高效液相色谱培训课件

高效液相色谱培训2022/12/22高效液相色谱培训高效液相色谱培训2022/12/19高效液相色谱培训1基本原理和特点液相色谱仪器部件实验操作与应用日常维护高效液相色谱培训基本原理和特点高效液相色谱培训2基本原理和特点

基本原理：溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationaryphase)发生作用(吸附,分配,离子吸引,排阻,亲和)的大小,强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出.特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。高效液相色谱培训基本原理和特点

基本原理：溶于流动相(mobilephas3一些商品化仪器脱气装置四元泵检测器柱温箱样品盘控温箱流动相高效液相色谱培训一些商品化仪器脱气装置四元泵检测器柱温箱样品盘控温4启动液相色谱仪器的流程开启HPLC系统各个设备的电源打开泵、自动进样器、检测器电源，待设备通过自检后，打开计算机启动色谱管理软件准备流动相过滤，脱气色谱泵排气用新配制的流动相灌注泵高效液相色谱培训启动液相色谱仪器的流程开启HPLC系统各个设备的电源高效液5高效液相色谱仪组成输液系统进样系统分离系统检测系统数据记录处理系统高效液相色谱培训高效液相色谱仪组成输液系统高效液相色谱培训6溶剂色谱泵自动进样器

HPLC色谱柱检测器废液数据处理系统液相色谱流程图高效液相色谱培训溶剂色谱泵自动进样器HPLC色谱柱检测器废液数据处理系统7高效液相色谱培训高效液相色谱培训8液相色谱的流动相高效液相色谱培训液相色谱的流动相高效液相色谱培训9液相柱---保留值与pH的关系pH变化值0.1RS变化值1.6色谱柱：ZorbaxStableBondC184.6*250mm,5um流动相：27%甲醇：73%磷酸pH：2.5&2.6温度：50℃流速：1.0mL/min.高效液相色谱培训液相柱---保留值与pH的关系pH变化值RS变化值1.6色102.流动相类别

按流动相组成分：单组分和多组分按极性分：极性、弱极性、非极性按使用方式分：等度洗脱和梯度洗脱

高效液相色谱培训2.流动相类别按流动相组成分：单组分和多11对溶剂的要求水：去离子水自动纯水仪纯净水商品瓶装水溶剂:

色谱纯（甲醇，乙腈，乙醇，丙酮，异丙醇）试剂:分析纯高效液相色谱培训对溶剂的要求水：高效液相色谱培训12不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质要求越高放置时间越短。理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。

高效液相色谱培训不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质要求越高放置时间13过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：

1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积

2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形

3）检测器中的气泡产生基线波动

过滤与脱气高效液相色谱培训过滤：0.45um或更小孔径滤膜过滤与脱气高效液相色谱培训14高效液相色谱培训高效液相色谱培训15高效液相色谱培训高效液相色谱培训16流动相的保存有机溶剂流动相：室温下密封，避光保存缓冲盐流动相：当日现配现用：低温下密封保存，一般不超过3天防止微生物生长有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相：低温密封保存防止有机相的挥发选用适宜的容器高效液相色谱培训流动相的保存有机溶剂流动相：高效液相色谱培训171．梯度洗脱的特点（1）改善分离,加快分析速度；（2）改善峰形,减少拖尾,有利于痕量组分的检测；（3）增加峰容量；（4）强烈滞留的组分不容易残留在柱上,保持柱性能长期良好；（5）下次分析时,流动相需要一段平衡时间；不同溶剂的UV吸收程度稍有差异,可能会引起基线漂移高效液相色谱培训1．梯度洗脱的特点（1）改善分离,加快分析速度；高效液相色182．梯度洗脱的主要条件①A流动相/弱溶剂组成；②B流动相/强溶剂组成；③梯度时间；④梯度曲线：线性、凸型或凹型等。强溶剂

A%time125高效液相色谱培训2．梯度洗脱的主要条件①A流动相/弱溶剂组成；强溶剂19梯度洗脱123高效液相色谱培训梯度洗脱123高效液相色谱培训20高效液相色谱培训高效液相色谱培训21梯度：低压混合低压梯度用单泵产生梯度，泵前（低压端）混合对脱气要求高不易调节梯度的滞后体积如设计不当，梯度的

