第15章长期毒性作用及其试验方法课件

第十五章长期毒性作用及其试验方法

long-termtoxicityimpactandtestmethod

2022/12/141第十五章long-termtoxicityimpact第一节

基本概念和目的2022/12/142第一节

基本概念和目的2022/12/122

长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。一、定义基本概念和目的2022/12/143长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大剂量的药长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的

急性毒性试验：24小时内单次或多次大剂量给予某药所出现的有害作用；机体（人或动物）一性大剂量接受某药后所产生的快速而剧烈的中毒反应。

长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。2022/12/144长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的急1.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的

急性毒性试验为一次性给药或24小时内多次给药；

长期毒性试验为连续多日接触一定剂量给药，给药期限为临床用药的3-4倍时间。

对长期毒性试验各国之间无统一的时间规定。2022/12/1451.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：1.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的2.给药的剂量范围不同。

急性毒性试验为一次性大剂量给药

长期毒性试验为低剂量长期积累2022/12/1461.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：1.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的2.给药的剂量范围不同。3.观察毒效应不同。

急性毒性试验通常观察以死亡为效应的质反应；

长期毒性试验以量反应为指标，毒效应是从量变到质变逐渐变化的过程。2022/12/1471.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：蓄积作用(accumulationaction)

药物进入机体后，机体具有对药物进行代谢、转化及排泄的功能，最终将其排出体外。但当较长时间连续、反复给药，或者说给药的时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力时，出现药物进入机体的速度(或总量)超过排除的速度(或总量)的现象，这时药物就可能在体内逐渐增加并贮存起来，也就是说出现了蓄积作用。

基本概念和目的2022/12/148蓄积作用(accumulationaction)基本概念蓄积作用(accumulationaction)作用量积蓄—为可用化学方法检测出。功能性蓄积—（药物或其代谢物）不一定能用化学手段检测出来，但却有慢性毒性症状出现；或者说由于贮存在体内的药物或其代谢产物的量极微而现有的方法尚不足以测出，但由于多次接触引起轻微损害的累积而出现慢性毒性症状。基本概念和目的2022/12/149蓄积作用(accumulationaction)基本概念二、目的与意义观察在试验动物长期重复给药的情况下，了解药物有无蓄积作用，试验动物能否产生耐受性，试验动物会出现哪些毒性反应，其剂量效应关系如何，涉及哪些组织，主要靶器官是什么，损害的性质和程度如何，损害是否可逆等；观察在给试验动物长期重复给药的情况下，初步估计不出现毒性作用的最大耐受量和出现毒性作用的最小剂量，为拟定人用药的安全剂量提供参考。基本概念和目的2022/12/1410二、目的与意义观察在试验动物长期重复给药的情况下，了解药物有第二节

试验设计原则及方法2022/12/1411第二节

试验设计原则及方法2022/12/1一、一般原则和要求1.二种动物：啮齿类（大鼠）+非啮齿（比格犬）2.三个剂量：高、中、低三个档次，高剂量组充分反映药物的毒性，低剂量组不出现毒性反应。3.至少4组：溶剂(或赋型剂)对照组或已知药物毒性对照组。4.给药途径应与临床拟用途径相一致。5.符合《中华人民共和国药品管理法》，执行“药物非临床研究质量管理规范”。试验设计原则及方法2022/12/1412一、一般原则和要求1.二种动物：啮齿类（大鼠）+非啮齿（试验设计原则及方法

一般的观点是以药政部门的技术要求规范为核心，同时兼顾给药时限和给药剂量这两个重要因素，对整个长期毒性试验做一个较为合理的安排和设计，力争高效率、全面地了解药物长期给药所造成的有害反应及量-效关系。2022/12/1413试验设计原则及方法一般的观点是以药政部门的技术要求规二、实验动物

1.

种类及品系

首先考虑急性毒性试验业已证明的、对药物敏感的动物或品系。其次考虑受试动物的易获得性

在现阶段，选择易得、实验室易于饲养管理、饮食习性与人接近或吃一般的食物就可以正常生存的常规动物。我国规定：两种动物，一种为啮齿类，首选大鼠，另一种非啮齿类，首选狗。试验设计原则及方法2022/12/1414二、实验动物1.种类及品系试验设计原则及方法2022/12022/12/14152022/12/1215二、实验动物

1.

