动物检验检疫技术

关于动物检验检疫技术第一页，共一百零一页，2022年，8月28日Contents检验检疫样品细菌分离及鉴定病毒分离及鉴定其它病原微生物分离及鉴定寄生虫检查现代生物技术的应用第二页，共一百零一页，2022年，8月28日第一节检验检疫样品一、病料采集和运送(一)病料采集基本原则（1）在采取病料前必须对被检动物可能患有何种疫病作出初步诊断。（2）采取病料所用容器、手术器械都应事先消毒，确保无毒，采样时应无菌操作。（3）应做好人身防护，严防人畜共患病感染。（4）应防止污染环境，防止疫病传播，做好环境消毒和病害肉尸的处理。（5）如果动物已死亡，有特殊要求第三页，共一百零一页，2022年，8月28日如果动物已死亡，取样应注意急性死亡动物,如怀疑是炭疽，不可随意解剖，应从耳尖或四肢末梢血管取血制成涂片,染色镜检,万不得已时局部解剖作脾脏触片的显微镜检查。排除炭疽后方能剖检取样采取病料时间,原则是越早越好,内脏病料的采取，如患畜已死亡，应尽快采集，最迟不超过6h。夏季要在动物死亡后2小时内采取病料；采取病料的种类，根据不同的疾病或检验目的，采其相应的脏器、内容物、分泌物、排泄物或其他材料。在无法估计病因时，可进行全面的采集。填写好病料送检单和剖检病理变化记录。第四页，共一百零一页，2022年，8月28日（二）使用器械的消毒刀、剪、镊子等用具煮沸消毒30min。器皿(玻制等)经高压灭菌或干烤灭菌；或放于0.5%～1%的碳酸氢钠水中煮沸10min～15min；软木塞和橡皮塞置于0.5%石碳酸水溶液中煮沸10分钟载玻片在1%～2%的碳酸氢钠水中煮沸10min～15min；水洗后用清洁纱布擦干，保存于酒精、乙醚等溶液中备用一般使用一次性针头和注射器。采取一种病料，使用一套器械与容器；5、采过病料的用具应先消毒后清洗。第五页，共一百零一页，2022年，8月28日（三）病料的采取方法1、血液（1）采血部位大的哺乳动物可选用颈静脉或尾静脉采血，也可采胫外静脉和乳房静脉血。毛皮动物小量采血可穿刺耳尖或耳壳外侧静脉，多量采血可在隐静脉采集，也可用尖刀划破趾垫0.5cm深或剪断尾尖部采血。啮齿类动物可从尾尖采血，也可由眼窝内的血管丛采血；兔可从耳背静脉、颈静脉或心脏采血。禽类通常选择翅静脉采血，也可通过心脏采血。第六页，共一百零一页，2022年，8月28日小鼠第七页，共一百零一页，2022年，8月28日第八页，共一百零一页，2022年，8月28日第九页，共一百零一页，2022年，8月28日猪前腔静脉采血

第十页，共一百零一页，2022年，8月28日第十一页，共一百零一页，2022年，8月28日第十二页，共一百零一页，2022年，8月28日（2）采血方法对动物采血部位的皮肤先剃毛(拔毛)，75%的酒精消毒，待干燥后采血；采血可用针管、针头、真空管或用三棱针穿刺，将血液滴到开口的试管内。禽类等的少量血清样品的采集，可用塑料管采集。用针头刺破消毒过的翅静脉，将血液滴到直径为3mm～4mm的塑料管内，将一端封口。第十三页，共一百零一页，2022年，8月28日（3）血样种类①全血样品进行血液学分析，细菌、病毒或原虫培养，通常用全血样品，样品中加抗凝剂。抗凝剂可用0.1%肝素、阿氏液或4.0~5%枸橼酸钠液。采血时应直接将血液滴入抗凝剂中，并立即连续摇动，充分混合。也可将血液放入装有玻璃珠的灭菌瓶内，震荡脱纤维蛋白。第十四页，共一百零一页，2022年，8月28日②血清样品进行血清学试验。血液中不加抗凝剂，血液在室温下静置2h～4h，待血液凝固，有血清析出时，用无菌剥离针剥离血凝块，然后置4℃冰箱过夜，待大部分血清析出后取出血清，必要时经低速离心分离出血清。在不影响检验要求原则下可因需要加入适宜的防腐剂。做病毒中和试验的血清避免使用化学防腐剂(如硼酸、硫柳汞等)。若需长时间保存，则将血清置20℃以下保存，但要尽量防止或减少反复冻融。样品容器上贴详细标签。第十五页，共一百零一页，2022年，8月28日③血浆的采集

