版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
关于大肠杆菌染色体的制备第一页,共九页,2022年,8月28日一、实验目的1.掌握制备大肠杆菌染色体DNA的方法2.为PCR扩增目的基因的实验准备好模板
第二页,共九页,2022年,8月28日二、实验原理
大肠杆菌染色体DNA的制备首先收集对数生长期的细胞,然后用SDS破裂细胞,破细胞后,蛋白质经蛋白酶消化、酚:氯仿除去,最后用乙醇沉淀核酸,RNA经RNA酶消化除去,最终获得了染色体DNA。第三页,共九页,2022年,8月28日三、实验准备
1.菌株
大肠杆菌DH5α2.仪器
离心机
3.器皿
玻璃离心管(10mL)、移液管(10mL、5mL)、微量取样器、烧杯、玻璃棒、试管、三角瓶
第四页,共九页,2022年,8月28日
4.试剂
(1)LB完全肉汤培养液:1%胰蛋白胨、0.5%酵母粉、0.1%NaClpH7.4。
(2)SET溶液:20%蔗糖、50mmol/LTris—HCl(pH7.6)、50mmol/LEDTA。
(3)20%SDS
(4)酚:氯仿(5)乙醇(6)RNase溶液(7)蛋白酶K20mg/ml
第五页,共九页,2022年,8月28日四、实验步骤1.细胞收集已培养好的菌液收集于10mL的离心管中8000rpm离心5min去上清,留沉淀菌体
第六页,共九页,2022年,8月28日2.细胞裂解
沉淀菌体加入溶菌酶液(8mg溶菌酶/1mLSET)加1mL20%SDS,使细胞裂解
50μL20mg/mL蛋白酶,混匀5000rpm离心10min,弃沉淀
第七页,共九页,2022年,8月28日3.DNA分离取上清加等体积的酚:氯仿,混匀3500rpm离心10min
取上清加入2倍体积的乙醇沉淀核酸3500rpm离心10min弃上清加RNase溶液
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 可持续渔业行业发展建议
- 2023年咸阳武功县城镇建设投资有限责任公司招聘考试试题及答案
- 2023年庆阳镇原县中医医院招聘专业技术人员考试试题及答案
- 2023年呼伦贝尔市额尔古纳市招聘公办幼儿园教师考试试题及答案
- 2023年杭州市上城区专项岗位工作人员招聘笔试真题
- 2024年宝鸡客运从业资格证理论考试题
- 2024年湖北道路客运从业资格证模拟考试题库APP
- 2024年新疆客运从业资格证理论考试答题技巧
- 2024年上海客运从业资格证考试题目和答案图片
- 线上混合式学习平台行业发展建议
- 太阳能光伏技术在农业灌溉中的应用实践
- 《妇病行》教师教学
- GB/T 13777-2024棉纤维成熟度试验方法显微镜法
- 项目实施方案及服务措施
- 基于DSP的微机保护实验教学系统的上位机软件设计与实现的开题报告
- 场运行维护与管
- 农村消防安全培训课件
- 测绘地理信息发展前景分析
- 头晕眩晕出院指导及护理
- 小学三年级上册书法练习指导全册教案
- 2023-2024学年《Web开发基础》试卷及答案解析
评论
0/150
提交评论