种类及品系2.起始月（周）龄、原则：选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物大鼠：6~9周；可降至5周；犬：6~12月龄；杂种犬最高不超过5年起始体重应在体重均值±20%内试验设计原则及方法2022/12/1416二、实验动物1.种类及品系试验设计原则及方法2022/1二、实验动物

1.

种类及品系2.起始月（周）龄3.性别及数量敏感动物、雌雄兼顾大鼠雌雄各10~30只；Beagle犬或猴雌、雄各3～6只试验设计原则及方法2022/12/1417二、实验动物1.种类及品系试验设计原则及方法2022/1二、实验动物

1.

种类及品系2.起始月（周）龄3.性别及数量4.饲养管理

动物饲养室内温度、湿度、光照、通风条件；动物饮水质量及饲料配方等；动物笼具等。严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素。试验设计原则及方法2022/12/1418二、实验动物1.种类及品系试验设计原则及方法2022/1三、给药期限试验设计原则及方法与拟定的临床疗程长短、临床适应症、用药人群相关，应充分考虑预期临床的实际疗程。原则上取决于临床拟定的用药时间，我国要求长期毒性试验的给药期限为临床疗程的3~4倍时间。创新药品试验周期应不少于90天；超过180天的新药可以在试验开始90天后，同时进行I期临床试验。2022/12/1419三、给药期限试验设计原则及方法与拟定的临床疗程长短、临床适应表15-1我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定临床拟用毒性试验期限给药时间啮齿类动物非啮齿类动物﹤5天

2周2周﹤2周

1月1月

2~4周3月3月

1~3月6月6月

﹥3月

6月9月

试验设计原则及方法2022/12/1420表15-1我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的四、剂量水平的选择

三个剂量组是必不可少的：高剂量应足以引起明显的毒性反应，但死亡率应控制在20%以内；低剂量应不引起毒性作用，原则上应高于同种动物药效的有效剂量（一般为动物有效剂量或临床治疗量的2~3倍）；为表明毒性作用的量—效关系，在上述两个剂量之间插入一个（或多个）中间剂量。试验设计原则及方法中剂量按计算2022/12/1421四、剂量水平的选择三个剂量组是必不可少的：试验设计原则及方四、剂量水平的选择

在选择合适的剂量时还应考虑到：药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有可能出现毒性作用；药物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容物有亲和性的药物，则应酌情增加剂量。

试验设计原则及方法2022/12/1422四、剂量水平的选择在选择合适的剂量时还应考虑到：试验设计原剂量水平选择的方法（1）半数致死量法（LD50法）

一般在大鼠3个月长期毒性试验中，高、中、低三个剂量可分别采用约LD50的1/10、1/50和1/100剂量，狗各剂量组可采用大鼠相应各组的一半剂量。试验设计原则及方法2022/12/1423剂量水平选择的方法（1）半数致死量法（LD50法）一剂量水平选择的方法（1）半数致死量法（LD50法）试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法90天重复给药试验180天或更长期重复给药试验蓄积毒性试验和/或7天短期重复给药试验急性毒性试验2022/12/1424剂量水平选择的方法（1）半数致死量法（LD50法）试验设计原剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法根据药代动力学的结果，参照最大有效安全浓度（MCD），大鼠3个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别采用大鼠的1.0、

3.3~6.6和10~20MCD；狗一般可采用大鼠一半左右的剂量。2022/12/1425剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法（4）最大耐受量法（MTD法）

用大鼠急性毒性的最大无症状剂量，即一个最大耐受量（1MTD）、1/3MTD、1/10MTD分别作为大鼠长期毒性试验的三个剂量，狗和猴可采用大鼠一半左右的剂量。2022/12/1426剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法（4）最大耐受量法（MTD法）（5）临床拟用剂量法（ACD法）根据同类型药物或国外资料或临床拟用剂量推算，一般3个月长期毒性试验时，大鼠采用50-100倍、25-50倍和10-20倍临床剂量，狗采用30-50倍、15-25倍和5-10倍临床剂量，猴可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量进行试验。2022/12/1427剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法（4）最大耐受量法（MTD法）（5）临床拟用剂量法（ACD法）（6）等效剂量法2022/12/1428剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则不同动物的剂量折算系数