采血试管内先加上抗凝剂，血液采完后，将试管颠倒几次，使血液与抗凝剂充分混合，然后静止，待细胞下沉后，上层即为血浆。第十六页，共一百零一页，2022年，8月28日2、一般组织（包括内脏组织）（1）采样方法

用常规解剖器械剥离死亡动物的皮肤，体腔用消毒的器械剥开，所需病料按无菌操作方法从新鲜尸体中采集。剖开腹腔后，注意不要损坏肠道。第十七页，共一百零一页，2022年，8月28日（2）采样种类①病原分离样品的采集用于细菌分离的样品的采集，首先以烧红的刀片烫烙脏器表面，在烧烙部位刺一孔，用灭菌后的铂耳伸入孔内，取少量组织或液体，作涂片镜检或划线接种于适宜培养基上②组织病理学检查样品的采集采集包括病灶及临近正常组织的组织块，立即放入10倍于组织块的10%福尔马林溶液中固定。组织块厚度不超过0.5cm，切成1cm2～2cm2。组织块切忌挤压、刮摸和用水洗。如作冷冻切片用，则将组织块放在0℃～4℃容器中，尽快送实验室检验。第十八页，共一百零一页，2022年，8月28日3、液体病料采集胆汁、脓、粘液或关节液等样品时，用烫烙法消毒采样部位，用灭菌吸管、毛细吸管或注射器经烫烙部位插入，吸取内部液体材料，然后将材料注入灭菌的试管中，塞好棉塞送检。也可用接种环经消毒的部位插入，提取病料直接接种在培养基上。供显微镜检查的脓、血液及粘液抹片的制备方法:先将材料置玻片上，再用一灭菌玻棒均匀涂抹或另用一玻片推抹。组织块、致密结节及脓汁等亦可在两张玻片中间，然后沿水平面向两端推移。用组织块作触片时，持小镊将组织块的游离面在玻片上轻轻涂抹即可。第十九页，共一百零一页，2022年，8月28日4、皮肤

病料直接采自病变部位，如病变皮肤的碎屑、未破裂水泡的水泡液、水泡皮等。采取病变局部的皮肤(10cm×10cm左右)，放入甘油盐水缓冲溶液中，或10％饱和盐水溶液中，或10％福尔马林液中。第二十页，共一百零一页，2022年，8月28日5、肠内容物或粪便

肠道只需选择病变最明显的部分，将其中的内容物弃去，用灭菌生理盐水轻轻冲洗；也可烧烙肠壁表面，用吸管扎穿肠壁，从肠腔内吸取内容物，将肠内容物放入盛有灭菌的30%甘油盐水缓冲保存液中送检。或者，将带有粪便的肠管两端结扎，从两端剪断送检。第二十一页，共一百零一页，2022年，8月28日6、胃液及瘤胃内容物（1）胃液采集胃液可用多孔的胃管抽取。将胃管送入胃内，其外露端接在吸引器的负压瓶上，加负压后，胃液即可自动流出。（2）瘤胃内容物采集反刍动物在反刍时，与食团从食道逆入口腔时，立即开口拉住舌头，另一只手深入口腔即可取出少量的瘤胃内容物。第二十二页，共一百零一页，2022年，8月28日

7、呼吸道应用灭菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉或气管内的分泌物，蘸取分泌物后立即将拭子浸入保存液中，密封低温保存。常用的保存液有pH7.2～7.4的灭菌肉汤或磷酸盐缓冲盐水。一般每支拭子需保存液5mL。第二十三页，共一百零一页，2022年，8月28日

8、眼睛眼结膜表面用拭子轻轻擦拭后，放在灭菌的30%甘油盐水缓冲保存液中送检。有时，也采取病变组织碎屑，置载玻片上，供显微镜检查。第二十四页，共一百零一页，2022年，8月28日9、小家畜及家禽将整个尸体包入不透水塑料薄膜、油纸或油布中，装入木箱内，送往实验室。小动物,禽和鱼等可整体送检。在距离实验室很近,又有隔离运输条件时,也可将发病小动物直接送检。第二十五页，共一百零一页，2022年，8月28日10、脑、脊髓（1）全脑、脊髓的采集

