细胞培养前准备课件

实验总体安排一.细胞培养的基本技术实验前准备细胞传代细胞冻存与复苏细胞计数与接种孔板二.专题1.细胞生长曲线：MTT实验2.细胞凋亡：JC-1检测线粒体膜电位3.免疫荧光技术：核蛋白（PCNA)的免疫荧光4.流式细胞仪的应用：细胞周期的检测5.电镜细胞培养实验器材准备

玻璃器皿的处理玻璃器皿用于培养细胞、细胞冻存、培养用液的存放等。提供细胞生长的玻璃表面不但要清洁干净，而且要带适当电荷。苛性碱清洗剂会使玻璃表面带的电荷不适于细胞附着，需以HCL或H2SO4中和。清洗玻璃器皿不仅要求干净透明、无油迹，且不能残留任何毒性物质。为了保证清洗的质量，一般玻璃器皿的处理分为六个个步骤：浸泡，刷洗，浸酸，冲洗，包装，消毒灭菌。浸泡：新的玻璃器皿首先用清水浸泡及简单刷洗以便去除玻璃器皿表面的灰尘和软化溶解附着物，新购的玻璃器皿表面常呈碱性，并带有许多干涸的灰尘和一些对细胞有毒的物质（如铅，砷等）。然后用5％稀盐酸溶液中浸泡过夜，中和其中的碱性物质。使用过的玻璃器皿常常附有大量的蛋白质，干涸后难以刷洗掉，因此用后就要立即浸入清水中，浸泡时应将器皿完全浸入水中，使水进入器皿内而无气泡空隙遗留。对已用过且有污染的器皿必须先消毒。刷洗：一般多用软毛刷和洗涤剂或洗衣粉进行洗涤，以去除器皿内外表面的杂质。浸酸：酸就是清洁液，由浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水桉一定比例配制而成。具有很强的氧化作用，去污能力很强，对玻璃器皿无腐蚀作用。经清洁液浸泡后，玻璃器皿残留的未刷洗掉的微量杂质可被完全清除。刷洗后的玻璃器皿需干燥后才能浸入酸中，浸泡的时间不应少于6小时，一般浸泡过夜。表1清洁液配方配方成分常用方弱酸次强酸强酸重铬酸钾（g）1005010060清水(ml)80010001000200浓硫酸(ml)20090160800硫酸浓度(%)2081480冲洗：玻璃器皿经浸酸后，必须彻底冲洗，否则对细胞生长不利。使用流水彻底冲洗，吸管要用流水冲洗10min,器皿用流水灌满、倒掉，须重复10-20次以上，然后，再用蒸馏水漂洗3次，烤箱内烘干备用。消毒灭菌：包括干热消毒和湿热消毒。干热消毒一般在烤箱中进行，主要用于消毒玻璃器皿，需加温到160℃～170℃，保持90～120min方能杀死芽孢。湿热消毒是一种有效的消毒方法,一般使用高压蒸汽灭菌器进行消毒。一般物品（如布类、金属器械、玻璃器皿等）消毒的要求是121℃20min，某些培养用液、橡胶制品、塑料器皿等的消毒要求为115℃10min。如果要重复使用塑料器皿，可以按以下步骤处理:自来水充分浸泡→冲洗→2%Na0H浸泡过夜→自来水冲洗→2%~5%盐酸浸泡30min→自来水冲洗→蒸馏水漂洗3次→晾干→紫外线照射30min(或先用75%酒精浸泡、擦拭，再用紫外线照射30min)。凡能耐热的塑料器皿，最好经101.3kPa高压灭菌。（三）胶塞等橡胶类处理新购置者先经自来水冲洗→2%NaOH煮沸15min→自来水冲洗→2%~5%HCl煮沸15min→自来水冲洗5次以上→蒸馏水冲洗5次以上→蒸馏水煮沸10min，然后烘干

包装消毒。（四）金属器械的清洗新购进的金属器械常涂有防锈油，先