病毒感染的检查方法与防治原则课件

病毒感染的检查方法

与防治原则

1医学ppt病毒感染的检查方法

与防治原则

1医学ppt病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体病毒颗粒病毒抗原病毒核酸病毒酶类：如逆转录酶电镜直接观察光镜检查包含体分离培养2医学ppt病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体病毒颗粒电镜一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：

1.标本用“双抗”或两性霉素B处理

2.低温保存，尽快送检

3.血清学诊断采双份血清3医学ppt一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：3医学pp二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养

细胞培养（cell

culture）

鸡胚接种（egginoculation）

动物接种（animalinoculation）4医学ppt二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养4医学ppt二、病毒的分离与鉴定一般程序：标本无菌处理动物接种鸡胚培养细胞培养指标阳性指标阴性

病毒鉴定

盲传2-3代指标阴性病毒阴性5医学ppt二、病毒的分离与鉴定一般程序：标本无菌处理动物接种指标阳性（一）病毒的分离培养

1.细胞培养

单层细胞培养（monolayercellculture）

分类悬浮细胞培养（suspendedcellculture）原代细胞（primarycell）细胞种类二倍体细胞（diploidcell）传代细胞系（continuouscellline）6医学ppt（一）病毒的分离培养6医学ppt病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞7医学ppt病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞7医学ppt1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养组织组织块分散的单个细胞单层细胞

剪碎

培养基(原代细胞)单层细胞(次代细胞)传代培养蛋白酶8医学ppt1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养组织组织特点：①对多种病毒敏感②生长能力有限,获取成本高③可携带潜伏病毒1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养9医学ppt特点：①对多种病毒敏感1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养9(2)二倍体细胞培养

体外分裂50～100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。特点：①对多种病毒敏感②不带异种蛋白(人源性)③不带病毒，无致瘤潜能④可传50代左右1.细胞培养10医学ppt(2)二倍体细胞培养特点：①对多种病毒敏感1.细胞培养10医(3)传代细胞培养特点：①对多种病毒敏感性高②繁殖能力高，传代时间长③有致癌危险，不能用于疫苗生产1.细胞培养11医学ppt(3)传代细胞培养特点：①对多种病毒敏感性高1.细胞培养12.鸡胚培养

采用孵化9～14天的鸡胚

绒毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人类疱疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接种部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分离卵黄囊（yolksac）

嗜神经病毒

12医学ppt2.鸡胚培养12医学ppt13医学ppt13医学ppt2、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂14医学ppt2、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低14医学ppt15医学ppt15医学ppt3.动物接种

应用：尚无敏感细胞的病毒培养

动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒16医学ppt3.动物接种16医学ppt1．病毒增殖鉴定

(1)细胞病变效应（cytopathiceffect,

CPE）

①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；

②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鉴定

17医学ppt1．病毒增殖鉴定（二）病毒的鉴定17医学ppt18医学ppt18医学ppt①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)19医学ppt①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1)细胞病变效应(cyt麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞②形成多核巨细胞或称融合细胞(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)20医学ppt麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞②形成多核巨细胞或称融③形成包涵体(inclusionbody)(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)21医学ppt③形成包涵体(inclusionbody)(1)细胞病变效腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋红细胞表面HA受体22医学ppt腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorptio(3)干扰现象（interference）风疹病毒＋胚肾细胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)—风疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—风疹病毒(-)埃可病毒(+)23医学ppt(3)干扰现象（interference）风疹病毒＋胚肾细胞(4)细胞代谢改变

细胞代谢变慢

pH变化减慢24医学ppt(4)细胞代谢改变24医学ppt2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大25医学ppt2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限25医3.病毒血清学鉴定

鉴定病毒种、型、亚型

(1)血凝抑制试验（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型与亚型鉴定

病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）

病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集

（血凝抑制试验）

26医学ppt3.病毒血清学鉴定鉴定病毒种、型、亚型26医学ppt(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）——多种病毒鉴定(3)凝胶免疫扩散试验(gelimmuno-

diffusion

test)

——多种病毒鉴定3.病毒血清学鉴定27医学ppt(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）3.病毒血清学鉴定4.病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定核酸扩增核酸杂交基因芯片基因测序28医学ppt4.病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定28医学ppt（三）病毒数量与感染性测定1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死病毒）2.蚀斑形成试验（plaqueformationtest）

