实验二气孔状态观察

关于实验二气孔状态观察第一页，共二十七页，2022年，8月28日肾形（双子叶植物）哑铃形（单子叶植物）第二页，共二十七页，2022年，8月28日气孔密度：单位叶片面积上的气孔数（显微镜视野面积内观测到的气孔数）气孔开度：保卫细胞内壁间跨距开度第三页，共二十七页，2022年，8月28日不同植物气孔的数目和大小第四页，共二十七页，2022年，8月28日掌握测定气孔密度和开度的方法；学会分析影响因素对气孔运动的调节；学会利用显微镜物镜测微尺（物尺）标定目镜测微尺（目尺）的方法。1.实验目的第五页，共二十七页，2022年，8月28日2.1印迹法以有机物质的溶胶（火棉胶、牛皮胶、醋酸纤维素胶、指甲油等）涂在植物的表面,胶体风干后凝成薄膜，这层膜上印有表皮组织各细胞的界迹边痕，从而显示出气孔的开闭情况

。将印膜撕下，供观察和测量。除用来观察气孔状况外，还可用于观测植物表皮上的细胞、茸毛、蜜腺、蜜盘、刺、鳞片等。优点:

非破坏性取样；方便快捷。缺陷:

界迹边痕不明显的样品印迹模糊；凹陷气孔难以取到印迹；清晰薄膜制作有难度。2.实验原理第六页，共二十七页，2022年，8月28日2.2固定法优点:镜下观察较印迹法的醒目；植物材料可长期保存；凹陷气孔仍可观察。缺陷:破坏性取样；不适用于下表皮难于剥离的样品观察。

无水乙醇能使植物细胞迅速脱水、死亡，因而细胞壁硬化、细胞形状固定，气孔也得以保持原形，有利于以后镜检研究。第七页，共二十七页，2022年，8月28日2.3K+

对气孔开度的影响气孔运动的机制（4种假说）:淀粉与糖转化学说K+积累学说苹果酸代谢学说玉米黄素假说第八页，共二十七页，2022年，8月28日

在光下，保卫细胞中的叶绿体通过光合磷酸化生成ATP，ATP驱动质膜上的K+-H+泵，使保卫细胞能逆浓度梯度从周围表皮细胞吸收K+，或从外界溶液中吸收K+

，从而降低其渗透势，促进保卫细胞吸水，气孔开放。

K+在保卫细胞的积累，可以促进气孔开放。

Na+可以代替K+，使气孔开放，但效果如何？K+积累学说第九页，共二十七页，2022年，8月28日蚕豆叶片，竹叶菜（Commelina

benghalensis）

载玻片、盖玻片、显微镜、测微尺、培养皿印迹法：火棉胶、棉花球、镊子、刀片；固定法：无水酒精、镊子0.5%KNO3、NaNO3溶液光源（生长箱或自然光）3.材料、仪器设备与试剂第十页，共二十七页，2022年，8月28日目镜测微尺(目尺)：是一块可放在目镜内隔板上的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种。用以测量经显微镜放大后的物像大小。刻度大小随放大倍数变化而改变。物镜测微尺(物尺)：是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长10μm。

实际长度不受放大倍数影响。专用于校正目镜测微尺(目尺)每格的相对长度。第十一页，共二十七页，2022年，8月28日目镜测微尺

物镜测微尺第十二页，共二十七页，2022年，8月28日4.实验步骤1）计算显微镜视野直径和面积（40×，物尺）

物尺放在视野直径线计算直径，视野面积S=π(d/2)2。2）用物尺标定目尺（40×）

由于不同显微镜镜筒长度不同，或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目尺测量物体大小时，必须先用物尺校正，以计算出在一定放大倍数目镜和物镜下目尺所代表的实际长度，然后才能用来测量物体大小。

