2023年云南省沾益县一中高三第四次模拟考试生物试卷（含答案解析）

2023学年高考生物模拟试卷注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号、考场号和座位号填写在试题卷和答题卡上。用2B铅笔将试卷类型（B）填涂在答题卡相应位置上。将条形码粘贴在答题卡右上角"条形码粘贴处"。2．作答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目选项的答案信息点涂黑；如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案。答案不能答在试题卷上。3．非选择题必须用黑色字迹的钢笔或签字笔作答，答案必须写在答题卡各题目指定区域内相应位置上；如需改动，先划掉原来的答案，然后再写上新答案；不准使用铅笔和涂改液。不按以上要求作答无效。4．考生必须保证答题卡的整洁。考试结束后，请将本试卷和答题卡一并交回。一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1．人体内存在由非糖类物质转化为葡萄糖的糖异生途径，据报道，科学家已发现了参与糖异生的一种关键性酶——PEPCKI，其作用过程如下图所示。下列有关叙述正确的是（）①细胞中PEPCKI浓度过低可能会导致糖尿病的发生②PEPCKI基因在细胞内的活跃表达可能与胰高血糖素的作用有关③抑制PEPCKI乙酰化为治疗和预防糖尿病提供可能④血糖浓度过高会抑制糖异生途径的调节方式属于负反馈调节A．①② B．②③ C．②④ D．③④2．番茄营养丰富，栽培广泛。为提高温室番茄产量，研究补光时长和补光光质对番茄净光合速率Pn（即光合作用合成有机物的速率减去呼吸作用消耗有机物的速率）的影响，结果如图所示。下列相关叙述不正确的是（）A．延长补光时间可提高净光合速率B．补充3种光质均能提高净光合速率C．补充红光与蓝光可能提高了合成有机物的速率D．延长光照4h效果最佳3．有机磷农药分子不能单独引起免疫反应。在制备检测有机磷农药分子的单克隆抗体时，要先将有机磷农药分子经特定处理后，再将其多次注入小鼠，经测定相关指标合格后，才从脾脏中提取相应细胞与肿瘤细胞进行融合。下列叙述正确的是A．有机磷农药分子经特定处理的目的是制备供免疫细胞识别的抗原B．经特定处理的有机磷农药分子多次注入小鼠是为了促进记忆T细胞产生C．处理后的有机磷农药分子注入小鼠的次数由血液中有机磷农药分子的浓度决定D．从脾脏中提取的B淋巴细胞与肿瘤细胞两两融合形成3种能增殖的杂交瘤细胞4．关于细胞的生命历程的叙述，正确的是（）A．杨树根尖分生区细胞在分裂间期进行中心体和DNA的复制B．能合成ATP的细胞不一定发生了分化C．分泌旺盛的唾液腺细胞中不存在与细胞凋亡有关的基因D．细胞衰老导致细胞彼此之间的黏着性降低，易分散转移5．某科研小组研究某池塘内草鱼种群增长速率的变化规律（如图1，其中T2之前的数据丢失）和该草鱼种群同化量的分配及流向（如图2），下列叙述正确的是（）A．T2--T4时间段内，种群数量呈“S”型增长；T4—T5时间段内，种群数量逐渐下降B．当种群增长速率为m时，该草鱼的年龄组成为稳定型C．图2中“？”代表的是草鱼种群产生的粪便中的能量D．图2中两个营养级之间的能量传递效率为D/（A+B+C+D）6．下列关于光合作用的叙述，正确的是（）A．光反应只能在有光条件下进行，暗反应只能在黑暗中进行B．光反应是在叶绿体类囊体上进行，暗反应只能在叶绿体基质中进行C．影响光反应的外界因素仅有光照强度，影响暗反应的外界因素只是CO2浓度D．光反应为暗反应提供[H]和ATP，暗反应需要不止一种酶的催化二、综合题：本大题共4小题7．（9分）营养缺陷型菌株就是在人工诱变或自发突变后，微生物细胞代谢调节机制中的某些酶被破坏，使代谢过程中的某些合成反应不能进行的菌株。这种菌株能积累正常菌株不能积累的某些代谢中间产物，为工业生产提供大量的原料产物。以下是实验人员利用影印法初检氨基酸缺陷型菌株的过程。回答下列问题：（1）过程①的接种方法为______，与基本培养基（只含碳源、无机盐、水）相比，待测培养皿中特有的成分有______。（2）进行②过程培养时，应先将丝绒布转印至基本培养基上，原因是______。从______培养基上获得相应的营养缺陷型菌株。釆用影印法培养的优点是______。（3）为了进一步完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员进行了如下操作：①用接种针挑取______（填“菌落A”或“菌落B”）接种于盛有完全培养液的离心管中，28℃振荡培养1～2天后，离心，取沉淀物用______洗涤3次，并制成菌悬液。②吸取1mL菌悬液加入无菌培养皿中，倾注15mL融化并冷却至45〜50℃的基本培养基，待其冷凝后用记号笔在皿底划分五个区域，标记为A、B、C、D、E。③在划分的五个区域上放入少量分组的氨基酸粉末（如下表所示），经培养后，观察生长圈出现的区域，从而确定属于何种氨基酸缺陷型。组别所含氨基酸A组氨酸苏氨酸谷氨酸天冬氨酸亮氨酸B精氨酸苏氨酸赖氨酸甲硫氨酸苯丙氨酸C酪氨酸谷氨酸赖氨酸色氨酸丙氨酸D甘氨酸天冬氨酸甲硫氨酸色氨酸丝氨酸E半胱氨酸亮氨酸苯丙氨酸丙氨酸丝氨酸在上述鉴定实验中，发现在培养基A、D区域出现生长圈，说明该营养缺陷型菌株属于______。