3.50％组织细胞感染量（50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50）感染性病毒量29医学ppt（三）病毒数量与感染性测定1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死(四)新病毒的鉴定核酸类型的测定理化性状的检测形态学鉴定血清学鉴定基因测序和生物对比30医学ppt(四)新病毒的鉴定核酸类型的测定30医学ppt三、病毒感染的血清学诊断应用：①采取标本分离病毒为时已晚②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒③为证实所分离的病毒的临床意义④进行血清流行病学调查等31医学ppt三、病毒感染的血清学诊断应用：31医学ppt1.中和试验（neutralizingtest）病毒＋中和抗体

病毒失去感染性

特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查临床诊断少用32医学ppt1.中和试验（neutralizingtest）病毒＋中和2.补体结合试验

（complementfixationtest）

用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体

特点：特异性低，抗体出现早，消失快

应用：近期感染指标。33医学ppt2.补体结合试验

（complementfixatio四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测（IgM）34医学ppt四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果34医学ppt（一）形态学检查电镜和免疫电镜检查普通光学显微镜检查

包涵体35医学ppt（一）形态学检查电镜和免疫电镜检查35医学ppt（二）病毒成分检测1.病毒蛋白抗原检测免疫标记技术2.病毒核酸检测核酸扩增技术核酸杂交技术基因芯片技术

基因测序36医学ppt（二）病毒成分检测1.病毒蛋白抗原检测36医学ppt（三）早期抗体检测可诊断急性感染

特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒

EBV早期抗原抗体

EAV核心抗原抗体

早期抗原的抗体

EAV衣壳抗原抗体37医学ppt（三）早期抗体检测可诊断急性感染37医学ppt病毒感染的特异性预防微生物及其代谢产物生物制品动物免疫血清（biologicalproducts）

免疫细胞细胞因子

防治和诊断感染性疾病38医学ppt病毒感染的特异性预防灭活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重组载体疫苗（recombinantcarriervaccine）亚单位疫苗（subunitvaccine）化学提取或人工合成疫苗重组疫苗（recombinantvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）一、人工主动免疫常用生物制品39医学ppt灭活疫苗（inactivatedvaccine）一、人工主二、人工被动免疫常用生物制品

免疫球蛋白血清丙种球蛋白

细胞免疫制剂

IFN-α、β、γ细胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的杀伤细胞——LAK细胞

40医学ppt二、人工被动免疫常用生物制品免疫球蛋白40医学ppt病毒感染的治疗

核苷类药物

非核苷类反转录酶抑制剂蛋白酶抑制剂其他抗病毒药物

干扰素和干扰素诱生剂

中草药

基因治疗剂

治疗性疫苗

抗病化学制剂反义寡核苷酸干扰RNA核酶（ribozyme）

41医学ppt病毒感染的治疗核苷类药物作用机制

HSV/VZV

无环鸟苷（NA）病毒胸苷激酶NA一磷酸宿主细胞激酶

NA三磷酸

（缺乏糖环3’-OH基）病毒DNA聚合酶核酸链延伸被迫终止42医学ppt核苷类药物作用机制HSV/VZV无环此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！此课件下载可自行编辑修改，供参考！病毒感染的检查方法

与防治原则

44医学ppt病毒感染的检查方法

与防治原则

1医学ppt病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体病毒颗粒病毒抗原病毒核酸病毒酶类：如逆转录酶电镜直接观察光镜检查包含体分离培养45医学ppt病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体病毒颗粒电镜一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：

1.标本用“双抗”或两性霉素B处理

2.低温保存，尽快送检

3.血清学诊断采双份血清46医学ppt一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：3医学pp二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养

细胞培养（cell

culture）

鸡胚接种（egginoculation）

动物接种（animalinoculation）47医学ppt二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养4医学ppt二、病毒的分离与鉴定一般程序：标本无菌处理动物接种鸡胚培养细胞培养指标阳性指标阴性

病毒鉴定

盲传2-3代指标阴性病毒阴性48医学ppt二、病毒的分离与鉴定一般程序：标本无菌处理动物接种指标阳性（一）病毒的分离培养

1.细胞培养

单层细胞培养（monolayercellculture）

分类悬浮细胞培养（suspendedcellculture）原代细胞（primarycell）细胞种类二倍体细胞（diploidcell）传代细胞系（continuouscellline）49医学ppt（一）病毒的分离培养6医学ppt病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞50医学ppt病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞7医学ppt1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养组织组织块分散的单个细胞单层细胞

剪碎

培养基(原代细胞)单层细胞(次代细胞)传代培养蛋白酶51医学ppt1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养组织组织特点：①对多种病毒敏感②生长能力有限,获取成本高③可携带潜伏病毒1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养52医学ppt特点：①对多种病毒敏感1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养9(2)二倍体细胞培养

