DB23∕T 3111-2022 大豆抗灰斑病盆栽鉴定技术规程

ICS65.020.20CCSB0523黑龙江省地方标准DB23/T3111—2022大豆抗灰斑病盆栽鉴定技术规程TechnicalspecificationfortheresistanceidentificationofsoybeancultivarsagainstCercosporasojinainpots2022-03-03发布2022-04-02实施DB23/T3111—2022前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。IDB23/T3111—2022大豆抗灰斑病盆栽鉴定技术规程1范围本文件规定了大豆灰斑病盆栽抗性鉴定技术的术语和定义、大豆灰斑菌的繁殖、盆栽抗性鉴定、病情调查及记载、抗性评价和试验档案等。本文件适用于栽培大豆种质资源和野生大豆种质资源对灰斑病盆栽抗性评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T3114.2大豆抗病虫性鉴定技术规范第2部分3术语和定义NY/T3114.2界定的术语和定义适用于本文件。3.1菌种纯化挑取大豆灰斑病菌的单个分生孢子，将其放置于新鲜的PDA平板上，以获得新生菌落的方法。3.23.33.4活化培养将中、长期低温保存的大豆灰斑病菌菌种，重新在新鲜PDA平板上培养的过程。菌种扩繁将活化的大豆灰斑病菌菌种接种在新鲜的高粱粒培养基上培养，获得大量分生孢子的过程。鉴定圃按完全随机区组排列的供试大豆种质的盆栽试验小区。4大豆灰斑病菌的繁殖4.1菌种活化1

DB23/T3111—2022取4℃下保存的供试大豆灰斑病菌生理小种菌株，用接种针挑取小块菌体至新鲜PDA平板上，25℃培养7d～10d，备用。4.2菌种扩繁取活化培养的大豆灰斑病菌菌块（一级培养），移接于灭菌的高梁粒培养基上，25℃～28℃暗培养，每间隔2d充分晃动高粱粒接种瓶，保证每个高粱粒均被感染。15d～20d后洗去高粱粒表面的菌丝，阴干后装入布袋通风干燥处保存备用。5盆栽抗性鉴定5.1鉴定场地的设施条件温室、盆栽场地或人工气候室应具有可控灌溉、光照和通风的条件。5.2鉴定圃的试验设计供试大豆种质设接种处理和未接种处理，每处理3次重复，完全随机区组排列，并使用当地有代表性的抗、感大豆品种作对照。5.3播种播种时间根据试验需要而定，采用人工点播，株距3～5cm，盆栽盆宜选用口径30cm、桶深30cm的盆钵，每盆播种3～5株，或根据实际盆钵大小，每处理保苗至少10株。5.4接种5.4.1孢子悬浮液制备取阴干保存的二级菌种，用无菌水浸泡2h～3h后，洗净高粱粒表面的菌丝体，将其置于铺有灭菌滤纸的托盘中摊平，覆6层无菌纱布，喷洒无菌水保湿，25℃下培养48h。待高粱粒表面长出灰黑色分生孢子后，用无菌水冲洗，再用4层纱布过滤得孢子悬浮液，配制成浓度为1.0×10个/mL的分生孢子悬浮5液，添加3%蔗糖粉（增强孢子悬浮液的附着性）充分混匀，用于喷雾接种。5.4.2接种时期与方法在大豆花前期至花初期，选择阴天或无风天的傍晚，用配制好的孢子悬浮液喷洒叶面1～2次，时间间隔为7d～10d，喷雾量以在叶片上形成均匀分布雾滴为宜。5.5接种前后管理接种前6h对盆栽苗洒水浇透，冲去叶片表面灰尘，接种后立即遮阴48h～72h。6病情调查及记载6.1调查时间感病对照的叶片充分显症后（接种14d左右），调查并记载叶部发病情况。2

DB23/T3111—20226.2调查方法根据大豆灰斑病病情分级标准，调查每份大豆种质全部植株的全部叶片发病情况，记载病情级别，计算病情指数(DI)。病情指数(DI)=各级病株数相应的发病级别/调查总株数最大级别大豆灰斑病病情分级标准：0级：免疫，叶部无病斑；1级：病斑面积1%以下；3级：病斑面积1%～5%；5级：病斑面积6%～20%；7级：病斑面积21%～50%；9级：病斑面积51%以上。6.3发病率记载每一份大豆种质随机调查50片叶，计数发病叶片数，并计算发病率，公式如下：发病率（）（发病叶片数调查总叶片数）7抗性评价7.1鉴定有效性判别当鉴定圃中的感病/高感对照品种发病率达到60%以上，该批次抗灰斑病鉴定视为有效。7.27.3重复鉴定初次鉴定中表现为高抗、中抗的大豆种质，应用相同的病原菌进行重复鉴定。抗性评价标准根据调查结果，计算病情指数，并根据病情指数进行大豆种质的抗病性评价（表1）。表1大豆对灰斑病抗性评价标准病情指数(DI)－抗性评价免疫Immune（I）≤20%高抗HighlyResistant（HR）抗病Resistant（R）21%～40%41%～60%61%～80%＞80%中抗Moderatelyresistant（MR）感病Su