动物种属小鼠大鼠豚鼠兔猫猴狗人标准K(剂量折算系数)1712.327.529.764124388体重K(kg体重剂量折算系数)10.710.620.370.300.320.210.11任何R(动物体型系数)0.0590.090.0990.0930.0820.1110.1040.1体重W(标准体重kg)0.020.20.41.5241270注：有些资料记载的动物体型系数（R）为此表中R值的1000倍，如小鼠R为59，大鼠R为90，这不影响药物剂量的折算。2022/12/1429不同动物的剂量折算系数动物种属对于标准体重的动物：

KA，KB，RA，RB值由上表查找。2022/12/1430对于标准体重的动物：KA，KB，RA，RB值由上表查找。对于任何体重的动物：

式中DB、dB分别是欲计算的B种动物的每只剂量及公斤体重剂量，DA、dA分别是已知A种动物的每只剂量及公斤体重剂量，WA、WB是已知动物体重，RA、RB是体型系数，可由上表查得。2022/12/1431对于任何体重的动物：式中DB、dB分别是欲计算的B种动剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法（4）最大耐受量法（MTD法）（5）临床拟用剂量法（ACD法）（6）等效剂量法2022/12/1432剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则五、限度试验试验设计原则及方法

关于基本无毒或低毒的药物(如许多新药及食品添加剂)应如何选择剂量的问题，也就是剂量的试验限度问题。

我国药政部门规定，如小鼠急性毒性的口服给药剂量大于5g/kg，注射给药剂量大于2g/kg仍未产生毒性反应和死亡或仅个别动物有毒性反应时，可考虑只做一个高于临床拟用剂量50倍(狗用30倍)的剂量组。2022/12/1433五、限度试验试验设计原则及方法关于基本无毒或低毒的药物(如五、限度试验

经济合作与开发组织（OECD）提出如果一种化合物以1000mg/kg的剂量，按规定期限连续给药，不产生任何可观察到的毒性反应，而且根据结构相关药物的已有资料，估计不会产生毒性的话，就不需要再用三个剂量来进行试验，除非预期临床需要更高的剂量。

试验设计原则及方法2022/12/1434五、限度试验经济合作与开发组织（OECD）提出六、给药方法给药途径尽量与预期临床使用的途径相一致。临床用药途径为静脉或肌注时，3个月及以上的试验，大鼠给药可用腹腔或皮下注射代替。采用灌胃给药的方式可将供试药物制成一种溶液或混悬液，但必须注意给药容量不应超过1~2ml/100g体重/天。试验设计原则及方法2022/12/1435六、给药方法给药途径尽量与预期临床使用的途径相一致。试验设计六、给药方法长期毒性试验一般均强调每天给药，每周必须给药7天。对那些在体内代谢特别快的药物，还可以考虑增加给药频率；对那些在体内滞留时间较长的药物，最好参考血药浓度制定给药方案。长期毒性试验必须每周称一次体重，以调整给药剂量。试验设计原则及方法2022/12/1436六、给药方法长期毒性试验一般均强调每天给药，每周必须给药7七、观察及测定指标药物的长期毒性试验基本上可通过对实验动物的体格检查，日常观察，食耗及饮水量，体重和器官重量，血液学指标，心电图描记，尿液分析，临床生化检验及病理组织学研究加以确认。在整个研究期间至少应每天或每两天作一次详细的观察。长期毒性试验必须留1/3的动物做恢复期的观察试验，其观察期的时间一般不超过28天。试验设计原则及方法2022/12/1437七、观察及测定指标药物的长期毒性试验基本上可通过对实验动物的（一）

日常观察

1.一般内容—一切可以反映动物生活情况变化的各种迹象实验动物被毛、皮肤、眼睛、粘膜、孔道（及其分泌物）

、呼吸、循环、自主神经系统、躯体和肢体活动情况以及精神行为对动物粪便的量、色泽和内含物、散失的食物，饮水瓶中残余的水所有出现的症状都必须记录在案。如果发现动物死亡，必须尽可能快地进行尸体剖检，以减少组织自溶。观察及测定指标-12022/12/1438（一）日常观察1.一般内容—一切可以反映动物生活情况（一）

