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微量定容测压法测定种子的呼吸速率一、原理微量检压计不仅用来研究有机体或部分组织的呼吸作用和发酵作用，而且也可以研究有关O2与CO2及其他气体交换的反应。如光合作用、酶的活性等。近年来又利用此法测定线粒体的呼吸强度，以鉴定杂种优势，为育种工作中对杂种的遗传性状研究法开辟了一条新途径，因此广泛用于植物生理、生化研究。测压法的原理是在固定体积并保持恒温的密闭系统中，气体产生或消失的总量，可以利用气体定律计算求得。二、材料、仪器设备及试剂（一）材料待测的小麦、水稻萌发种子。（二）仪器设备瓦布格呼吸计（微量呼吸检压计），移液管，量筒，小镊子，称量瓶，橡皮筋数根；吸水纸。试剂（1）20%KOH。（2）凡士林。（3）Brodie氏溶液；NaCl23g，牛胆酸钠5g，溶于500mL水中，另加少许染料（酸性品红）使溶液染色，并加数滴浓麝香草酚酒精溶液作为防腐剂。三、实验步骤（一）种子吸氧量的测定（1）取不同处理种子若干（体积约0.5mL左右），称其鲜重，然后用排水法测定其体积，先用滤纸将种子外面水分吸干，另取10mL量筒一个，内盛4～5mL的水，将种子放入量筒内观察水分上升体积，二次水分体积之差即为种子体积，将种子取出，用滤纸吸干附在种子外表的水分，然后将种子放入反应瓶的底部，再加0.5mL水。（2）在中央小槽内加入20%KOH0.2mL，为了增大吸收CO2的能力，可用1cm×2cm滤纸折叠后插入中央小槽内，并在中央小槽口上涂上少量凡士林，防止碱液逸出。（3）侧管的玻璃棒涂以凡士林后塞紧。压力计口亦涂上凡士林和反应瓶连接，转动反应瓶，使封口凡士林呈透明为止，然后用橡皮筋将反应瓶固定在压力计上（图2-20-1）。（4）将压力计固定在水槽上，并打开活塞，平衡10~15min，在此过程中要检查反应瓶是否漏气。（二）空白试验（作温压计用）因压力计左管口是与大气相通，实验时室内气压或水槽温度微小变化对读数均有影响，为此，必须进行校正。校正方法：即反应瓶中除不加种子外，其他处理与测压计完全相同。测压计与温压计两者的关系如表2-20-1：（三）测定当反应瓶内温度与水槽温度平衡后，将压力计上的活塞关闭。开始振荡，并记录开始时间，每隔15min记录测压计及混压计左管液面高度，读数时关闭振荡器，并将压力计的右管液面调整k50wm.c，再记录左管液面高度，共计4次实验结束后，将反应瓶中的种子用小镊子取出，放置称量瓶内，在105℃烘箱中烘至恒重，称其重量。另将反应瓶上的凡士林用软纸揩拭干净、再用自来水冲洗后，置于洗涤液中浸泡0.5h，

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