分子生物学复习重点

名词解释RNAiRNARNA干扰信号转导：细胞通讯启动细胞内一系列化学反应，导致一组成分的活性、水平或亚细胞裂、分化、衰老、死亡速度改变，这一过程称为信号转导。基因组：细胞或生物体中，一套完整单体的遗传物质的总和即为基因组启动子：是指基因序列中能被RNA动转录的DNA序列，大多数位于基因（或操纵子）转录区的上游，具有方向性，属于调控元件。7. cDNAmRNACDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。RNAdNTP为原料，在逆转录酶的催化下DNARNA7. cDNAmRNACDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。RNARNA（DNA）密码。分布、相互作用和条件变异等，建立和应用蛋白信息数据库。预、自杀基因治疗、免疫基因治疗等。简答题基因治疗方法和步骤基因治疗是指在基因水平上治疗疾病，包括基因添加、基因置换、基因修饰、基因干预、自杀基因治疗、免疫基因治疗等。基因治疗的方法主要包括(1)(2)核酸导入病变细胞，抑制致病基因的过度表达。(3)将特定基因导入非病变细胞，表达特定产物，发挥治疗作用。(1)(2)(3)(4）转染细胞筛选和正常基因鉴定如何分别从DNA，mRNA和蛋白质水平上Knockdown基因的表达。提示：DNA水平是采用RNA也就是过表达某结构正常但没有活性蛋白，从而竞争性抑制内源正常蛋白）DNA水平上：甲基化；基因重排，例如置于一个沉默子之中因子与启动子结合或抑制其活性。真核生物上，阻断转录因子的活性，使RNA因表达受到抑制等等。RNA:聚合酶抑制剂。RNARNA水平上：改变mRNA的稳定性，从而影响翻译效率；使5’非翻译区长度小于12nt，；翻译起始因子磷酸化利用RNA干扰技术，介导基因沉默：miRNAmRNA结合，阻遏其翻译或促进其降解，产生基因沉默效应。②小干扰RNA能与目的基因mRNA结合，促进其降解，产生基因沉默效应。蛋白质水平上：阻断或抑制蛋白质加工后的修饰；促进翻译阻遏蛋白蛋白质生物合成抑制剂：直接抑制蛋白质合成的抗生素。促进蛋白质泛素化，加快降解。简述PCR引物设计原则。DNA引物序列应定位于保守序列区域，且在其它区域没有同源序列（70%）；cDNAcDNA上游引物和下游引物应尽量定位于不同外显子内。10~40nt20~30nt。引物的末端3（即G或,但不能有连续的3个S。对大引物而言，5’端序列不必严格互补，甚至可以修饰。G和C40%~75%。引物序列引物之间不能存在互补序列，特别是3导致形成发夹结构的反向重复序列。引物所含单核苷酸重复序列长度不能超过5nt。引物熔点引物熔点。引物熔点应该一致（相差不超过5℃）。根据被测定的对象，简述分子杂交印迹的种类及其特点、应用上优缺点。分为DNA印迹法和RNA印迹法。DNA印迹法还包括斑点印迹法、夹缝印迹法、菌落杂交法和噬菌斑杂交法。由此衍生的有蛋白质印迹法。1）DNARNA印迹法为先变性后电泳、转移。2）、RNase（核糖核酸酶）无处不在，可以将RNA降解为核苷酸，因而从制备RNA到分析都要绝对消除外源RNaseRNasDNA印迹法则无此要求。3RNARNA（RNA印迹法可以用于定性或定量分析组织细胞内的总RNA或RNAmRNA的长度和含量。）4）、斑点杂交法和夹缝杂交法5）.简答题克隆（筛选、测序、扩增、验证）疾病相关基因的方法。定位克隆的策略消减杂交的策略隆（筛选测序扩增验证）疾病相关基因的方法。筛选疾病相关基因（基因芯片，扣减杂交，蛋白质组学）①利用基因芯片筛选相关基因。基因芯片也称DNA芯片，基于核酸分子杂交，专以检DNA将大量已知序列的DNA片段作为探针按照一定的阵列高密度固定于基片表面，阵列的每一或是非诱发产生的cDNAmRNA与对照组cDNAcDNA之后得到实验组mRNA，以分析仅在实验组表达的基因。