日常观察

1.一般内容2.生长率3.食耗单位体重增长的食物需求，用来评价给药对食欲及食物利用率的影响。观察及测定指标-12022/12/1439（一）日常观察1.一般内容观察及测定指标-12022（二

）测定指标

1.器官重量观察及测定指标-22022/12/1440（二）测定指标1.器官重量观察及测定指标-22022（二

）测定指标

1.器官重量2.血液学观察及测定指标-2骨髓涂片是造血系统检查中必不可少的项目2022/12/1441（二）测定指标1.器官重量观察及测定指标-2骨髓涂片（二

）测定指标

1.器官重量2.血液学对于非啮齿类动物一般于整个试验周期中每隔1.5~2个月采血测定一次指标；对于啮齿类动物，当实验周期为6个月时，于试验中期、未期及恢复期分别剖杀动物（1/4、2/4、1/4）进行各项检查；当实验周期为3个月时，于试验未期及恢复期分别剖杀动物（2/3、1/3）进行各项检查观察及测定指标-22022/12/1442（二）测定指标1.器官重量观察及测定指标-22022（二

）测定指标

1.器官重量2.血液学3.血液生化学观察及测定指标-22022/12/1443（二）测定指标1.器官重量观察及测定指标-22022（二

）测定指标

1.器官重量2.血液学3.血液生化学观察及测定指标-22022/12/1444（二）测定指标1.器官重量观察及测定指标-22022（二

）测定指标

1.器官重量2.血液学3.血液生化学4.尿液分析指标观察及测定指标-22022/12/1445（二）测定指标1.器官重量观察及测定指标-22022（二

）测定指标

1.器官重量2.血液学3.血液生化学4.尿液分析指标5.病理学检测指标观察及测定指标-22022/12/1446（二）测定指标1.器官重量观察及测定指标-22022长期毒性试验中进行病理组织学检查的组织或器官

脑（大脑、小脑、脑干）

垂体

甲状腺

食管

胃

肝脏

肾脏

脾脏

气管

主动脉

附睾

卵巢

前列腺

坐骨神经

眼（眼科检查发现异常时）＊

给药局部

淋巴结

脊髓

胸腺

甲状旁腺

唾液腺

小肠和大肠

胆囊＊

肾上腺

胰腺

肺

心脏

睾丸

子宫

乳腺

膀胱

视神经＊

骨髓注：＊为啮齿类动物可不进行组织病理学检查的组织或器官2022/12/1447长期毒性试验中进行病理组织学检查的组织或器官脑（大脑、小脑（三

）指标选择中应考虑问题

1.长期毒性试验中观察、检查指标分类一般性指标不同类型药物各自必须观察的指标个别药物需要特殊观察研究的观察及测定指标-32022/12/1448（三）指标选择中应考虑问题1.长期毒性试验中观察、检（三

）指标选择中应考虑问题

2.长期毒性试验中观察、检查指标选择原则指标的广谱性和针对性的结合指标的器官特异性与动物种属差异性的关系指标的规范化和个体化的关系观察及测定指标-32022/12/1449（三）指标选择中应考虑问题2.长期毒性试验中观察、检八、恢复期观察

最后一次给药物后24小时，每组活杀部分动物检测上述各项指标，留下1/3-1/4动物进行恢复期观察。观察期一般不超过28天，而后再活杀检查上述所有指标，以了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟性毒性反应。除不给药物外，其他观察内容与给药期间相同。

试验设计原则及方法2022/12/1450八、恢复期观察最后一次给药物后24小时，每组活本章学习要点长期毒性试验的概念及意义长期毒性试验的总原则蓄积作用我国药政部门对长期毒性试验动物数及给药期限的要求长期毒性试验的剂量水平的选择基本原则及具体方法限度试验长期毒性试验时指标选择时应注意问题恢复期观察2022/12/1451本章学习要点长期毒性试验的概念及意义2022/12/1251第十五章长期毒性作用及其试验方法

long-termtoxicityimpactandtestmethod

2022/12/1452第十五章long-termtoxicityimpact第一节

基本概念和目的2022/12/1453第一节

基本概念和目的2022/12/122

长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。一、定义基本概念和目的2022/12/1454长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大剂量的药长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的