采取脑、脊髓做病毒检查，可将脑、脊髓浸入30%甘油盐水液中或将整个头部割下，包入浸过消毒液的纱布中，置于不漏水的容器内送往实验室。第二十六页，共一百零一页，2022年，8月28日（2）脑、脊髓液的采集

①采样前的准备：专用穿刺针②采样方法：颈椎穿刺、腰椎穿刺③采样数量：大型动物颈部穿刺一次采集量35mL～70mL，腰椎穿刺一次采集量15mL～30mL。第二十七页，共一百零一页，2022年，8月28日二、病料的保存1、细菌检验材料的保存将采取的器脏组织块，保存于灭菌液体石蜡、饱和氯化钠溶液或30％甘油缓冲盐水溶液中，容器加塞封固。液体装在封闭的毛细管或试管运送。寄送肠道时，先清除肠内粪团，用灭菌盐水清洗后，置于盛有上述保存剂的试管中即可。粪便可移入灭菌容器中寄送。第二十八页，共一百零一页，2022年，8月28日2、病毒检验材料的保存

将采取的器脏组织块，保存于50％甘油缓冲盐水溶液，容器加塞封固。3、病理组织学检验材料的保存将采取的器脏组织块放入10％福尔马林溶液或95％酒精中固定，固定液的用量为送检病料的10倍以上。为防病料冻结，可将固定好的组织块取出，保存于甘油和10％福尔马林等量混合液中第二十九页，共一百零一页，2022年，8月28日三、病料的记录、包装和运送1、送检样品的记录送往实验室的样品应有一式三份的送检报告，一份随样品送实验室，一份随后寄去，另一份备案2、送检样品包装和运送所采集的样品以最快最直接的途径送往实验室。

24h内的放在4℃左右的容器中运送。24h内不能运送的，把样品冷冻，并以此状态运送第三十页，共一百零一页，2022年，8月28日四、病料的处理

1、性状观察

采集的病料，在接种培养前,应对其性状进行观察，如是否脓性带血或腐败，有何异味,并作记录2、涂片各种病料在分离培养前均应制备涂片,作革兰氏染色,镜检,以了解细菌的形态,染色特性,并大致估计其含菌量。通过肉眼观察和显微镜下看到的结果,对病料中可能含有的病原菌作最初步的估价。第三十一页，共一百零一页，2022年，8月28日3、污染病料抑菌培养如果病料被杂菌污染严重,则需采用一些对病原菌无害,但对杂菌有杀灭或抑制作用的方法,以抑制杂菌生长。4、集菌处理

有些病料含菌太少,则应先作集菌处理,然后接种,以提高检出率,其集菌方法有离心法和过滤法.第三十二页，共一百零一页，2022年，8月28日第二节细菌分离及鉴定一、细菌的分离与接种

1、平板划线接种法通过平板划线后,可使细菌分散生长,形成单个菌落,有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌。

第三十三页，共一百零一页，2022年，8月28日A分区划线法首先将接种环灭菌后,沾取标本均匀涂布于平板培养基边缘一小部分(第一区),将接种环火焰灭菌,待冷却后只通过第一区3-4次后连续划线(为第二区),依次可共划线3-5区,每一区细菌数可逐渐减少,直到分离出单个菌落为止.B连续划线法首先将标本均匀涂布于平板培养基边缘一小部分,然后由此开始，在培养基表面自左向右连续划线并逐渐向下移动，直到下边缘。第三十四页，共一百零一页，2022年，8月28日2、斜面接种法

采用该法目的是进行纯培养。其方法是从平板分离培养物上用接种环挑取单个菌落或者是取纯种,移种至斜面培养基上,先从斜面底部自下而上划一条直线,再从底部开始向上划曲线接种,尽可能密而匀,或者直接自下而上划曲线接种。第三十五页，共一百零一页，2022年，8月28日3、倾注培养法此法适用于乳汁和尿液等液体标本的细菌计数。其方法是取原标本经适当稀释，置于无菌平皿内,倾入已融化并冷至50℃左右的培养基约立即混匀待凝固后倒置培养。第三十六页，共一百零一页，2022年，8月28日

