全自动血液分析仪课件

第三章血细胞分析仪检验

简介手工计数法的局限性仪器优势：精度高、速度快、易操作、功能强血液分析仪发展血液分析仪功能：细胞计数、白细胞分类、扩展功能★20世纪50年代，美国库尔特（W.H.Coulter）发明电子血细胞计数仪并申请专利。血液分析仪优势检测项目多速度快精度高易操作

一.血细胞计数原理电阻抗法经典的库尔特原理测量细胞数量和体积三分群血液分析仪主要原理电阻抗法血小板与红细胞同一检测通道特殊装置辅助:扫流技术、鞘流技术、浮动界标。射频电导法电磁波通过细胞发生衰减，与细胞内部化学成分、核质比、颗粒等有关。特别有助于鉴别体积相同，内部结构不同的细胞。143激光散射法示意图1样本流2鞘流液3激光源4透镜5低角度散射光6高角度散射光65212633nm650nm以上

核酸量（DNA和RNA)侧向荧光半导体激光染色后的白细胞FCM原理核和颗粒侧向散射光细胞体积

前向散射光网织红细胞检测原理对网织红细胞内RNA成分染色。染色剂有：非荧光染料（新亚甲蓝）和荧光染料(噁嗪、聚次甲基）非荧光染料染色法：VCS技术RNA越多光散射越强，可检测网织红细胞成熟度得到参数：Ret%、Ret#、IRF\HLR\MCVr\RDWr网织红细胞参数检测原理荧光染料染色法

聚次甲基染RNA、噁嗪染DNARBCLFRPLTMFRHFR得到参数：Ret%、Ret#HFR\MFR\LFRIRF\Ret-He荧光强度前向散射光有核红细胞参数检测原理VCS法

非白细胞区域：有核红、血小板聚集、大血小板、疟原虫等。流式细胞激光散射法

聚次甲基荧光染色：NRBC裸核化，荧光强度比白细胞低。NRBCWBC前向散射光侧向荧光

二.白细胞分类原理白细胞三分群原理★白细胞直方图仪器将体积为35～450fL的血细胞，分为256个通道（channel）。每个通道：1.64fl。根据细胞大小，分别置于不同的通道中，显示血细胞体积分布直方图(Histogram)。

体积电导光散射白细胞五分类检测原理VCS原理VCS旋转光散射体积★流式细胞光散射、电阻抗、射频、特殊细胞染色1.4DIFF通道

阻抗+射频：分粒细胞、淋巴、单核三群

流式光散射：溶解红细胞、血小板，白细胞荧光染色，荧光强度与细胞所含核酸有关。先分四群：中性粒细胞和嗜碱细胞，淋巴，单核，嗜酸和未成熟粒细胞。2.嗜酸细胞通道3.WBC/BASO通道

碱性溶血剂破坏其他白细胞。4.IMI通道

加入硫化氨基酸，与幼稚细胞结合，且不被溶血剂溶解。幼稚粒细胞异常淋巴嗜酸中性单核淋巴嗜碱嗜碱其他白细胞WBC/BASO通道完成五分类MAPSS双流体（双鞘流）动力连续系统双鞘流：有2个鞘流装置，经第一束鞘流后用阻抗法测细胞体积，经第二束鞘流后测定光吸收测细胞内部结构。1.白细胞计数通道：电阻抗2.白细胞分类通道：双鞘流+细胞化学染色

染液中含溶血素及氯唑黑E，对单核细胞初级颗粒、嗜酸颗粒、中性颗粒及细胞膜（细胞膜、核膜、颗粒膜）染色。3.嗜碱性粒细胞通道分光光度法测定血红蛋白:溶血剂使红细胞溶血，释放出血红蛋白，血红蛋白与溶血剂中某些成分结合，形成稳定化合物，在特定的光波（530-550nm）下比色，吸光度变化与血红蛋白浓度成正比(Lambert-Beer比色定律)。溶血剂

1.含氰化物：形成氰化血红蛋白，540nm(改良HiCN法）。氰化物有毒。2.不含氰化物:如SLS（月桂酰硫酸钠）法，需用HiCN校准。

第二节临床应用红细胞参数红细胞体积分布宽度（RDW）反映红细胞大小不一致的程度，与MCV结合，用于贫血的分类。RDW-SD和RDW-CV。1.鉴别均为小细胞低色素的贫血2.早期诊断缺铁性贫血2.MCV和RDW均增高：巨幼细胞性贫血3.MCV和RDW均正常：再障、慢性失血性贫血红细胞参数血红蛋白分布宽度（HDW）反映红细胞内HB含量异质性。HDW和RDW明显增高，见于遗传性球形红细胞增多症（小细胞不均一性高色素）。HDW增高，RDW正常见于轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血。球形细胞平均体积（MSCV)遗传性球形红细胞增多症MSCV<MCV血小板系列参数血小板平均体积（MPV)、未成熟血小板比率（IPF)、血小板分布宽度（PDW)MPV正常人MPV与PLT呈非线性负相关。1.鉴别血小板减低的原因：MPV增高，骨髓增生功能良好，血小板减低是由于血小板破坏过多；MPV减低，再障或急性白血病。2.评估骨髓造血功能恢复情况：造血功能恢复时，MPV增高早于PLT增高。3.原发性血小板减少性紫癜（ITP）PLT、MPV、PDW？★IPF网织血小板是胞质中残留RNA的血小板。鉴别血小板减低的原因：骨髓造血功能良好时，IPF增高。网织红细胞参数未成熟网织红细胞比率（IRF）、网织红细胞成熟指数（RMI)、Ret-He用于评估骨髓造血功能，贫血的鉴别诊断。1.IRF、RMI：肿瘤化疗、干细胞移植骨髓造血功能受抑和恢复最早的指标（早于WBC、PLT、Ret）IRF=(MFR+HFR）/(LFR+MFR+HFR)*100RMI=(MFR+HFR）/LFR*1002.Ret-He网织红细胞血红蛋白含量：反映网织红细胞质量，对缺铁贫的治疗有意义。白细胞系列参数中间细胞群MID、未成熟粒细胞IG、造血祖细胞HPCMID：单核细胞、嗜酸、嗜碱、幼稚细胞、异淋、浆细胞IG：早幼粒细胞至杆状核粒细胞各阶段，不包括原始粒细胞。HPC：干细胞移植时，检测供体HPC变化，便于选择采集时机。