急性毒性试验：24小时内单次或多次大剂量给予某药所出现的有害作用；机体（人或动物）一性大剂量接受某药后所产生的快速而剧烈的中毒反应。

长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。2022/12/1455长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的急1.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的

急性毒性试验为一次性给药或24小时内多次给药；

长期毒性试验为连续多日接触一定剂量给药，给药期限为临床用药的3-4倍时间。

对长期毒性试验各国之间无统一的时间规定。2022/12/14561.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：1.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的2.给药的剂量范围不同。

急性毒性试验为一次性大剂量给药

长期毒性试验为低剂量长期积累2022/12/14571.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：1.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：基本概念和目的2.给药的剂量范围不同。3.观察毒效应不同。

急性毒性试验通常观察以死亡为效应的质反应；

长期毒性试验以量反应为指标，毒效应是从量变到质变逐渐变化的过程。2022/12/14581.给药的期限不同。长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：蓄积作用(accumulationaction)

药物进入机体后，机体具有对药物进行代谢、转化及排泄的功能，最终将其排出体外。但当较长时间连续、反复给药，或者说给药的时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力时，出现药物进入机体的速度(或总量)超过排除的速度(或总量)的现象，这时药物就可能在体内逐渐增加并贮存起来，也就是说出现了蓄积作用。

基本概念和目的2022/12/1459蓄积作用(accumulationaction)基本概念蓄积作用(accumulationaction)作用量积蓄—为可用化学方法检测出。功能性蓄积—（药物或其代谢物）不一定能用化学手段检测出来，但却有慢性毒性症状出现；或者说由于贮存在体内的药物或其代谢产物的量极微而现有的方法尚不足以测出，但由于多次接触引起轻微损害的累积而出现慢性毒性症状。基本概念和目的2022/12/1460蓄积作用(accumulationaction)基本概念二、目的与意义观察在试验动物长期重复给药的情况下，了解药物有无蓄积作用，试验动物能否产生耐受性，试验动物会出现哪些毒性反应，其剂量效应关系如何，涉及哪些组织，主要靶器官是什么，损害的性质和程度如何，损害是否可逆等；观察在给试验动物长期重复给药的情况下，初步估计不出现毒性作用的最大耐受量和出现毒性作用的最小剂量，为拟定人用药的安全剂量提供参考。基本概念和目的2022/12/1461二、目的与意义观察在试验动物长期重复给药的情况下，了解药物有第二节

试验设计原则及方法2022/12/1462第二节

试验设计原则及方法2022/12/1一、一般原则和要求1.二种动物：啮齿类（大鼠）+非啮齿（比格犬）2.三个剂量：高、中、低三个档次，高剂量组充分反映药物的毒性，低剂量组不出现毒性反应。3.至少4组：溶剂(或赋型剂)对照组或已知药物毒性对照组。4.给药途径应与临床拟用途径相一致。5.符合《中华人民共和国药品管理法》，执行“药物非临床研究质量管理规范”。试验设计原则及方法2022/12/1463一、一般原则和要求1.二种动物：啮齿类（大鼠）+非啮齿（试验设计原则及方法

一般的观点是以药政部门的技术要求规范为核心，同时兼顾给药时限和给药剂量这两个重要因素，对整个长期毒性试验做一个较为合理的安排和设计，力争高效率、全面地了解药物长期给药所造成的有害反应及量-效关系。2022/12/1464试验设计原则及方法一般的观点是以药政部门的技术要求规二、实验动物

1.

种类及品系

首先考虑急性毒性试验业已证明的、对药物敏感的动物或品系。其次考虑受试动物的易获得性

在现阶段，选择易得、实验室易于饲养管理、饮食习性与人接近或吃一般的食物就可以正常生存的常规动物。我国规定：两种动物，一种为啮齿类，首选大鼠，另一种非啮齿类，首选狗。试验设计原则及方法2022/12/1465二、实验动物1.种类及品系试验设计原则及方法2022/12022/12/14662022/12/1215二、实验动物

1.