4、穿刺接种法

多用于双糖,明胶等具有高层的培养基进行接种方法是用接种针挑取菌落或培养物,由培养基中央直刺到距管底约0.3-0.5cm处.然后沿穿刺线退出接种针；若为双糖等含高层斜面的培养基则光穿刺高层部分,退出接种针后直接曲线接种斜面部分。第三十七页，共一百零一页，2022年，8月28日第三十八页，共一百零一页，2022年，8月28日5、液体接种法

多用于普通肉汤,蛋白胨,水等液体培养基的接种方法是接种环沾取菌种,倾斜液体培养基管,先在液面与管壁交界处研磨接种物(以试管直立后液体能淹没接种物为准),然后再在液体中摆动2-3次接种环,塞好棉塞后轻轻混合即可。第三十九页，共一百零一页，2022年，8月28日二、细菌的培养方法

需氧培养法二氧化碳培养法厌氧培养法第四十页，共一百零一页，2022年，8月28日形态学特征生理学特征生态学特征生物分类的传统指标三、细菌的鉴定第四十一页，共一百零一页，2022年，8月28日1、微生物分类鉴定的经典方法纯培养的病原微生物可进行系统鉴定。系统鉴定就是通过病原菌的形态结构、生长特征、抗原性和病原性等检测，并用已知标准血清确定分离细菌的属、种和型。微生物鉴定程序通常是根据其形态生长、生化特征等定种，最后根据抗原的免疫血清检查定型第四十二页，共一百零一页，2022年，8月28日常用的形态学特征有培养特征细胞形态染色特性特殊的细胞结构运动性等

（1）形态学特征第四十三页，共一百零一页，2022年，8月28日第四十四页，共一百零一页，2022年，8月28日（2）生理生化特征

营养类型与氧的关系对温度的适应性对pH的适应性对渗透压的适应性代谢产物

细菌毒力

第四十五页，共一百零一页，2022年，8月28日细菌毒力病原性细菌致病能力的强弱程度称为毒力。测定微生物毒力大小系用递减剂感染易感动物来进行。试验时,须注意实验动物的种别,年龄与体重,试验材料和剂量,感染途径以及其它因素。通常用来表示微生物毒力大小的单位有：最小致死量(M.L.D):能使特定动物感染后,在一定时限内发生死亡的最少活的微生物量或毒素量半数致死量(LD50)：在一定时限内能使半数动物发生感染死亡所需的活的微生物量或毒素量。第四十六页，共一百零一页，2022年，8月28日2、微生物分类鉴定中的现代方法（1）核酸分析鉴定微生物遗传型特点：直接比较不同微生物之间基因组的差异

DNA的碱基组成(G+Cmol%)

核酸的分子杂交法

主要方法第四十七页，共一百零一页，2022年，8月28日计算机鉴定微生物基于数值分类法即通过广泛比较分类单位的性状特征，然后计算它们之间的相似性，再根据相似性的数值划分类群的一种分类方法。（2）应用计算机鉴定微生物学第四十八页，共一百零一页，2022年，8月28日第三节病毒分离及鉴定一、检材的采集与处理发病初期从感染部位采集足量标本，低温运送、保存，尽快送检，分离培养前去除标本中的沉渣、细菌、真菌和毒性物质等，必要时需浓缩、提纯。二、病毒的分离及鉴定病毒检验的大致程序：临床标本→分离培养→初步鉴定→最后鉴定病毒分离培养方法：包括组织培养、鸡胚接种、动物接种第四十九页，共一百零一页，2022年，8月28日3、病毒的初步鉴定依据动物感染范围及潜伏期、对鸡胚的敏感性、细胞形态变化类型、红细胞吸附、病毒干扰现象、血凝性质、理化性质（核酸类型测定、大小形态、乙醚敏感试验、耐酸试验）4、病毒的最后鉴定依据主要是血清学方法（中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验）和分子生物学方法。第五十页，共一百零一页，2022年，8月28日5、分离病毒的病原学意义从组织、脑脊液、血液、眼部、水泡液分离到任何病毒均可认为具有高度病原学意义。尿液中检出病毒也具有病原学诊断意义从呼吸道、阴道、肠道标本分离病毒，需要考虑这些病毒是否有无症状携带者和长期排毒者。第五十一页，共一百零一页，2022年，8月28日第四节其它病原微生物分离及鉴定立克次氏体2衣原体4螺旋体31支原体33第五十二页，共一百零一页，2022年，8月28日一、螺旋体1、形态结构及染色特征螺旋体是一类菌体细长、柔软、弯曲呈螺旋状、能活泼运动的原核单细胞微生物、它的基本结构于细菌类似。革兰氏染色阴性，但大多不易着色。在普通显微镜下难以看到，常用镀银染色法染色。第五十三页，共一百零一页，2022年，8月28日2、生物学特性螺旋体多为需氧菌，对热、酸、干燥和一般消毒剂均敏感。钩端螺旋体是唯一可用人工培养基培养的螺旋体。电镜下的钩端螺旋体第五十四页，共一百零一页，2022年，8月28日3、致病性主要传播途径是接触传播。钩端螺旋体具有较强的侵袭力，能通过皮肤微小伤口、眼结膜、鼻或口腔粘膜而侵入人体。其次，也可以通过消化道传播，如进食了排泄物污染的食物，螺旋体就从消化道粘膜侵入体内。首先发生钩端螺旋体败血症，出现高烧头痛，随着钩端螺旋体侵入肝、肾、肺、脑等引起多种脏器的损害。临诊表现形式多样，主要有发热、黄疸、血红蛋白尿、流产、皮肤和粘膜坏死、水肿等。