第十三页，共二十七页，2022年，8月28日低倍镜下找到物尺，并移至视野中部，高倍镜下标定目尺。

目尺每格＝10×20/29（μm）目尺物尺每格10μm目尺29格对物尺20格第十四页，共二十七页，2022年，8月28日视野10格目尺r=?计算气孔密度17格目尺对应6格物尺目尺每格＝6×10/17（um）测气孔大小目尺17格物尺6格第十五页，共二十七页，2022年，8月28日计算气孔开度？μm第十六页，共二十七页，2022年，8月28日将火棉胶均匀涂抹于叶片下表皮表面，风干2min，用镊子揭开一层薄膜；将薄膜平铺在稍有湿润(哈气)的载玻片上，压上盖玻片，镜检；低倍镜下选视野，高倍镜下观察记数，观察3个视野的气孔数目。3）印记法观察气孔密度第十七页，共二十七页，2022年，8月28日4）固定法观察气孔密度用镊子撕剥叶片下表皮（用刀片切一小口以利于撕取或直接将镊尖插入下表皮后侧拉），迅速（愈快愈好）放入无水乙醇中固定2～3min，把固定好的表皮平放在载玻片上，加几滴无水乙醇，压上盖玻片，镜检，低倍镜下选视野，高倍镜下观察记数，观察3个视野的气孔数目。第十八页，共二十七页，2022年，8月28日5）K+、Na+对气孔开度的影响3个培养皿中分别放0.5%KNO3、0.5%NaNO3溶液和蒸馏水各15ml；每个培养皿放2~3张从相似叶位/相近大小的叶片上取下的下表皮；25℃下，光照处理60min；依次制片和镜下观察气孔开度，记录与开度相应的目尺格数。每个处理随机观察5个气孔。第十九页，共二十七页，2022年，8月28日实验步骤1）计算显微镜视野直径和面积（40×，物尺）2）用物尺标定目尺（40×）3）印记法观察气孔密度：将火棉胶均匀涂抹于叶片下表皮表面，风干2min，用镊子揭开一层薄膜；将薄膜平铺在稍有湿润(哈气)的载玻片上，压上盖玻片，镜检，观察3个视野的气孔数目。4）固定法观察气孔密度：用镊子撕剥叶片下表皮，迅速放入无水乙醇中固定2～3min，把固定好的表皮平放在载玻片上，加几滴无水乙醇，压上盖玻片，镜检，观察3个视野的气孔数目。5）K+、Na+对气孔开度的影响：3个培养皿中分别放0.5%KNO3、0.5%NaNO3溶液和水各15ml；每个培养皿分别放2~3张从相似叶位/相近大小的叶片上取下的下表皮；25℃下，光照处理60min；依次制片和镜下观察气孔开度，记录与开度相应的目尺格数。每个处理随机观察5个气孔。第二十页，共二十七页，2022年，8月28日1）比较印迹法和固定法测定的气孔密度，如果两者结果有差异，试加以分析。5.结果与分析表1不同方法观察的气孔密度方法固定法印迹法

a1a2a3b1b2b3气孔数目平均数视野直径及面积气孔密度(个/mm2)第二十一页，共二十七页，2022年，8月28日

气孔开度（目尺格数）气孔开度(μm)平均开度(μm)

a1a2KNO3a3a4a5b1b2NaNO3b3b4b5c1c2H2Oc3c4c5目尺标定记录：表2不同溶液处理后的气孔开度2）以H2O为对照，分析比较K+、Na+对气孔开度的影响。第二十二页，共二十七页，2022年，8月28日6.注意事项

首先确定显微镜好用；胶棉液涂均匀、超薄一层；叶表皮取下后要迅速投入乙醇（2秒）；物镜测微尺安全使用，切勿压破，载物台由近及远，缓慢调节；先低倍镜下找到视野后，高倍镜下观察气孔数目、大小或标定目尺；物尺放在视野直径线计算直径；物尺和目尺0刻度对齐再标定，之后即可还物尺；固定法、印迹法各观察3个视野；