种类及品系2.起始月（周）龄、原则：选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物大鼠：6~9周；可降至5周；犬：6~12月龄；杂种犬最高不超过5年起始体重应在体重均值±20%内试验设计原则及方法2022/12/1467二、实验动物1.种类及品系试验设计原则及方法2022/1二、实验动物

1.

种类及品系2.起始月（周）龄3.性别及数量敏感动物、雌雄兼顾大鼠雌雄各10~30只；Beagle犬或猴雌、雄各3～6只试验设计原则及方法2022/12/1468二、实验动物1.种类及品系试验设计原则及方法2022/1二、实验动物

1.

种类及品系2.起始月（周）龄3.性别及数量4.饲养管理

动物饲养室内温度、湿度、光照、通风条件；动物饮水质量及饲料配方等；动物笼具等。严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素。试验设计原则及方法2022/12/1469二、实验动物1.种类及品系试验设计原则及方法2022/1三、给药期限试验设计原则及方法与拟定的临床疗程长短、临床适应症、用药人群相关，应充分考虑预期临床的实际疗程。原则上取决于临床拟定的用药时间，我国要求长期毒性试验的给药期限为临床疗程的3~4倍时间。创新药品试验周期应不少于90天；超过180天的新药可以在试验开始90天后，同时进行I期临床试验。2022/12/1470三、给药期限试验设计原则及方法与拟定的临床疗程长短、临床适应表15-1我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定临床拟用毒性试验期限给药时间啮齿类动物非啮齿类动物﹤5天

2周2周﹤2周

1月1月

2~4周3月3月

1~3月6月6月

﹥3月

6月9月

试验设计原则及方法2022/12/1471表15-1我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的四、剂量水平的选择

三个剂量组是必不可少的：高剂量应足以引起明显的毒性反应，但死亡率应控制在20%以内；低剂量应不引起毒性作用，原则上应高于同种动物药效的有效剂量（一般为动物有效剂量或临床治疗量的2~3倍）；为表明毒性作用的量—效关系，在上述两个剂量之间插入一个（或多个）中间剂量。试验设计原则及方法中剂量按计算2022/12/1472四、剂量水平的选择三个剂量组是必不可少的：试验设计原则及方四、剂量水平的选择

在选择合适的剂量时还应考虑到：药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有可能出现毒性作用；药物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容物有亲和性的药物，则应酌情增加剂量。

试验设计原则及方法2022/12/1473四、剂量水平的选择在选择合适的剂量时还应考虑到：试验设计原剂量水平选择的方法（1）半数致死量法（LD50法）

一般在大鼠3个月长期毒性试验中，高、中、低三个剂量可分别采用约LD50的1/10、1/50和1/100剂量，狗各剂量组可采用大鼠相应各组的一半剂量。试验设计原则及方法2022/12/1474剂量水平选择的方法（1）半数致死量法（LD50法）一剂量水平选择的方法（1）半数致死量法（LD50法）试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法90天重复给药试验180天或更长期重复给药试验蓄积毒性试验和/或7天短期重复给药试验急性毒性试验2022/12/1475剂量水平选择的方法（1）半数致死量法（LD50法）试验设计原剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法根据药代动力学的结果，参照最大有效安全浓度（MCD），大鼠3个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别采用大鼠的1.0、

3.3~6.6和10~20MCD；狗一般可采用大鼠一半左右的剂量。2022/12/1476剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法（4）最大耐受量法（MTD法）

用大鼠急性毒性的最大无症状剂量，即一个最大耐受量（1MTD）、1/3MTD、1/10MTD分别作为大鼠长期毒性试验的三个剂量，狗和猴可采用大鼠一半左右的剂量。2022/12/1477剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法（4）最大耐受量法（MTD法）（5）临床拟用剂量法（ACD法）根据同类型药物或国外资料或临床拟用剂量推算，一般3个月长期毒性试验时，大鼠采用50-100倍、25-50倍和10-20倍临床剂量，狗采用30-50倍、15-25倍和5-10倍临床剂量，猴可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量进行试验。2022/12/1478剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法（4）最大耐受量法（MTD法）（5）临床拟用剂量法（ACD法）（6）等效剂量法2022/12/1479剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则不同动物的剂量折算系数