第五十五页，共一百零一页，2022年，8月28日4、微生物诊断（1）病料的采集与检查发病早期以采取病畜的血液为宜，发病后期肾脏中的病原体大量增加，宜采取尿液。死后采样肝、肾、肾上腺等实质器官，研磨后取上清制片镜检。暗视野显微镜检查以上材料制成压滴标本片，用暗视野显微镜检查。螺旋体在暗视野显微镜下似一串发亮的小珍珠，运动活泼标本染色镜检用姬姆萨染色或方氏镀银法和钩端螺旋体媒染法。第五十六页，共一百零一页，2022年，8月28日（2）分离培养常用柯氏培养基和捷氏培养基培养。接种量要大，血液直接接种，尿液过滤后接种。（3）动物感染实验（4）血清学检验动物感染钩端螺旋体发病早期，其血清中即有特异性抗体出现，此抗体长期存在。诊断用已知抗原检查动物血清中的抗体。最常用的方法是凝集溶解实验，暗视野检查。第五十七页，共一百零一页，2022年，8月28日二、立克次氏体1、形态结构立克次氏体形态为细胞多形，可呈球形、球杆形、杆形，甚至哑铃形或丝状等，但主要是球杆状。单个或成对排列，有时呈短链状。革兰氏染色阴性，但不易着色第五十八页，共一百零一页，2022年，8月28日2、生物学特性专性细胞内寄生大小介于细菌和病毒之间革兰氏染色阴性，姬姆萨染色呈紫或蓝色对理化因素抵抗力不强，尤对热敏感，一般在56℃，30min即被灭活。对一些广谱抗生素敏感，但磺胺药不敏感且反有促进立克次体生长作用，不能用于治疗。第五十九页，共一百零一页，2022年，8月28日立克次氏体第六十页，共一百零一页，2022年，8月28日3、致病性致人畜疾病的立克次氏体，多寄生于网状内皮系统、血管内度细胞或红细胞，并常天然寄生在虱、蚤、蜱、螨等节肢动物体内，通过叮咬、抓伤或吸入，从一个宿主传播到另一个宿主动物或人体。第六十一页，共一百零一页，2022年，8月28日4、微生物诊断病料采集：立克次氏体分离培养的病料，应采自未用抗生素的急性期或发热期患病动物，已死亡的动物应尽早采集。病料-70℃保存。根据需要可采取急性期或发热期患病动物的血液；病死动物的脾、肝、肾、脑、脊髓及胎盘、乳汁等。第六十二页，共一百零一页，2022年，8月28日病原检查分离将所采病料制成血片或组织抹片，经适当方法染色后镜检。或将病料处理后接种于鸡胚卵黄囊内或适宜的易感动物或接种细胞，培养出立克次体。抗体检查可用已知抗原作凝集试验、补体结合试验或中和试验，以证实患病动物血清中的相应抗体，从而诊断该病。中和试验可用豚鼠或鸡胚进行。由于某些变形杆菌菌株可与某些立克次体多糖抗原的抗体发生交叉反应，故在医学上，常用这些变形杆菌菌株制成凝集抗原，用凝集试验检查某些立克次体病。这种凝集试验称为魏-裴二氏反应

