5种植物源药剂对苹果树腐烂病室内防效评价

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材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试菌株

苹果树腐烂病菌Valsamail由甘肃农业大学植物养护学院植物病原学测验室分开保存。

1.1.2离体枝条

采集于甘肃省兰州市西固区苹果园‘新红星’健康枝条，树龄为20年。

1.1.3供试药剂

20%乙蒜素乳油（EC），河南省南阳卧龙农药厂;0.3%丁子香酚可溶液剂（SL），南通神雨绿色药业有限公司;5%香芹酚水剂（AS），兰州世创生物科技有限公司;1.3%苦参碱水剂（AS），恒源伟业生物科技有限公司;0.5%小檗碱水剂（AS），潍坊奥丰作物病害防治有限公司。

1.2试验方法

1.2.1含药培养基的制备

将供试药剂经无菌水按半倍稀释法[9]配制成如表1所示浓度的药液，将不同浓度药剂参与灭菌后冷卻至50℃的PDA培养基，充分振荡混合平匀后倒入培养皿，以加无菌水的培养基作为空白对照，待培养基凝固后接种苹果树腐烂病病原菌，举行预试验，筛选出较好的药剂设定浓度举行毒力测定（表2）。

1.2.2不同植物源药剂对苹果树腐烂病菌菌落生长的抑制作用

用打孔器（d=5mm）从培养7d的苹果树腐烂病菌菌落边缘打取菌饼，接种到含药和空白对照平板中央。以加无菌水的培养基作为空白对照，置于25℃恒温培养箱黑暗培养5d后采用十字交错法测量菌落直径，计算生长抑制率。

生长抑制率=[（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-0.5）]×100%。

1.2.3不同植物源药剂对苹果树腐烂病菌孢子活性的影响

在超净工作台上，将5种农药稀释成不同浓度，制成含药培养基。待培养基冷却后，滴入50μL腐烂病菌孢子悬浮液，用无菌玻璃涂布器将孢子悬浮液涂抹平匀。每个处理设置3个重复，以参与等量无菌水的PDA为空白对照。将涂抹平匀的PDA培养基置于25℃黑暗条件下倒置培养24h后切取1cm2大小的正方形培养基放于载玻片上，在显微镜下查看孢子的萌发状况。每个重复选择100个孢子检查萌发率。计算孢子萌发率和抑制率。

孢子萌发率=（萌发的孢子数/孢子总数）×100%;

萌发抑制率=[（对照孢子萌发率-处理孢子萌发率）/对照孢子萌发率]×100%。

1.2.4不同植物源药剂对接种病原菌的离体枝条养护作用

参照翟慧者[10]和臧睿等[11]离体枝条接种方法，截取10cm长的离体枝条，先用自来水冲洗明净，再用无菌水冲洗，接着用脱脂棉蘸取酒精对枝条外观举行消毒，结果置于超净工作台晾干后烫伤，再次喷无菌水晾干，将已配制好的不同浓度药剂涂抹于伤口，待晾干后接种培养5d的苹果树腐烂病菌菌饼，以先涂抹无菌水后接种病原菌为对照。试验每个处理和对照接种3个枝条，每个枝条2个接种点，每处理共计6个接种点（即为6次重复）。保湿培养7～10d后采用“十字交错法”测量病疤长度和短径，并计算病疤面积。

病疤面积（cm2）=1/4×π×长径×短径。

1.3数据处理

数据采用Excel2022软件计算平均值和标准误，并采用SPSS19.0软件和Duncan氏新复极差法举行方差分析（P<0.05）。

2结果与分析

2.1不同植物源藥剂对苹果树腐烂病菌菌丝生长的抑制作用

通过含药培养基法测定植物源农药对苹果树腐烂病菌菌丝生长的影响，试验结果说明，5种植物源农药对苹果树腐烂病菌菌丝生长均具有确定的抑制作用。通过菌丝生长抑制率计算5种药剂EC50，得出0.3%丁子香酚SLEC50最低，仅为0.43μg/mL;而0.5%小檗碱ASEC50最高，为13.68μg/mL。因此，0.3%丁子香酚SL对苹果树腐烂病菌菌丝生长抑制作用最为显著（表3）。

2.2不同植物源药剂对苹果树腐烂病菌分生孢子萌发的抑制作用

不同植物源药剂对苹果树腐烂病菌分生孢子萌发均有确定的抑制效果，通过不同药剂EC50得出：丁子香酚对苹果树腐烂病菌分生孢子萌发的抑制作用最强，EC50为0.70μg/mL;苦参碱和香芹酚次之，EC50分别为8.04μg/mL、8.56μg/mL;乙蒜素的抑制作用较差，EC50为20.39μg/mL;小檗碱对苹果树腐烂病菌分生孢子萌发的抑制作用最差，EC50为28.23μg/mL（表4）。

2.3不同植物源药剂对接种病原菌的离体枝条养护作用

结果说明，供试的5种植物源药剂对接种苹果树腐烂病菌的离体枝条均有不同的养护效果。20%乙蒜素EC对接种病原菌的离体枝条的养护作用显著高于其他药剂，病疤面积最小，为160.21mm2，与对照相比差异显著;5%香芹酚AS、0.3%丁子香酚SL和1.3%苦参碱AS次之，病疤面积分别为236.03、266.42和484.95mm2;0.5%小檗碱AS在接菌后对离体枝条的养护作用最弱，病疤面积最大，为597.09mm2，而对照的病疤面积为1309.64mm2（图1和表5）。

3结论与议论

3.1植物源农药对苹果树腐烂病菌菌落及孢子萌发的影响

本试验供试的5种植物源农药对苹果树腐烂病菌的菌落生长和孢子萌发均有确定的抑制作用。随着不同药剂浓度的增加，其抑制效果显著巩固，其中0.3%丁子香酚SL对苹果树腐烂病菌菌落生长和孢子萌发的抑制率最高，其EC50分别为0.43μg/mL和0.70μg/mL;其次为1.3%苦参碱AS，抑制菌落生长和孢子萌发的EC50分别为8.11μg/mL和8.04μg/mL。杨勇等[12]的研究察觉20%丁子香酚AS对葡萄灰霉病有较好的抑菌效果，浓度为50μg/mL时抑制率达成93.47%，且与另一植物源农药5%苦参碱混配后，对葡萄灰霉病菌的抑菌活性显著巩固。同时，安永学等[13]的研究说明5%的香芹酚AS500倍液对辣椒白粉病的防效可达89.93%，且可使辣椒增产18.08%;郭成瑾等[14]的研究说明在大田试验中使用0.3%丁子香酚SL防治马铃薯晚疫病，在发病初期喷施2～3次，防病效果可达72.17%。本试验说明，丁子香酚对苹果树腐烂病具有较好的防治效果。

3.2植物源农药对苹果离体枝条的养护作用

离体枝条试验结果说明20%乙蒜素EC对苹果离体枝条的养护作用最强，接种苹果树腐烂病菌7d后，病疤面积最小，为160.21mm2。据报道，叶面喷施乙蒜素不仅能够促进作物生长，还对作物的枯萎病和蔓枯病具有较好的防效[15]。杨淑贞等[16]的研究说明，80%乙蒜素EC可用于防治山核桃干腐病，乙蒜素可以抑制山核桃干腐病病原菌菌丝生长，同时对山核桃木质部具有良好的养护作用，本试验结果与前人研究结果根本一致。

利用植物源制剂防治植物病害是目前植物病害生物防治的一个新领域，是实现农药无毒、无残