黄嘌呤氧化酶（XOD）活性检测试剂盒说明书-微量法UPLC-MS-4541

电话：400-998-2324邮箱：service_uplc_ms@163.com网址：本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司第第页黄嘌呤氧化酶（XOD）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。货号：UPLC-MS-4541规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。试剂名称规格保存条件试剂一液体120mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体10mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体1mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂五液体8mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体8mL×1瓶2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂三：根据样本量再用试剂二稀释5倍后备用。用不完的试剂2-8℃可保存1周。2、标准品：10μmol/mL亚硝酸钠。

微量法产品说明：XOD（EC）XOD2 XOD催化次黄嘌呤产生超氧阴离子，超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO-，NO-在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下，生成紫红色的偶氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根据其生成量可反映2 Hypoxanthine

XanthineOxidase

Xanthine+Superoxideanion2Superoxideanion+HydroxylamineHydrochloride NO-22NO-+4-Aminobenzenesulfonamide DiazoniumSaltDiazoniumSalt+N-(1-Naphthyl)-Ethylenediamine RedAzoDyes2注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、匀浆器/研钵、细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）（104个（mL）5001mL200W，3s10s30次）；8000g4℃10min（g）(mL)1：5~10（0.1g1mL），8000g4℃10min浆1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，分光光度计蒸馏水调零。20.25μmol/mL25μL10μmol/mL975μL）。3、操作表试剂名称（μL）空白管测定管标准管蒸馏水10--上清液-10-标准液--10试剂一404040试剂三404040试剂四404040混匀，37℃水浴/恒温培养箱放置20min试剂五606060试剂六606060//96530nm标准=A-A∆A=A-A1-2注：∆A0.005-1三、XOD活性计算mg1nmolNO2-（U/mgprot）=（∆A÷∆A标3×V样÷（Cpr×V=12.5×∆A样本÷∆A标准÷Cpr×F2单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmolNO-定义为一个酶活力单位。2XOD活性（U/g质量）=（∆A样本÷∆A标准×C标）×V提取×103÷W÷T×F=12.5×∆A样本÷∆A标准÷W×F2单位的定义：每万个细胞每分钟催化产生1nmolNO-定义为一个酶活力单位。2XOD活性（U/104cell）=（∆A样本÷∆A标准×C标）×V提取×103÷500÷T×F=0.025×∆A样本÷∆A标准×F2单位的定义：每毫升液体每分钟催化产生1nmolNO-定义为一个酶活力单位。2XOD活性（U/mL）=（∆A样本÷∆A标准×C标）×103÷T×F=12.5×∆A样本÷∆A标准×F103：单位换算系数，1μmol=103nmol；C标：标准溶液浓度，0.