抗肿瘤药效评价课件

抗肿瘤药的药效学研究抗肿瘤药的药效学研究1抗肿瘤药的药效学研究抗肿瘤药根据其作用原理大致可以分为以下几类:细胞毒性药生物反应调节剂分化诱导剂化学预防药逆转肿痛耐药性药物抗肿瘤侵袭、转移药物的实验方法放疗及化疗增效剂抗肿瘤药的药效学研究21.细胞毒性药的药效学研究这类药可以通过体外和体内两种方法来评价其疗效:体外常用的方法:、噻唑蓝实验法MTT法)、染料排斥试验、生长曲线法、集落形成法、SRB法体内常用的方法:动物移植性肿瘤实验法1.细胞毒性药的药效学研究3MTT法的基本原理:四氮唑[MTT,3-(4,5dimethylibiazol-2-y1)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲[月替formazan),而死的细胞则无此功能。用二甲基亚讽(DMSO)溶解甲月替]后,在一定波长下用酶标仪测定光密度值,即可定量测出细胞的存活率。MTT法的基本原理:四氮唑[MTT,3-(4,54操作步骤:选用对数生长期的贴壁肿瘤细胞,用胰酶消化后,用含10%小牛血清的RPMI640培养基配成5000个/ml的细胞悬液,接种在96孔培养板中,每孔接种200μl,37℃,5%CO2培养24h2.实验组换新的含不同浓度被测样品的培养基,对照组则换含等体积溶剂的培养基每组设3-5平行孔,37℃,5%CO2培养45d操作步骤:53.弃去上清液,每孔加入200μl新鲜配制的含02mg/mMTT的无血清培养基.37℃继续培养4h。小心弃上清,并加入200μDMSO,用微型超声振荡器混匀后,在酶标仪上以试验波长为570nm,参比波长为450mm测定光密度值3.弃去上清液,每孔加入200μl新鲜配制6结果评定:按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率肿瘤细胞生长抑制率%=(1OD实验OD对照×100%以同一样品的不同浓度对肿瘤细胞生长抑制率作图可得到剂量反应曲线,从中求出样品的半数杀伤浓度IC50合成化合物或植物提取纯品的IC5<10g/m1或植物粗提物的IC50<20g/m1时,则判断样品在体外对肿瘤细胞有杀伤作用结果评定:7染料排斥试验的基本原理活细胞有排斥某些染料如伊红、台盼蓝、苯胺黑等的能力,而死细胞由于膜完整性的破坏,可被着色。因此培养的肿瘤细胞中加入这些染料,一定时间后,对着色和未着色的细胞进行计数,即可算出被杀死的细胞比例。染料排斥试验的基本原理8生长曲线法的基本原理:在最适条件下,肿瘤细胞在培养液中呈指数生长,如取细胞数的对数与培养时间作图可得一条直线,故称此时为对数生长期。随着细胞密度不断增高,由于代谢产物的积聚及营养物的消耗,细胞生长逐渐减慢以致停止,此时称高坪期或稳定期。因此药物对细胞生长的影响可通过生长曲线反映出来。生长曲线法的基本原理:9集落形成法的基本原理:克隆原细胞具有持续增殖能力,当单个细胞分裂6代或6代以上时,其后代所组成的群体(集落)便含50个以上细胞。通过集落计数可对克隆原细胞作定量分析。它反映了单个细胞的增殖潜力,故能较灵敏地测定抗癌药的活性,日前被认为是一种较理想的检测方法。常用的集落形成法可分为贴壁法及半固体培养法两种。集落形成法的基本原理:10抗肿瘤药效评价课件11抗肿瘤药效评价课件12抗肿瘤药效评价课件13抗肿瘤药效评价课件14抗肿瘤药效评价课件15抗肿瘤药效评价课件16抗肿瘤药效评价课件17抗肿瘤药效评价课件18抗肿瘤药效评价课件19抗肿瘤药效评价课件20抗肿瘤药效评价课件21抗肿瘤药效评价课件22抗肿瘤药效评价课件23抗肿瘤药效评价课件24抗肿瘤药效评价课件25抗肿瘤药效评价课件26抗肿瘤药效评价课件27抗肿瘤药效评价课件28抗肿瘤药效评价课件29抗肿瘤药效评价课件30抗肿瘤药效评价课件31抗肿瘤药效评价课件32抗肿瘤药效评价课件33抗肿瘤药效评价课件34抗肿瘤药效评价课件35抗肿瘤药效评价课件36抗肿瘤药效评价课件37抗肿瘤药效评价课件38抗肿瘤药效评价课件39抗肿瘤药效评价课件40抗肿瘤药效评价课件41抗肿瘤药效评价课件42抗肿瘤药效评价课件43抗肿瘤药效评价课件44抗肿瘤药效评价课件45抗肿瘤药效评价课件46抗肿瘤药的药效学研究抗肿瘤药的药效学研究47抗肿瘤药的药效学研究抗肿瘤药根据其作用原理大致可以分为以下几类:细胞毒性药生物反应调节剂分化诱导剂化学预防药逆转肿痛耐药性药物抗肿瘤侵袭、转移药物的实验方法放疗及化疗增效剂抗肿瘤药的药效学研究481.