准确性受影响滞后体积（系统

体积）设计合理高效液相色谱培训梯度：低压混合低压梯度高效液相色谱培训22梯度滞后：系统体积的影响死体积/谱带展宽体积(无色谱柱时)滞后(系统)体积滞后(系统)体积溶剂输送系统(泵)检测器进样器色谱柱梯度混合器溶剂输送系统(泵)高压梯度注意∶滞后体积包括进样器、阻尼器、混合器及其管路比例阀检测器进样器ABCD色谱柱溶剂输送系统(泵)低压梯度阻尼器混合器高效液相色谱培训梯度滞后：系统体积的影响死体积/谱带展宽体积(无色谱柱时)滞23梯度滞后大小的影响滞后体积太大会引起梯度变化的延迟例如：滞后体积为2.0ml，流速1.0ml/min实际梯度会比设置值晚2分钟响应，没有问题对微柱色谱影响更大，同上例但流速0.1ml/min实际梯度会比设置值晚20分钟响应，不能接受滞后体积的不同会使方法转换麻烦滞后体积比文献大或小都会使方法不能重现滞后体积的变化会导致梯度重现性不好普通分析型液相色谱的滞后体积为2~4ml高效液相色谱培训梯度滞后大小的影响滞后体积太大会引起梯度变化的延迟高效液相色24滞后体积变化的影响设计不好的HPLC系统，滞后体积随反压变化滞后体积随反压变化的后果：梯度的准确性不好，造成：方法的适应性不好用静态梯度混合器；固定滞后体积可明显改善梯度特性梯度百分比保留时间梯度曲线好的梯度滞后曲线保留时间梯度百分比不好的梯度滞后曲线固定滞后体积，改善了梯度性能普通的低压梯度系统高效液相色谱培训滞后体积变化的影响设计不好的HPLC系统，滞后体积随反压变化25液相色谱的色谱柱高效液相色谱培训液相色谱的色谱柱高效液相色谱培训26高效液相色谱培训高效液相色谱培训27色谱柱的连接Stop_depth长度不合适造成柱前死体积高效液相色谱培训色谱柱的连接Stop_depth长度不合适造成柱前死体积28锥箍锥度不合适造成渗漏色谱柱的连接高效液相色谱培训锥箍锥度不合适造成渗漏色谱柱的连接高效液相色谱培训29除去柱上端固定相变色部分(约3mm左右)，再补充新的固定相。色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效将明显下降，选合适的溶剂进行洗净。采用梯度洗脱时，柱在重复使用前，用泵把几倍于柱体积的起始溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再生。可能提高柱效的方法高效液相色谱培训除去柱上端固定相变色部分(约3mm左右)，再补充新的固定相30HPLC检测器应提供的功能对样品有响应并有一个输出信号应该提供在检测器响应值与样品浓度之间的线性关系；并且所设计的校正技术应该促进这种关系高效液相色谱培训HPLC检测器应提供的功能对样品有响应并有一个输出信号高效液31理想的HPLC检测器高灵敏度；可忽略的基线噪音宽的线性范围独立于流动相及操作参数的响应对压力、温度及流速等变化不敏感长时间操作的稳定性低死体积非破坏性选择性高效液相色谱培训理想的HPLC检测器高灵敏度；可忽略的基线噪音高效液相色谱培32灵敏度：信噪比灵敏度是信号与噪音的比值；即峰高与基线噪音的比值（S/N）检测限（LOD）：S/N=2~4定量限（LOQ）：S/N=8~10好的信噪比有利于：更好的色谱峰确认更好的定量更好地完成色谱峰纯度/均一性 6:1NS高效液相色谱培训灵敏度：信噪比灵敏度是信号与噪音的比值；即峰高与基线噪音的比33吸光度（AbsorbanceUV/Vis）检测目前实验室中最流行的选择多数公司约75%的检测器是吸光度检测器（其中50%是多波长，25%是PDA）测量通过溶液后的紫外或可见光光强度的损失吸光度与样品浓度呈线性关系在被测物的最大吸收波长处检测时灵敏度最大高效液相色谱培训吸光度（AbsorbanceUV/Vis）检测目前实验室中34吸光度检测器（UV/Vis）－优点这种检测器简单、可靠多数人熟悉并喜欢这种技术可以作梯度实验并且是非破坏性的大多数有机化合物有一定程度的吸光度一般来说灵敏度还可以AU0.000.050.100.15Minutes0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.00Parabensat254nm高效液相色谱培训吸光度检测器（UV/Vis）－优点这种检测器简单、可靠AU35吸光度检测器（UV/Vis）－缺点由于不是所有化合物都有吸光度，因此不是通用检测器对某些化合物的检测灵敏度不及其他检测器样品中不同化合物的最大吸收波长不同时，需要使用多波长检测，或使用折衷的波长受流动相组成的影响：用截止波长以上至少5～10nm作为工作波长缓冲盐、离子对试剂、胺改性剂也会有影响高效液相色谱培训吸光度检测器（UV/Vis）－缺点由于不是所有化合物都有吸36背景吸收对紫外检测器噪音的影响UVSpectrumofEluentswith0.1%TFAAgainstHPLCGradeH2OBlankAU0.000.100.200.300.400.500.600.700.800.901.001.101.201.301.401.50nm200.00210.00220.00230.00240.00250.00260.00270.00280.00290.00H20with0.1%TFA50%ACNwith0.1%TFA高效液相色谱培训背景吸收对紫外检测器噪音的影响UVSpectrumof37溶剂混合的基线噪音色谱条件色谱柱：