8．（10分）某种质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，它们的识别序列和黏性末端各不相同，该质粒同时含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。科学家利用此质粒培育转基因抗盐作物，提高粮食种植面积取得重大进展。其培育过程如下图，请回答下列问题。（1）在构建重组质粒时，应选用________两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组质粒序列的唯一性。（2）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法（使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测重组质粒是否导入了土壤农杆菌。培养基除了含有土壤农杆菌生长繁殖必需的成分和琼脂外，培养基A和培养基B分别还要含有______、______________。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是____（填数字）菌落中的细菌。（3）为了确定抗盐作物是否培育成功，要用__________标记的含抗盐基因的DNA片段作探针进行分子杂交检测，还要从个体水平用__________（方法）鉴定作物的耐盐性。（4）将转入抗盐基因的工程细胞培育成完整植株需要用组织培养技术，组织培养技术依据的原理是________________________。（5）将抗盐基因导入作物细胞内，使作物具有了抗盐性状，这种变异类型属于_________。9．（10分）历史上塞罕坝林场由于过度采伐，土地日渐贫瘠，森林覆盖率只有1．4%。自1962年，塞罕坝林场三代建设者在“黄沙遮天日，飞鸟无栖树”的荒漠沙地上艰苦奋斗、甘于奉献，使森林覆盖率达到80%，创造了荒原变林海的人间奇迹。回答下列相关问题：（1）对遭受破坏的塞罕坝林场进行恢复，就是要恢复林场的结构和功能。林场生态系统的结构包括____________和______________两方面，在恢复过程中首先要恢复的成分是__________。（2）荒原变林海的过程中，植物的垂直结构日益复杂，这种垂直结构的生态学意义是_______________（答出两点）。（3）为了防治害虫，林场建设者施用人工合成的性引诱剂诱杀害虫的雄性个体来降低害虫的发生率，其原理是_____________________________________。（4）塞罕坝林场的主要树种为针叶松，其常见病虫害之一为松毛虫。林场建设者提出了防治松毛虫的两种方案：方案一是喷施高效农药；方案二是投放松毛虫的天敌松毛虫寄生蜂。请对上述两种方案进行评价：_______________________________________________________。10．（10分）萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。（1）研究者用相同的_________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经_________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。①这是一种定点的_________技术。②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和_________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较_________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是_________。11．（15分）我国长江中下游某大型淡水湖泊中存在“浮游植物→浮游动物→小型鱼虾→大型鱼类”的捕食关系。由于人类过度捕捞大型鱼类和大量生活生产污水入湖，造成蓝藻大量繁殖，形成水华，局部湖区生态系统崩溃。回答下列问题。（1）浮游动物属于第__________营养级，其同化能量的去向包括__________________。（2）大量生活生产污水入湖，造成蓝藻大量繁殖的原因包括________________（填序号）。①污水中的有机物被蓝藻直接利用②污水中的无机物被蓝藻直接利用③分解者将污水中的有机物分解为无机物，被蓝藻利用④蓝藻将污水中的有机物分解为无机物，被自身利用（3）过度捕捞和大量污水入湖造成局部湖区生态系统崩溃，原因是外界干扰强度超过了生态系统的______________________。（4）对该湖泊进行生态修复，修复过程中群落演替的类型为____________演替，该过程中大型鱼类的种群数量将以___________型增长方式恢复。大型鱼类数量的恢复有助于降低浮游植物的数量，从种间关系分析，原因是___________________。