③利用蛋白质组学法筛选疾病相关基因:以蛋白质组为研究对象，在整体水平上研究细胞内发生了变化，寻找疾病相关基因，特别是标志蛋白，对于疾病基因筛选具有重要意义测序Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert扩增目的基因PCR个基本步骤。①变性：根据DNA高温变性的原理，将反应体系温度升至94℃~98℃,使双链目的DNA离成单链，便于作为模板与引物结合、②退火：将反应体系温度降至50℃~65℃，此时序列互补的单链DNA构，为下一步延伸做好准备。③延伸：将反应体系温度升至70℃~75℃，DNA聚合酶遵循碱基互补配对原则在引物3’端以5’→3’方向催化合成目的DNA模板新的互补链。以上三个步骤构成PCR循环，循环进行即可扩增目的基因。其中，需要TaqDNA寡核苷酸引物，Mgcl2，dNTP和DNA模板。验证.gainandloss。利用基因打靶技术，用基因敲除使目标基因某些序列loss，或用基因敲入使目的基因gain，然后将重组的目标基因通过同源重组转化后筛选出阳性纯合子，最后诱导目的基因的表达，观察纯合子是否依然患病，从而判断目的基因与疾病的关系。谈谈你对转基因食品的看法互关系。原癌基因：又称细胞癌基因，是存在于正常细胞基因组中的一种正常基因，其功能分子基础，其编码的产物可以在动物体内引起肿瘤的发生，使培养细胞发生恶性转化。rasRIK或PIK途径激活RasRas蛋白激活Raf和PI-3K2）myc——Myc是细胞生长和分化的促进因子Myc3）bcl-2一些原癌基因产物就是Cyclin一些原癌基因产物诱导Cyclin表达一些原癌基因产物调节CDK活性，从而调节细胞周期和细胞凋亡。1、Rb(RB1):是第一被鉴定和克隆的抑癌基因。在G1Rb蛋白（是细胞周期抑制信号的集合点）通过对转录因子E2F的作用，使细胞停滞于G1期，起到调控细胞增值和分化的作用。2）p53蛋白在维持细胞正常生长、抑制恶性增殖过程中起重要作用。促进性增殖过程中起重要作用。促进DNA修复。3p16蛋白既是细胞周期的有效调控者，Rb蛋白保持低磷酸化，抑制细胞从G1期向S期的过渡，另外还可以通过稳定抑癌蛋白P53而抑制细胞增殖。4.试述人类基因分级表达调控（DNA层面，RNA层面，蛋白质层面）。、染色质结构改变通过改变DNA分子的压缩程度，形成异染色质或常染色质从素化等修饰，导致正电荷减少，而出现构象改变，与DNA亲和力降低，使染色质变疏松，3、染色质丢失DNA甲基化DNADNA与蛋白质的相互23DNA数，从而促进基因表达RNA：1、mRNA转录后的加帽和加尾，以增加mRNA的稳定性2、siRNA和miRNA通过RNAi机制使mRNA翻译抑制，干扰基因表达蛋白质：1、各类调节蛋白通过数量、化学修饰、变构、蛋白质-蛋白质相互作用等方式调节基因表达2、泛素-蛋白酶系统活性选择题：DNA半不连续复制转录启动子特点RNArRNA，是细胞内含量最多的一类RNA3类RNA（tRNA,mRNA,rRNA)中相对分子质量最大的一类功能是在mRNA的指导下将氨基酸合成为肽链引物酶：引物酶是合成一小段RNA，用来引导DNA起始DNA酶需护送才能催化引物合成基因探针：小段单链DNA与细胞凋亡直接的细胞器：溶酶体H-rasK-rasN-rassis家sis基因，HER2,BRAF,ABL1,MYC常见的抑癌基因Rb基因和P53基因,PTEN,P16（牛痘病毒）非病毒法（直接注射法、脂质转染法、磷酸钙共沉淀法，DEAE,RNA9.基因聚合酶特点：9.基因聚合酶特点：DNA101)限制性内切酶：识别特异序列，切割DNA(2)DNA连接酶：(3)dna聚合酶Ⅰ：a.合成双链cDNA中第二条链;b.缺口平移制做探针;c.DNA序列分析;d.填补