C18,

5µm,3.9x150mmat35ºC.流动相：

A:0.1%TFAinWater. B:0.1%TFAinAcetonitrile.梯度：5-40%Bin35min.流速：1.0mL/min.样品：水（10µLinj.vol.）检测：214nm

图1；好的梯度系统

图2；一般的二元梯度系统

图3；一般的四元梯度系统高效液相色谱培训溶剂混合的基线噪音色谱条件图1；好的梯度系统图2；一38为何如此重要？五个小肽的5ng进样，好的色谱系统非常容易鉴别出所有峰。在不好的色谱系统中，第一个峰则消失在基线噪音中。高效液相色谱培训为何如此重要？五个小肽的5ng进样，好的色谱系统非常容易鉴别39基线噪音对积分的影响1.2241.1831.183Caffeine@271nm高效液相色谱培训基线噪音对积分的影响1.2241.1831.183Caffe40维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器进样器检测器高效液相色谱培训维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器进样器检测器高效液41吸滤头－－定期清洗，更换溶剂时单向阀－－定期清洗，压力波动大时泵－－自动清洗在线过滤器－压力大时清洗高效液相色谱培训吸滤头－－定期清洗，更换溶剂时高效液相色谱培训42材料：不锈钢烧结，孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用5％稀硝酸，超声波清洗，再用蒸馏水清洗吸滤头高效液相色谱培训材料：不锈钢烧结，孔径10um吸滤头高效液相色谱培训43高效液相色谱培训高效液相色谱培训44高效液相色谱培训高效液相色谱培训45故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：打开排液阀，以异丙醇为流动相输液拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗单向阀高效液相色谱培训故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好单向阀高效液相色谱培训46故障：堵塞现象：系统压力波动大或压力偏高措施：5％稀硝酸，超声波清洗判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力>3kgf/cm2，则堵塞。线路过滤器排液阀压力传感器线路过滤器流动相高效液相色谱培训故障：堵塞线路过滤器排液阀压力传感器线路过滤器流动相高效液相47泵的保养：使用流动相尽量要清洁；进液处的砂芯过滤头要经常清洗；流动相交换时要防止沉淀；避免泵内堵塞或有气泡；每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染；高效液相色谱培训泵的保养：使用流动相尽量要清洁；高效液相色谱培训48柱的保养：柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净；要注意流动相的脱气；避免使用高粘度的溶剂作为流动相；进样样品要提纯；严格控制进样量；每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；高效液相色谱培训柱的保养：柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；高效液相49色谱柱柱内体积和平衡时间单次样品运行时间=分析时间+色谱柱平衡时间色谱柱平衡时间=10倍柱内体积÷流速