2023学年模拟测试卷参考答案（含详细解析）一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1、C【答案解析】

据图分析：PEPCKI是参与糖异生的一种关键性酶，血糖浓度升高，可促进PEPCKI乙酰化，从而加速PEPCKI的水解，使糖异生途径受阻，从而减少血糖的来源。【题目详解】①PEPCKI是参与糖异生的一种关键性酶，细胞中PEPCKI浓度过高会导致血糖浓度过高，可能会导致糖尿病发生，①错误；②胰高血糖素能使非糖物质转化为葡萄糖，而PEPCKI能使糖异生为葡萄糖，所以PEPCKI基因在细胞内的活跃表达可能与胰高血糖素的作用有关，②正确；③加快PEPCKI乙酰化可促进PEPCKI的水解，使糖异生途径受阻，可以为预防和治疗糖尿病提供可能，③错误；④血糖浓度升高后通过促进PEPCKI乙酰化从而抑制糖异生作用，该过程属于负反馈调节，④正确。综上分析，C正确，ABD错误。故选C。2、D【答案解析】

由图可知，与对照组相比，补光2小时的条件下，单独补蓝光和补红光的促进净光合速率的效果相同，补充红蓝复合光比单独补蓝光和单独补红光的促进净光合速率的效果更佳。与对照组相比，补光4小时的条件下，单独补蓝光和补红光的促进净光合速率的效果相同，补充红蓝复合光比单独补蓝光和单独补红光的促进净光合速率的效果更佳。且同等光质条件下，补光的时间越长，促进净光合速率的效果更强。【题目详解】A、据图分析，与补光时长2h相比，补光时长4h的净光合速率在三种光质下都提高了，说明延长补光时间可以提高净光合速率，A正确；B、与对照组相比，补充三种光质后净光合速率都提高了，B正确；C、与其他光质相比，叶绿素与类胡萝卜素主要吸收红光和蓝紫光，所以补充红光与蓝光提高净光合速率，可能是提高了合成有机物的速率，C正确；D、该实验没有延长光照大于4h的实验数据，无法判断每日补光4h是否最佳，D错误。故选D。3、A【答案解析】

根据题干信息分析，制备有机磷农药分子的单克隆抗体时，先将有机磷农药分子经过特殊处理作为抗原，多注注射到小鼠体内引起小鼠体液免疫反应，从脾脏中提取相应的效应B细胞（浆细胞），再与肿瘤细胞结合形成杂交瘤细胞，由杂交瘤细胞分泌单克隆抗体。【题目详解】A、根据以上分析可知，有机磷农药分子经特定处理后可以作为抗原引起机体免疫反应，A正确；B、经特定处理的有机磷农药分子多次注入小鼠是为了促进效应B细胞产生，B错误；C、处理后的有机磷农药分子注入小鼠的次数由血液中产生的效应B细胞的数量决定，C错误；D、从脾脏中提取的B淋巴细胞与肿瘤细胞两两融合形成3种融合细胞，但是其中能增殖的杂交瘤细胞只有1种，D错误。故选A。4、B【答案解析】

1、细胞分化是指在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态，结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。细胞分化的实质：基因的选择性表达。2、细胞凋亡是由基因决定的细胞编程序死亡的过程。细胞凋亡是生物体正常的生命历程，对生物体是有利的，而且细胞凋亡贯穿于整个生命历程。3、衰老细胞的特征：（1）细胞内水分减少，细胞萎缩，体积变小，但细胞核体积增大，染色质固缩，染色加深；（2）细胞膜通透性功能改变，物质运输功能降低；（3）细胞色素随着细胞衰老逐渐累积；（4）有些酶的活性降低；（5）呼吸速度减慢，新陈代谢减慢。4、癌细胞的主要特征：（1）无限增殖；（2）形态结构发生显著改变；（3）细胞表面发生变化，细胞膜上的糖蛋白等物质减少，易转移。【题目详解】A、杨树根尖分生区细胞没有中心体，A错误；B、细胞中绝大数需要能量的生命活动都是由ATP直接提供能量的，因此，能合成ATP的细胞不一定发生了分化，B正确；C、分泌旺盛的唾液腺细胞中存在与细胞凋亡有关的基因，只不过暂时没有表达，C错误；D、细胞癌变导致细胞彼此之间的黏着性降低，易分散转移，D错误。故选B。5、D【答案解析】