第六十三页，共一百零一页，2022年，8月28日三、支原体1、形态结构及染色特性支原体是目前发现的最小的最简单的，也是唯一一种没有细胞壁的原核细胞，细胞柔软具有高度的多形性。常呈球形、杆状和丝状，偶见有梨状、分枝状、环状、螺旋状等不规则的形状。支原体的大小为0.2～0.3um,可通过滤菌器革兰氏染色呈阴性，通常着色效果不好，故常用姬姆萨染色染色法将其染成淡紫色

第六十四页，共一百零一页，2022年，8月28日2、生物学特性支原体基因组为一环状以双链DNA，分子量小（仅有大肠杆菌的五分之一）支原体的生物合成能力较弱，虽然能够在人工培养基上生长，但营养要求比一般细菌高，常常需要在培养基中加入胆固醇、血清、腹水、牛肉浸膏和酵母浸汁等特殊成分。对环境渗透压敏感第六十五页，共一百零一页，2022年，8月28日3、致病性与免疫性除了少数的支原体为腐生或共生菌，大多数为寄生菌。病原性支原体常常定居于多种动物的呼吸道、泌尿生殖道、消化道黏膜表面、乳腺以及眼等部位，并且对胸腺、腹膜、关节滑液囊膜的间质细胞以及中枢神经系统的亲和力较强。第六十六页，共一百零一页，2022年，8月28日4、微生物学诊断直接镜检意义十分有限，应该取病料进行分离培养和形态学检验，做生理生化以及血清学试验方能进行鉴定。第六十七页，共一百零一页，2022年，8月28日（1）病料采集和保存由于支原体侵害动物的黏膜表面，一般可用灭菌棉花拭子涂抹取样。也可根据病变部位，取其肺、胸水、乳汁、鼻咽分泌物、关节液、淋巴结等，病料可经滤器除菌后再接种。第六十八页，共一百零一页，2022年，8月28日（2）培养方法培养基中培养鸡胚接种培养动物接种培养第六十九页，共一百零一页，2022年，8月28日（3）菌落形态和染色观察支原体在适宜的固体培养基上能长出具有“油煎蛋状”或“桑葚状”菌落肺炎支原体菌落第七十页，共一百零一页，2022年，8月28日电子显微镜镜下肺炎支原体呈现多型性第七十一页，共一百零一页，2022年，8月28日四、衣原体1、形态结构革兰氏阴性，圆形或椭圆形体；姬姆萨染色，胞浆内有球形和椭圆形的衣原体

第七十二页，共一百零一页，2022年，8月28日2、生物学特性介于立克次氏体与病毒之间，能通过细菌滤器，专性活细胞内寄生，生物学特性更接近细菌而不同于病毒。具有细胞壁，其组成与革兰氏阴性菌相似，在显微镜下能观察到；有独特的发育周期，行二分裂方式繁殖。专性寄生，不能在人工培养基中生长；对多种抗生素敏感，衣原体对热和常用消毒剂敏感

第七十三页，共一百零一页，2022年，8月28日3、致病性衣原体通过创面侵入机体后，原体吸附于易感的柱状或杯状粘膜上皮细胞并在其中繁殖，也能进入单核吞噬细胞繁殖。在宿主细胞内存在原体和始体两种形态。具有感染性的原体通过胞饮作用进入宿主细胞，逐渐增大成为始体。始体无感染性，但能在空泡中以二分裂方式反复繁殖，形成大量新的原体，积聚于细胞质内成为各种形状的包涵体，宿主细胞破裂，释放出的衣原体则感染新的细胞。第七十四页，共一百零一页，2022年，8月28日4、微生物诊断衣原体鉴定要点在细菌培养基上不能生长，衣原体培养方法有鸡胚卵黄囊接种、小鼠腹腔、鼻内接种和多种细胞培养。严格胞内寄生，在感染细胞的细胞质内可见衣原体原体和始体，感染细胞破裂后释放于胞外第七十五页，共一百零一页，2022年，8月28日寄生虫学诊断技术包括病原检查、免疫学检查和分子生物学检查等三个方面。一、病原学诊断