4.6x50 0.5mL 5min 4.6x30 0.3mL 3min 4.6x15 0.15mL 1.5min 4.6x150 1.54mL 15min

2.1x50 0.10mL 5min 60sec 2.1x30 0.06mL 3min 36sec 2.1x15 0.03mL 1.5min 18sec

色谱柱 柱内平衡时间 尺寸 体积流速

(mm) (Vm)1.0mL/min

色谱柱 柱内平衡时间 尺寸 体积流速

(mm) (Vm)0.2mL/min1.0mL/min高效液相色谱培训色谱柱柱内体积和平衡时间单次样品运行时间=分析时间+50色谱柱清洗保存反相色谱柱：用20%甲醇溶液清洗10个柱体积，保存在90%的甲醇溶液中。分子筛色谱柱：用纯水清洗10个柱体积，保存在5%叠氮化钠水溶液中。离子色谱柱：用0.02M盐，pH6.5溶液清洗10个柱体积，保存在含5%叠氮化钠0.02M盐，pH6.5溶液中。短期保存在低盐的流动相中。高效液相色谱培训色谱柱清洗保存高效液相色谱培训51灯的保养：在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。样品池要保养高效液相色谱培训灯的保养：在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成52谢谢！高效液相色谱培训谢谢！高效液相色谱培训53演讲完毕，谢谢听讲!再见，seeyouagain3rew2022/12/22高效液相色谱培训演讲完毕，谢谢听讲!再见，seeyouagain3rew54高效液相色谱培训2022/12/22高效液相色谱培训高效液相色谱培训2022/12/19高效液相色谱培训55基本原理和特点液相色谱仪器部件实验操作与应用日常维护高效液相色谱培训基本原理和特点高效液相色谱培训56基本原理和特点

基本原理：溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationaryphase)发生作用(吸附,分配,离子吸引,排阻,亲和)的大小,强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出.特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。高效液相色谱培训基本原理和特点

基本原理：溶于流动相(mobilephas57一些商品化仪器脱气装置四元泵检测器柱温箱样品盘控温箱流动相高效液相色谱培训一些商品化仪器脱气装置四元泵检测器柱温箱样品盘控温58启动液相色谱仪器的流程开启HPLC系统各个设备的电源打开泵、自动进样器、检测器电源，待设备通过自检后，打开计算机启动色谱管理软件准备流动相过滤，脱气色谱泵排气用新配制的流动相灌注泵高效液相色谱培训启动液相色谱仪器的流程开启HPLC系统各个设备的电源高效液59高效液相色谱仪组成输液系统进样系统分离系统检测系统数据记录处理系统高效液相色谱培训高效液相色谱仪组成输液系统高效液相色谱培训60溶剂色谱泵自动进样器

HPLC色谱柱检测器废液数据处理系统液相色谱流程图高效液相色谱培训溶剂色谱泵自动进样器HPLC色谱柱检测器废液数据处理系统61高效液相色谱培训高效液相色谱培训62液相色谱的流动相高效液相色谱培训液相色谱的流动相高效液相色谱培训63液相柱---保留值与pH的关系pH变化值0.1RS变化值1.6色谱柱：ZorbaxStableBondC184.6*250mm,5um流动相：27%甲醇：73%磷酸pH：2.5&2.6温度：50℃流速：1.0mL/min.高效液相色谱培训液相柱---保留值与pH的关系pH变化值RS变化值1.6色642.流动相类别

按流动相组成分：单组分和多组分按极性分：极性、弱极性、非极性按使用方式分：等度洗脱和梯度洗脱

高效液相色谱培训2.流动相类别按流动相组成分：单组分和多65对溶剂的要求水：去离子水自动纯水仪纯净水商品瓶装水溶剂:

色谱纯（甲醇，乙腈，乙醇，丙酮，异丙醇）试剂:分析纯高效液相色谱培训对溶剂的要求水：高效液相色谱培训66不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质要求越高放置时间越短。理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。

高效液相色谱培训不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质要求越高放置时间67过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：