分析图1：该曲线表示S型曲线的种群增长速率，其中T3对应的种群数量为K/2，T5对应的种群数量为K值。分析图2：图2是该生态系统中鱼摄食后能量的流向示意图，其中A表示呼吸作用消耗的能量；BCD表示鱼生长、发育和繁殖；C表示被分解者利用。【题目详解】A、0-T5时间段内，种群数量呈“S”型增长，T4-T5时间段内，种群增长速率虽然下降，但种群数量逐渐上升，A错误；B、当种群增长速率为m时，该草鱼的年龄组成为增长型，B错误；C、图2中的同化的总能量，除图中所示去路外，还有一部分是未被利用，即“？”表示，C错误；D、图2中两个营养级之间的能量传递效率为D/（A+B+C+D），D正确。故选D。6、D【答案解析】

光合作用指绿色植物通过叶绿体，利用光能，把二氧化碳和水转化成储存能量的有机物，并释放出氧气的过程。【题目详解】A、光反应只能在有光条件下进行，而暗反应在有光条件下和黑暗中都可以进行，A错误；B、绿色植物细胞的光反应在叶绿体类囊体上进行，暗反应在叶绿体基质中进行，而蓝藻等原核细胞的光合作用在细胞质中进行，B错误；C、影响光反应的外界因素主要是光照强度，影响暗反应的外界因素主要是CO2浓度和温度，影响光合作用的因素还有水、无机盐离子等，C错误；D、光反应为暗反应提供[H]和ATP，暗反应需要多种酶的催化，D正确。故选D。【答案点睛】光合作用的影响因素有：光照强度、温度、二氧化碳浓度、色素、酶等。二、综合题：本大题共4小题7、稀释涂布平板法氨基酸防止将特定营养成分带入培养基完全同种菌株的接种位置相同菌落A无菌水天冬氨酸缺陷型【答案解析】

分析题图：图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用“影印法”将菌种接种到两种培养基中：基本培养基、完全培养基。在基本培养基中，氨基酸缺陷型菌株不能生长，而在完全培养基中能够生长，据此可以选择出氨基酸缺陷型菌株。【题目详解】（1）根据过程①培养的效果图可以判断，该过程所采用的接种方法为稀释涂布平板法。图示为实验人员利用影印法初检氨基酸缺陷型菌株的过程，据此可知：与基本培养基（只含碳源、无机盐、水）相比，待测培养皿中的特有的成分有氨基酸。（2）为了防止将特定营养成分带入培养基，进行②过程培养时，应先将丝绒布转印至基本培养基上。氨基酸缺陷型菌株只能在完全培养基或补充了相应的氨基酸的基本培养基中生长，因此应从题图中完全培养基上获得相应的营养缺陷型菌株。釆用影印法培养的优点是同种菌株的接种位置相同。（3）为了进一步完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，结合对（2）的分析可知：①用接种针挑取菌落A接种并培养；离心后菌株存在于沉淀物中，为了防止杂菌污染，需取沉淀物用无菌水洗涤3次，并制成菌悬液。③表中信息显示：A、D区域含有、其它区域不含有的氨基酸是天冬氨酸，而实验结果只有A、D区域出现生长圈，说明该营养缺陷型菌株属于天冬氨酸缺陷型。【答案点睛】本题考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求考生能够根据题干信息确定该菌种的筛选过程，同时能够根据表格信息确实菌体缺陷的氨基酸种类，意在考查考生的信息处理能力。8、SalⅠHindⅢ氨苄青霉素四环素（或答氨苄青霉素和四环素）4和6放射性同位素（或荧光素）一定浓度的盐水浇灌作物（将作物移栽到盐碱地中种植）细胞的全能性基因重组【答案解析】