动物种属小鼠大鼠豚鼠兔猫猴狗人标准K(剂量折算系数)1712.327.529.764124388体重K(kg体重剂量折算系数)10.710.620.370.300.320.210.11任何R(动物体型系数)0.0590.090.0990.0930.0820.1110.1040.1体重W(标准体重kg)0.020.20.41.5241270注：有些资料记载的动物体型系数（R）为此表中R值的1000倍，如小鼠R为59，大鼠R为90，这不影响药物剂量的折算。2022/12/1480不同动物的剂量折算系数动物种属对于标准体重的动物：

KA，KB，RA，RB值由上表查找。2022/12/1481对于标准体重的动物：KA，KB，RA，RB值由上表查找。对于任何体重的动物：

式中DB、dB分别是欲计算的B种动物的每只剂量及公斤体重剂量，DA、dA分别是已知A种动物的每只剂量及公斤体重剂量，WA、WB是已知动物体重，RA、RB是体型系数，可由上表查得。2022/12/1482对于任何体重的动物：式中DB、dB分别是欲计算的B种动剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则及方法（2）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（MBS）法（4）最大耐受量法（MTD法）（5）临床拟用剂量法（ACD法）（6）等效剂量法2022/12/1483剂量水平选择的方法（1）半数致死量（LD50）法试验设计原则五、限度试验试验设计原则及方法

关于基本无毒或低毒的药物(如许多新药及食品添加剂)应如何选择剂量的问题，也就是剂量的试验限度问题。

我国药政部门规定，如小鼠急性毒性的口服给药剂量大于5g/kg，注射给药剂量大于2g/kg仍未产生毒性反应和死亡或仅个别动物有毒性反应时，可考虑只做一个高于临床拟用剂量50倍(狗用30倍)的剂量组。2022/12/1484五、限度试验试验设计原则及方法关于基本无毒或低毒的药物(如五、限度试验

经济合作与开发组织（OECD）提出如果一种化合物以1000mg/kg的剂量，按规定期限连续给药，不产生任何可观察到的毒性反应，而且根据结构相关药物的已有资料，估计不会产生毒性的话，就不需要再用三个剂量来进行试验，除非预期临床需要更高的剂量。

试验设计原则及方法2022/12/1485五、限度试验经济合作与开发组织（OECD）提出六、给药方法给药途径尽量与预期临床使用的途径相一致。临床用药途径为静脉或肌注时，3个月及以上的试验，大鼠给药可用腹腔或皮下注射代替。采用灌胃给药的方式可将供试药物制成一种溶液或混悬液，但必须注意给药容量不应超过1~2ml/100g体重/天。试验设计原则及方法2022/12/1486六、给药方法给药途径尽量与预期临床使用的途径相一致。试验设计六、给药方法长期毒性试验一般均强调每天给药，每周必须给药7天。对那些在体内代谢特别快的药物，还可以考虑增加给药频率；对那些在体内滞留时间较长的药物，最好参考血药浓度制定给药方案。长期毒性试验必须每周称一次体重，以调整给药剂量。试验设计原则及方法2022/12/1487六、给药方法长期毒性试验一般均强调每天给药，每周必须给药7七、观察及测定指标药物的长期毒性试验基本上可通过对实验动物的体格检查，日常观察，食耗及饮水量，体重和器官重量，血液学指标，心电图描记，尿液分析，临床生化检验及病理组织学研究加以确认。在整个研究期间至少应每天或每两天作一次详细的观察。长期毒性试验必须留1/3的动物做恢复期的观察试验，其观察期的时间一般不超过28天。试验设计原则及方法2022/12/1488七、观察及测定指标药物的长期毒性试验基本上可通过对实验动物的（一）

日常观察

1.一般内容—一切可以反映动物生活情况变化的各种迹象实验动物被毛、皮肤、眼睛、粘膜、孔道（及其分泌物）

、呼吸、循环、自主神经系统、躯体和肢体活动情况以及精神行为对动物粪便的量、色泽和内含物、散失的食物，饮水瓶中残余的水所有出现的症状都必须记录在案。如果发现动物死亡，必须尽可能快地进行尸体剖检，以减少组织自溶。观察及测定指标-12022/12/1489（一）日常观察1.一般内容—一切可以反映动物生活情况（一）

日常观察