1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积

2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形

3）检测器中的气泡产生基线波动

过滤与脱气高效液相色谱培训过滤：0.45um或更小孔径滤膜过滤与脱气高效液相色谱培训68高效液相色谱培训高效液相色谱培训69高效液相色谱培训高效液相色谱培训70流动相的保存有机溶剂流动相：室温下密封，避光保存缓冲盐流动相：当日现配现用：低温下密封保存，一般不超过3天防止微生物生长有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相：低温密封保存防止有机相的挥发选用适宜的容器高效液相色谱培训流动相的保存有机溶剂流动相：高效液相色谱培训711．梯度洗脱的特点（1）改善分离,加快分析速度；（2）改善峰形,减少拖尾,有利于痕量组分的检测；（3）增加峰容量；（4）强烈滞留的组分不容易残留在柱上,保持柱性能长期良好；（5）下次分析时,流动相需要一段平衡时间；不同溶剂的UV吸收程度稍有差异,可能会引起基线漂移高效液相色谱培训1．梯度洗脱的特点（1）改善分离,加快分析速度；高效液相色722．梯度洗脱的主要条件①A流动相/弱溶剂组成；②B流动相/强溶剂组成；③梯度时间；④梯度曲线：线性、凸型或凹型等。强溶剂

A%time125高效液相色谱培训2．梯度洗脱的主要条件①A流动相/弱溶剂组成；强溶剂73梯度洗脱123高效液相色谱培训梯度洗脱123高效液相色谱培训74高效液相色谱培训高效液相色谱培训75梯度：低压混合低压梯度用单泵产生梯度，泵前（低压端）混合对脱气要求高不易调节梯度的滞后体积如设计不当，梯度的

准确性受影响滞后体积（系统

体积）设计合理高效液相色谱培训梯度：低压混合低压梯度高效液相色谱培训76梯度滞后：系统体积的影响死体积/谱带展宽体积(无色谱柱时)滞后(系统)体积滞后(系统)体积溶剂输送系统(泵)检测器进样器色谱柱梯度混合器溶剂输送系统(泵)高压梯度注意∶滞后体积包括进样器、阻尼器、混合器及其管路比例阀检测器进样器ABCD色谱柱溶剂输送系统(泵)低压梯度阻尼器混合器高效液相色谱培训梯度滞后：系统体积的影响死体积/谱带展宽体积(无色谱柱时)滞77梯度滞后大小的影响滞后体积太大会引起梯度变化的延迟例如：滞后体积为2.0ml，流速1.0ml/min实际梯度会比设置值晚2分钟响应，没有问题对微柱色谱影响更大，同上例但流速0.1ml/min实际梯度会比设置值晚20分钟响应，不能接受滞后体积的不同会使方法转换麻烦滞后体积比文献大或小都会使方法不能重现滞后体积的变化会导致梯度重现性不好普通分析型液相色谱的滞后体积为2~4ml高效液相色谱培训梯度滞后大小的影响滞后体积太大会引起梯度变化的延迟高效液相色78滞后体积变化的影响设计不好的HPLC系统，滞后体积随反压变化滞后体积随反压变化的后果：梯度的准确性不好，造成：方法的适应性不好用静态梯度混合器；固定滞后体积可明显改善梯度特性梯度百分比保留时间梯度曲线好的梯度滞后曲线保留时间梯度百分比不好的梯度滞后曲线固定滞后体积，改善了梯度性能普通的低压梯度系统高效液相色谱培训滞后体积变化的影响设计不好的HPLC系统，滞后体积随反压变化79液相色谱的色谱柱高效液相色谱培训液相色谱的色谱柱高效液相色谱培训80高效液相色谱培训高效液相色谱培训81色谱柱的连接Stop_depth长度不合适造成柱前死体积高效液相色谱培训色谱柱的连接Stop_depth长度不合适造成柱前死体积82锥箍锥度不合适造成渗漏色谱柱的连接高效液相色谱培训锥箍锥度不合适造成渗漏色谱柱的连接高效液相色谱培训83除去柱上端固定相变色部分(约3mm左右)，再补充新的固定相。色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效将明显下降，选合适的溶剂进行洗净。采用梯度洗脱时，柱在重复使用前，用泵把几倍于柱体积的起始溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再生。可能提高柱效的方法高效液相色谱培训除去柱上端固定相变色部分(约3mm左右)，再补充新的固定相84HPLC检测器应提供的功能对样品有响应并有一个输出信号应该提供在检测器响应值与样品浓度之间的线性关系；并且所设计的校正技术应该促进这种关系高效液相色谱培训HPLC检测器应提供的功能对样品有响应并有一个输出信号高效液85理想的HPLC检测器高灵敏度；可忽略的基线噪音宽的线性范围独立于流动相及操作参数的响应对压力、温度及流速等变化不敏感长时间操作的稳定性低死体积非破坏性选择性高效液相色谱培训理想的HPLC检测器高灵敏度；可忽略的基线噪音高效液相色谱培86灵敏度：信噪比灵敏度是信号与噪音的比值；即峰高与基线噪音的比值（S/N）检测限（LOD）：S/N=2~4定量限（LOQ）：S/N=8~10好的信噪比有利于：更好的色谱峰确认更好的定量更好地完成色谱峰纯度/均一性 6:1NS高效液相色谱培训灵敏度：信噪比灵敏度是信号与噪音的比值；即峰高与基线噪音的比87吸光度（AbsorbanceUV/Vis）检测目前实验室中最流行的选择多数公司约75%的检测器是吸光度检测器（其中50%是多波长，25%是PDA）测量通过溶液后的紫外或可见光光强度的损失吸光度与样品浓度呈线性关系在被测物的最大吸收波长处检测时灵敏度最大高效液相色谱培训吸光度（AbsorbanceUV/Vis）检测目前实验室中88吸光度检测器（UV/Vis）－优点这种检测器简单、可靠多数人熟悉并喜欢这种技术可以作梯度实验并且是非破坏性的大多数有机化合物有一定程度的吸光度一般来说灵敏度还可以AU0.000.050.100.15Minutes0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.00Parabensat254nm高效液相色谱培训吸光度检测器（UV/Vis）－优点这种检测器简单、可靠AU89吸光度检测器（UV/Vis）－缺点由于不是所有化合物都有吸光度，因此不是通用检测器对某些化合物的检测灵敏度不及其他检测器样品中不同化合物的最大吸收波长不同时，需要使用多波长检测，或使用折衷的波长受流动相组成的影响：用截止波长以上至少5～10nm作为工作波长缓冲盐、离子对试剂、胺改性剂也会有影响高效液相色谱培训吸光度检测器（UV/Vis）－缺点由于不是所有化合物都有吸90背景吸收对紫外检测器噪音的影响UVSpectrumofEluentswith0.1%TFAAgainstHPLCGradeH2OBlankAU0.000.100.200.300.400.500.600.700.800.901.001.101.201.301.401.50nm200.00210.00220.00230.00240.00250.00260.00270.00280.00290.00H20with0.1%TFA50%ACNwith0.1%TFA高效液相色谱培训背景吸收对紫外检测器噪音的影响UVSpectrumof91溶剂混合的基线噪音色谱条件色谱柱：