分析第一个图：图示为转基因抗盐作物的培育过程，首先构建基因表达载体；其次采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞（作物细胞）；再采用植物组织培养技术将含有目的基因的作物细胞培养成转基因抗盐作物。分析第二个图：图示为筛选含有重组质粒的农杆菌的过程，培养基A和B中应该分别加入氨苄青霉素、四环素。【题目详解】（1）质粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，其中BamHⅠ的切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因；若只用SalⅠ一种限制酶切割可能会导致目的基因与运载体反向连接；因此在构建重组质粒时，应选用SalⅠ和HindⅢ两种限制酶对质粒和抗盐基因进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。（2）用SalⅠ和HindⅢ两种限制酶对质粒进行切割时，会破会四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的农杆菌能在含有氨苄青毒素的培养基上能生存，但不能在含有四环素培养基上生存，所以培养基A和培养基B分别还含有氨苄青霉素、四环素，含目的基因的是4和6菌落中的细菌。（3）探针是指用放射性同位素标记的目的基因（抗盐基因）。除了从分子水平上进行检测，还可以从个体水平上进行鉴定，即用一定浓度的盐水浇灌作物来鉴定作物的耐盐性。（4）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术，组织培养技术依据的原理是细胞的全能性。（5）将抗盐基因导入作物细胞内，使作物具有了抗盐性状，这属于基因工程技术，变异类型是基因重组。【答案点睛】本题结合转基因抗盐作物的培育过程图，考查基因工程、植物组织培养等知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，能根据图中限制酶的位置及题干要求选择正确的限制酶；能根据题中信息判断培养基中抗生素的名称；识记植物组织培养过程及条件。9、生态系统的组成成分营养结构（食物链和食物网）生产者提高群落利用阳光等环境资源的能力；为动物创造了多种多样的栖息空间和食物条件破坏害虫正常的性别比例降低种群的出生率，从而降低害虫的种群密度喷洒髙效农药可降低生物多样性，导致虫害再次爆发；还会造成环境污染。放养松毛虫寄生蜂可以长期控制害虫数量，维持生态平衡；同时不会造成环境污染【答案解析】

1.生态系统的结构：生态系统的成分和营养结构。

2.群落的结构：水平结构和垂直结构。

3.目前控制动物危害的技术大致有化学防治、机械防治和生物防治。【题目详解】（1）生态系统的结构包括生态系统的组成成分和营养结构。生产者是生态系统的基石，在生态系统的恢复过程中，首先要恢复的成分是生产者。（2）在垂直方向上，大多数群落具有明显的群落分层现象，形成群落的垂直结构。群落的垂直结构显著提高群落利用阳光等环境资源的能力以及为动物创造了多种多样的栖息空间和食物条件。（3）性别比例通过影响出生率和死亡率来影响种群密度，用人工合成的性引诱剂诱杀害虫的雄性个体，破坏害虫正常的性别比例降低种群的出生率，从而降低害虫的种群密度。（4）喷施高效农药属于化学防治，这种防治方法会降低生物多样性，导致虫害再次爆发；还会造成环境污染。投放松毛虫的天敌松毛虫寄生蜂属于生物防治，这种方法可以长期控制害虫数量，维持生态平衡；同时不会造成环境污染。因此建议采用生物防治才是长久之计。【答案点睛】本题考查生态系统的结构，群落结构的相关知识，要求考生识记相关知识，掌握群群落结构、生态系统稳定性和生态系统结构，能结合所学的知识准确回答，属于考纲识记和理解层次的考查。10、限制酶和DNA连接CaCl2基因突变引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）抗原-抗体杂交抑菌圈对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高【答案解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2、“分子缝合针”——DNA连接酶（1）两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E•coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3、“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。3、PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。第三步：将目的基因导入受体细胞1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2、常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3、重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1、首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。2、其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3、最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。4、有时还需进行个体生物学水平的鉴定，如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。【题目详解】（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA连接酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒；大肠杆菌作为受体细胞，需要用氯化钙处理，以便重组质粒的导入。（2）①根据题意和图示分析，经过4次PCR技术后获得了新的基因，这是一种定点的基因突变技术。②与研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），因此4次PCR应该分别选择如图所示的引物如下表所示：引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√（3）根据实验中的对照原则，若要比较新蛋白A的表达效率是否提高，则需设置三组实验实验变量的处理分别为：仅含新蛋白质A的重组质粒，仅含蛋白A的重组质粒和空白对照（仅含空质粒，以排除空质粒可能产生的影响）。因此，将含有新蛋白A基因的重组质粒和含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）分别导入大