细胞毒性药的药效学研究这类药可以通过体外和体内两种方法来评价其疗效:体外常用的方法:、噻唑蓝实验法MTT法)、染料排斥试验、生长曲线法、集落形成法、SRB法体内常用的方法:动物移植性肿瘤实验法1.细胞毒性药的药效学研究49MTT法的基本原理:四氮唑[MTT,3-(4,5dimethylibiazol-2-y1)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲[月替formazan),而死的细胞则无此功能。用二甲基亚讽(DMSO)溶解甲月替]后,在一定波长下用酶标仪测定光密度值,即可定量测出细胞的存活率。MTT法的基本原理:四氮唑[MTT,3-(4,550操作步骤:选用对数生长期的贴壁肿瘤细胞,用胰酶消化后,用含10%小牛血清的RPMI640培养基配成5000个/ml的细胞悬液,接种在96孔培养板中,每孔接种200μl,37℃,5%CO2培养24h2.实验组换新的含不同浓度被测样品的培养基,对照组则换含等体积溶剂的培养基每组设3-5平行孔,37℃,5%CO2培养45d操作步骤:513.弃去上清液,每孔加入200μl新鲜配制的含02mg/mMTT的无血清培养基.37℃继续培养4h。小心弃上清,并加入200μDMSO,用微型超声振荡器混匀后,在酶标仪上以试验波长为570nm,参比波长为450mm测定光密度值3.弃去上清液,每孔加入200μl新鲜配制52结果评定:按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率肿瘤细胞生长抑制率%=(1OD实验OD对照×100%以同一样品的不同浓度对肿瘤细胞生长抑制率作图可得到剂量反应曲线,从中求出样品的半数杀伤浓度IC50合成化合物或植物提取纯品的IC5<10g/m1或植物粗提物的IC50<20g/m1时,则判断样品在体外对肿瘤细胞有杀伤作用结果评定:53染料排斥试验的基本原理活细胞有排斥某些染料如伊红、台盼蓝、苯胺黑等的能力,而死细胞由于膜完整性的破坏,可被着色。因此培养的肿瘤细胞中加入这些染料,一定时间后,对着色和未着色的细胞进行计数,即可算出被杀死的细胞比例。染料排斥试验的基本原理54生长曲线法的基本原理:在最适条件下,肿瘤细胞在培养液中呈指数生长,如取细胞数的对数与培养时间作图可得一条直线,故称此时为对数生长期。随着细胞密度不断增高,由于代谢产物的积聚及营养物的消耗,细胞生长逐渐减慢以致停止,此时称高坪期或稳定期。因此药物对细胞生长的影响可通过生长曲线反映出来。生长曲线法的基本原理:55集落形成法的基本原理:克隆原细胞具有持续增殖能力,当单个细胞分裂6代或6代以上时,其后代所组成的群体(集落)便含50个以上细胞。通过集落计数可对克隆原细胞作定量分析。它反映了单个细胞的增殖潜力,故能较灵敏地测定抗癌药的活性,日前被认为是一种较理想的检测方法。常用的集落形成法可分为贴壁法及半固体培养法两种。集落形成法的基本原理:56抗肿瘤药效评价课件57抗肿瘤药效评价课件58抗肿瘤药效评价课件59抗肿瘤药效评价课件60抗肿瘤药效评价课件61抗肿瘤药效评价课件62抗肿瘤药效评价课件63抗肿瘤药效评价课件64抗肿瘤药效评价课件65抗肿瘤药效评价课件66抗肿瘤药效评价课件67抗肿瘤药效评价课件68抗肿瘤药效评价课件69抗肿瘤药效评价课件70抗肿瘤药效评价课件71抗肿瘤药效评价课件72抗肿瘤药效评价课件73抗肿瘤药效评价课件74抗肿瘤药效评价课件75抗肿瘤药效评价课件76抗肿瘤药效评价课件77抗肿