体外分裂50～100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。特点：①对多种病毒敏感②不带异种蛋白(人源性)③不带病毒，无致瘤潜能④可传50代左右1.细胞培养53医学ppt(2)二倍体细胞培养特点：①对多种病毒敏感1.细胞培养10医(3)传代细胞培养特点：①对多种病毒敏感性高②繁殖能力高，传代时间长③有致癌危险，不能用于疫苗生产1.细胞培养54医学ppt(3)传代细胞培养特点：①对多种病毒敏感性高1.细胞培养12.鸡胚培养

采用孵化9～14天的鸡胚

绒毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人类疱疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接种部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分离卵黄囊（yolksac）

嗜神经病毒

55医学ppt2.鸡胚培养12医学ppt56医学ppt13医学ppt2、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂57医学ppt2、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低14医学ppt58医学ppt15医学ppt3.动物接种

应用：尚无敏感细胞的病毒培养

动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒59医学ppt3.动物接种16医学ppt1．病毒增殖鉴定

(1)细胞病变效应（cytopathiceffect,

CPE）

①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；

②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鉴定

60医学ppt1．病毒增殖鉴定（二）病毒的鉴定17医学ppt61医学ppt18医学ppt①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)62医学ppt①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1)细胞病变效应(cyt麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞②形成多核巨细胞或称融合细胞(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)63医学ppt麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞②形成多核巨细胞或称融③形成包涵体(inclusionbody)(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)64医学ppt③形成包涵体(inclusionbody)(1)细胞病变效腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋红细胞表面HA受体65医学ppt腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorptio(3)干扰现象（interference）风疹病毒＋胚肾细胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)—风疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—风疹病毒(-)埃可病毒(+)66医学ppt(3)干扰现象（interference）风疹病毒＋胚肾细胞(4)细胞代谢改变

细胞代谢变慢

pH变化减慢67医学ppt(4)细胞代谢改变24医学ppt2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大68医学ppt2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限25医3.病毒血清学鉴定

鉴定病毒种、型、亚型

(1)血凝抑制试验（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型与亚型鉴定

病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）

病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集

（血凝抑制试验）

69医学ppt3.病毒血清学鉴定鉴定病毒种、型、亚型26医学ppt(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）——多种病毒鉴定(3)凝胶免疫扩散试验(gelimmuno-

diffusion

test)

——多种病毒鉴定3.病毒血清学鉴定70医学ppt(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）3.病毒血清学鉴定4.病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定核酸扩增核酸杂交基因芯片基因测序71医学ppt4.病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定28医学ppt（三）病毒数量与感染性测定1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死病毒）2.蚀斑形成试验（plaqueformationtest）

3.50％组织细胞感染量（50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50）感染性病毒量72医学ppt（三）病毒数量与感染性测定1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死(四)新病毒的鉴定核酸类型的测定理化性状的检测形态学鉴定血清学鉴定基因测序和生物对比73医学ppt(四)新病毒的鉴定核酸类型的测定30医学ppt三、病毒感染的血清学诊断应用：①采取标本分离病毒为时已晚②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒③为证实所分离的病毒的临床意义④进行血清流行病学调查等74医学ppt三、病毒感染的血清学诊断应用：31医学ppt1.中和试验（neutralizingtest）病毒＋中和抗体

病毒失去感染性

特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查临床诊断少用75医学ppt1.中和试验（neutralizingtest）病毒＋中和2.补体结合试验

（complementfixationtest）

用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体

特点：特异性低，抗体出现早，消失快

应用：近期感染指标。76医学ppt2.补体结合试验

（complementfixatio四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测（IgM）77医学ppt四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果34医学ppt（一）形态学检查电镜和免疫电镜检查普通光学显微镜检查

包涵体78医学ppt（一）形态学检查电镜和免疫电镜检查35医学ppt（二）病毒成分检测1.病毒蛋白抗原检测免疫标记技术2.病毒核酸检测核酸扩增技术核酸杂交技术基因芯片技术

基因测序79医学ppt（二）病毒成分检测1.病毒蛋白抗原检测36医学ppt（三）早期抗体检测可诊断急性感染

特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒

EBV早期抗原抗体

EAV核心抗原抗体

早期抗原的抗体

EAV衣壳抗原抗体80医学ppt（三）早期抗体检测可诊断急性感染37医学ppt病毒感染的特异性预防