C18,

5µm,3.9x150mmat35ºC.流动相：

A:0.1%TFAinWater. B:0.1%TFAinAcetonitrile.梯度：5-40%Bin35min.流速：1.0mL/min.样品：水（10µLinj.vol.）检测：214nm

图1；好的梯度系统

图2；一般的二元梯度系统

图3；一般的四元梯度系统高效液相色谱培训溶剂混合的基线噪音色谱条件图1；好的梯度系统图2；一92为何如此重要？五个小肽的5ng进样，好的色谱系统非常容易鉴别出所有峰。在不好的色谱系统中，第一个峰则消失在基线噪音中。高效液相色谱培训为何如此重要？五个小肽的5ng进样，好的色谱系统非常容易鉴别93基线噪音对积分的影响1.2241.1831.183Caffeine@271nm高效液相色谱培训基线噪音对积分的影响1.2241.1831.183Caffe94维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器进样器检测器高效液相色谱培训维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器进样器检测器高效液95吸滤头－－定期清洗，更换溶剂时单向阀－－定期清洗，压力波动大时泵－－自动清洗在线过滤器－压力大时清洗高效液相色谱培训吸滤头－－定期清洗，更换溶剂时高效液相色谱培训96材料：不锈钢烧结，孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用5％稀硝酸，超声波清洗，再用蒸馏水清洗吸滤头高效液相色谱培训材料：不锈钢烧结，孔径10um吸滤头高效液相色谱培训97高效液相色谱培训高效液相色谱培训98高效液相色谱培训高效液相色谱培训99故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：打开排液阀，以异丙醇为流动相输液拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗单向阀高效液相色谱培训故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好单向阀高效液相色谱培训100故障：堵塞现象：系统压力波动大或压力