吲哚乙酸氧化酶活性检测试剂盒说明书-可见分光光度法UPLC-MS-4305

电话：400-998-2324邮箱：service_uplc_ms@163.com网址：本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司第第页吲哚乙酸氧化酶活性检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4305规格：50T/24S

可见分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。试剂名称规格保存条件提取液液体40mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1瓶-20℃保存试剂四液体60mL×1瓶2-8℃保存试剂五粉剂×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入5mL蒸馏水备用，4℃保存两周。213mL（11瓶粉剂。、5.71L50%乙醇（乙醇V：H2O（V）1：1）20℃周，避免反复冻融。4、试剂五：临用前加入30mL试剂四溶解备用，2-8℃保存两周。、10g1.14mL50%VHV1150μo/mL的标准溶液，-20℃分装保存两周，避免反复冻融。产品说明：IAA氧化酶能调节植物体内吲哚乙酸的的水平，从而影响植物的生长。IAA在无机酸条件下与FeCl3作用生成红色产物，在530nm下有最大吸收峰。酶活力的大小可用破坏IAA的速率表示。IAA

IndoleaceticAcidOxidase(IAAO)

3-MethyleneoxindoleIAA+FeCl3 RedChelate(530nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。需自备的仪器和用品：1mL/操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）10.1g1mL12000g4℃15min25001mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（200W3s10s30次。12000g，4℃15min清，置冰上待测。二、测定步骤1、可见分光光度计预热30min，波长调至530nm，蒸馏水调零。2、标准液的稀释：将标准溶液用蒸馏水稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/mL的标准液。3、标准液稀释可参考下表：序号稀释前浓度（µmol/mL）标准液体积（µL）蒸馏水体积（µL）稀释后浓度（µmol/mL）150409602221009000.230.25005000.140.15005000.0550.055005000.02560.0255005000.0125备注：实验中每个标准管需400µL标准溶液。4、加样表：试剂名称（μL）测定管对照管标准管空白管提取液200200--试剂一4040--试剂二4040--试剂三8080--样本40上述试剂混匀后置于30℃水浴锅中准确反应30min--试剂四400400400400样本-40--标准品--400-蒸馏水40010000g常温离心10min，取上清液待测--上清液750750--标准品混合液750750试剂五400400400400置于置于30℃水浴锅中避光放置30min，测定530nm处的吸光值，分别记为A测定、A对照、A标准、空白，计算ΔA测定=A对照-A测定，ΔA标准=A标准-A空白。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2次。三、吲哚乙酸氧化酶酶活计算1、标准曲线的绘制：为xΔA标准为yΔA带入方程中计算得到样本浓度（x，μmol/mL）。2、吲哚乙酸氧化酶活力计算：按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmolIAA的酶量定义为一个酶活性单位。IAA氧化酶酶活（U/mgprot）=x×V酶促×1000÷(V样×Cpr)÷T=333×x÷Cpr按样本质量计算：单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmolIAA的酶量定义为一个酶活性单位。IAA氧化酶酶活（U/g质量）=x×V酶促×1000÷(W÷V提取×V样)÷T=333×x÷W按细胞或细菌数量计算：单位的定义：每104个细胞或细菌在反应体系中每分钟消耗1nmolIAA的酶量定义为一个酶活性单位。IAA氧化酶酶活（U/104cell）=x×V酶促×1000÷(500÷V提取×V样)÷T=0.667×