第三节血细胞分析仪检验图形与临床应用第二节检测参数和结果显示仪器应满足的两个要求：1.筛检和直接报告正常结果2.报警提示异常结果：结果超出范围、细胞异常、标本干扰等结果显示：数据、图形（直方图、散点图）、报警（图形、符号、文字）

直方图：曲线图形，XY轴？

散点图：点组成的图形，XY轴？数据参考值符号直方图★白细胞直方图仪器将体积为35～450fL的血细胞，分为256个通道（channel）。每个通道：1.64fl。根据细胞大小，分别置于不同的通道中，显示血细胞体积分布直方图(Histogram)。

★白细胞直方图1.35-95fl小细胞群：淋巴2.95-160fl中间细胞群：单核、嗜酸、嗜碱、幼稚3.160-450fl大细胞群：中性粒细胞直方图出现异常，不同部位有不同含义正常白细胞直方图异常白细胞直方图分析白细胞直方图应注意：溶血剂处理后白细胞直方图变化必须使用配套试剂不同仪器的直方图不同★红细胞直方图1.近似正态分布，单峰，36-360fl监测，主要分布于50-200fl2.横坐标：细胞体积；纵坐标：细胞的出现频率3.异常图形：左移右移、峰高低、峰宽窄、双峰等红细胞异常直方图★血小板直方图1.左偏态分布，单峰，主要在2-15fl，2-30fl检测2.异常图形：大血小板、血小板聚集、小RBC、RBC碎片散点图-白细胞每一条轴分别表示一种检测原理或检测角度的细胞信息，任何一个点反映的是综合信息。散点上下、左右、前后的变化与细胞大小、内部结构、颗粒、胞核胞质等有关。散点图-红细胞红细胞体积/红细胞血红蛋白浓度（V/HC）散点图：分九个区，有助于贫血的分类和诊断。

第四节血细胞分析仪性能评价与全面质量控制性能评价安装新机或大维修后需进行仪器性能评价，包括：精密度批内精密度：同一批样本重复测定结果的评价。批间精密度：对两批或以上样本重复测定结果的评价。总精密度：同一标本多次测量的结果接近程度，包含随机误差和携带污染率双重变异因素。准确性：测定结果与真值一致性的程度（表3-14）准确度和精密度★性能评价线性范围（稀释效应）：指测定值与稀释倍数是否呈比例关系。线性关系范围越宽越理想。P＜0.01,非线性相关；P＞0.05，未偏离线性。MCHMCHCMCVRBC★性能评价携带污染率连续测定1份高值样本3次（i1、i2、i3）再测定1份低值样本3次（j1、j2、j3）携带污染率（%）＝（j1-j3）/（i3-J3）

可比性（仪器与常规检测程序）：

指血液分析仪测定结果，与常规方法所测结果相比较。显微镜法是血细胞检验基础。对异常标本和干扰物的灵敏度标本老化：观察标本随时间变化对结果的影响白细胞分类计数评价（表3-15）全面质量控制质量保证、仪器校准和性能评价均有国际公认的一系列标准文件。质量保证

分析前：环境、仪器、试剂、校准品、质控品、参考区间的设置、合格的检测人员及标本

分析中：室内质控、操作规范、报警处理、干扰因素分析、复检规则

分析后：样本保存、结果分析、征求临床意见、室间质评室内质量控制质控品要求：稳定血制品或新鲜全血1至少两个水平，频率依工作量和仪器性能而定2更换新批号应新旧批号同时检测3结果解释：±2S（95%可信限）4报警报警来源：标本异常，超出项目参考范围，符合复检标准报警形式：图形、符号、文字报警信息：（表3-18---3-21)报警处理干扰因素分析RBC:WBC增加、RBC凝集、大PLT、PLT聚集HB：脂血、高胆红素、WBC高、PLT高WBC：有核红、未溶解RBC、WBC聚集PLT：小RBC、RBC碎片、PLT聚集、大PLT、WBC碎片复检规则国际血液分析仪显微镜复检规则41条

镜检三方面内容：1.取细胞分布良好的区域，估算WBC、PLT(正常可见8-15个血小板/油镜视野)2.白细胞分类3.血细胞形态观察（WBC、RBC、PLT）福建省立医院检验科复检规则

镜检规则的验证1.检测方法：每份标本仪器测定后由2名有工作经验的检验人员按照标准操作程序进行镜检。内容包括：①WBC分类计数②WBC和PLT数量评估；③RBC和PLT的形态，有无PLT聚集；④其他异常：NRBC，RBC冷凝集及寄生虫等。2.涂片镜检阳性判断标准：①红系：发现疟原虫；NRBC≥1个；或其他形态异常>2+②血小板聚集;血小板形态异常>2+③Dohle小体的粒细胞>2+，中毒颗粒中性粒细胞>2+，空泡变性粒细胞>2+④原始和幼稚细胞≥1个，早幼粒细胞和中幼粒细胞≥1个，晚