根据寄生虫生活史的特点，从病体的血液、组织液、排泄物、分泌物或活体组织中检查寄生虫的某一发育虫期，这是最可靠的诊断方法病原学诊断方法检出率较低，对于在组织中或器官内寄生而不易取得材料的寄生虫其检出效果不理想。第五节寄生虫检查第七十六页，共一百零一页，2022年，8月28日粪便检查寄生虫病原学检查1234血液检查

排泄物与分泌物等的检查

其他器官组织检查第七十七页，共一百零一页，2022年，8月28日在动物检疫中，常用的方法有以下几种：1、虫卵检查法相对密度较小的虫卵，常用虫卵漂浮法，以相应密度的漂浮液进行离心，即可收集漂浮在上的虫卵；密度较大的虫卵，多用水洗沉淀法，在沉渣中收集虫卵。多用于肠道寄生虫和球虫的检查。2、虫体检查法采用剖检或采集相应的标本（粪便、血液、阴道分泌物、尿液、痰液、组织活检或骨髓穿刺等），直接检出虫体。第七十八页，共一百零一页，2022年，8月28日二、免疫学诊断

寄生虫侵入机体，刺激机体引起免疫反应，利用免疫反应的原理在体外进行抗原或抗体的检测，达到诊断的目的。三、生物学检查包括核酸探针技术和PCR技术。但这两种技术在寄生虫检测中多限于同一虫种的鉴别。第七十九页，共一百零一页，2022年，8月28日第六节

现代生物技术在动物检验检疫中的应用在动物疫病诊断中和检疫中，现代生物技术的应用主要体现在两个方面：一是基于抗原-抗体反应的免疫血清学技术；二是基于病原核酸检测的分子生物学技术。免疫血清学技术主要包括中和试验、凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、免疫荧光抗体技术、免疫酶标记技术等分子生物学技术主要包括聚合酶链式反应PCR、核酸杂交、寡核苷酸指纹图谱、限制性片段长度多态性等。第八十页，共一百零一页，2022年，8月28日一、免疫血清学技术的应用1、凝集反应凝集反应是指颗粒性抗原例如细菌、红细胞等与相应的抗体在适量的电解质存在的条件下，经一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集物。凝集反应广泛地应用于疾病的诊断和各种抗原性质的分析。既可用已知免疫血清来检查未知抗原，亦可用已知抗原检测特异性抗体。第八十一页，共一百零一页，2022年，8月28日凝集反应

直接凝集反应：是指颗粒性抗原与抗体直接结合而出现的凝集现象间接凝集反应：指可溶性抗原或抗体吸附于一种与免疫无关的、一定大小的不溶性颗粒(即载体颗粒)表面，然后与相应抗体或抗原作用而出现的特异性凝集反应。第八十二页，共一百零一页，2022年，8月28日第八十三页，共一百零一页，2022年，8月28日2、沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电介质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等。同相应抗体比较，抗原分子小，单位体积内含有的抗原量多，做定量试验时，为了不使抗原过剩，应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价沉淀反应的实验方法大体可分为环状法、絮状法、琼脂扩散法三种基本类型。第八十四页，共一百零一页，2022年，8月28日（1）环状沉淀试验

将免疫血清加到直径小于0.5cm的反应管底部；将含有可溶性抗原的材料重叠于上；抗原与抗体在两液界面相遇，形成白色免疫复合物沉淀

第八十五页，共一百零一页，2022年，8月28日（2）絮状沉淀试验

将抗原与抗体溶液混合在一起，在电解质存在时，抗原与抗体结合形成絮状沉淀物。这种沉淀试验受到抗原与抗体比例的直接影响，通常采用固定抗体稀释抗原的方法，二者比例适合时，产生反应最快；一种过剩则沉淀减少，甚至无沉淀。第八十六页，共一百零一页，2022年，8月28日第八十七页，共一百零一页，2022年，8月28日（3）琼脂扩散试验可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂凝胶内扩散，二者相遇，在比例合适处形成白色沉淀。琼脂凝胶形成网络状结构，抗原和抗体在凝胶内可自由扩散；Ag-Ab复合物为超大分子，由于网孔的限度，而被网在琼脂中；第八十八页，共一百零一页，2022年，8月28日单向琼脂扩散试验将抗体混合于琼脂内，倾注于玻片上，凝固后在琼脂上打孔再将抗原标本加入孔内，经过一定的时间，在孔的周围出现抗原抗体复合物形成的沉淀环，环的大小与抗原含量和扩散时间相关。第八十九页，共一百零一