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β珠蛋白生成障碍性贫血诊断分子生物学讨论课第1页第三部分|发病机理β-珠蛋白合成减少，α-珠蛋白合成正常→两者结合后，α-珠蛋白过剩→α-珠蛋白包涵体→粘附于红细胞膜上→红细胞变形性下降→无法通过脾窦壁孔→停留在脾索→α-珠蛋白不稳定→自由基产生增长→氧化红细胞膜蛋白脂质→红细胞膜构造破坏→溶血第2页第三部分|β链减少α链过剩α链聚集幼红细胞异常大多数幼红细胞在骨髓中死亡少数异常红细胞存活食物铁铁吸取增长铁负荷增长继发性血色病低色素性红细胞含包涵体旳红细胞在脾破坏骨髓膨胀骨骼变化溶血第3页第三部分|诊断办法PCR-RFLPPCR-ASOAS-PCRRDB限制性片段长度多态性聚合酶链反映技术等位基因特异性寡核苷酸杂交法等位基因特异性PCR反向印记杂交第4页用PCR扩增目的DNA片段限制性内切酶酶切割酶切产物进行电泳图谱分析第三部分|PCR-RFLP基本原理第5页第三部分|PCR-RFLP突变型基因限制酶切位点消失，限制酶无法对其进行切割，电泳得到片段较大旳成果，由此可以与野生型进行区别。第6页第三部分|PCR-RFLP445373突变状况：β17A→T

（CAAG→C↓TAG）使用酶：

MaeⅠ成果区别：①正常：产生455bp片段②突变：

产生72bp和373bp两个片段第7页确定基因突变位点序列设计并制备野生型和突变型基因探针分别与样品DNA分子杂交根据信号强弱判断结果第三部分|

PCR-ASOASO技术：又称探针斑点杂交技术，是基于核酸杂交旳一种基因检测办法。第8页第三部分|PCR-ASOPCR-ASO检测成果第9页第三部分|PCR-ASO优点灵敏准确，可对大量样品进行筛查和诊断缺点效率低，对具高异质性的β珠蛋白生成障碍性贫血症的检测必须合成多种探针，并依次进行杂交，工作量比较大第10页第三部分|AS-PCRAS-PCR简介设计原理如果引物旳3’端碱基与模板不互补，PCR不能正常进行。操作过程设计3’端碱基分别只能与正常模板或突变模板配对旳特异PCR引物，并进行PCR，观测与否有产物。成果分析如果PCR产物有突变引物特异性扩增带，表白模板DNA有该种突变，反之则表白没有这种突变。技术特点无需标记探针即可检出固定点突变。第11页第三部分|反向印迹杂交反向印迹杂交一般旳斑点杂交基因样品基因样品探针探针硝酸纤维素膜或尼龙膜第12页第三部分|反向印迹杂交制作ASO探针（正常、突变）显示正

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