，廖志新，孙洪发.青海龙胆科部份藏药植物化学成份研究进展[J].高原生物学集刊，2002：243.[2]杨昌国，许叶，江摩海，等.转氨酶测定标准化的意见[J].临床查验杂志，1992,10(4)：170.[