药物分析芳酸及其酯类药物的分析课件

芳酸及其酯类药物的分析

典型药物鉴别试验含量测定体内药分

返回主目录练习与思考杂质检查第六章基本要求芳酸及其酯类药物的分析典型药物鉴1基本要求

一、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉其他方酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。。三、了解本类药物的体内分析方法。返回基本要求一、掌握水扬酸类、苯甲酸2

一、水扬酸类

（一）典型药物结构第一节典型药物分类与理化性质水杨酸（salycylicacid）第一节典型药物分类与理化性质水杨酸（saly3阿司匹林（aspirin)阿司匹林（aspirin)4

对氨基水杨酸钠（sodiumaminosalicylate)对氨基水杨酸钠5双水杨酯（salsalate)双水杨酯（salsalate)6贝诺酯（benorilate)贝诺酯（benorilate)7

1.酸性

SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)、双水杨酯均有酸性。

2.溶解性:

均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。

3.UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。

4.芳伯氨基和酚羟基特性：5.水解特性：ASA、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸,对氨基水杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。（二）主要理化性质1.酸性SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.48

（一）典型药物结构苯甲酸及其钠盐(benzoicacid）二、苯甲酸类（一）典型药物结构苯甲酸及其钠盐(benzoicaci9羟苯乙酯(ethylparoben)羟苯乙酯(ethylparoben)10丙磺舒(probenecid)丙磺舒(probenecid)11甲芬那酸(mefenamicacid)甲芬那酸(mefenamicacid)12（二）主要理化性质

1.溶解性:

均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。

2.UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。

3.具有酚羟基特性：

4.分解反应特性：苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解为SO2

5.酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基，可用NaOH直接滴定测定其含量。（二）主要理化性质1.溶解性:均为固体，有一定溶点13三、其他芳酸类

(一)典型药物结构氯贝丁酯（clofibrate）三、其他芳酸类氯贝丁酯（clofibrate）14布洛芬（ibuprofen）布洛芬（ibuprofen）15

(二)主要理化性质

1.溶解性：水中不溶，有机溶剂溶解，氯贝丁酯为液体；布洛芬为固体，有一定熔点。

2.UV和IR特征吸收光谱：基于分子结构中具有苯环和特征基团。返回(二)主要理化性质返16

一、与三氯化铁反应

含有酚羟基药物可与FeCl3反应；能与FeCl3反应不一定含酚羟基.第二节鉴别试验Ar-OH+FeCl3紫堇色铁配位化合物pH4~6一、与三氯化铁反应第二节鉴别试验Ar-OH+171.直接反应

SA在中性或弱酸性条件下，与FeCl3生成紫堇色配位化合物赭色苯甲酸（中性或碱性水溶液）+FeCl31.直接反应赭色苯甲酸（中性或碱性水溶液）+FeCl18

丙磺舒与NaOH成钠盐后，在pH5.0~6.0中与FeCl3生成米黄色布洛芬与高氯酸羟胺，N，N’-双环基己羧二亚胺及高氯酸铁反应，即显紫色[JP（14）方法]。基于分子中-COOH的结构。2.水解或分解后与三氯化铁反应ASA水解成SA后与FeCl3

反应，成紫堇色丙磺舒与NaOH成钠盐后，在pH5.0~6.0中19二、重氮化-偶合反应

凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。二、重氮化-偶合反应20

1.直接反应

对氨基水杨酸钠

2.水解后反应

贝诺酯具有潜在芳伯氨基

3.甲芬那酸与对-硝基苯重氮盐在NaOH介质中偶合产生橙红色。1.直接反应对氨基水杨酸钠21

+K2Cr2O7

深蓝色

棕绿色甲芬那酸+H2SO4

黄色

绿色荧光[JP(14)△三、氧化反应△三、氧化反应22

1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp为156℃～161℃。

2.双水杨酯水解生成SA：SA的mp为158℃。

3.氯贝丁酯碱水解后与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，在弱酸条件下再与三氯化铁反应生成紫色的异羟肟酸铁。四、水解反应1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp为23

1.苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物，可用于鉴别。

2.丙磺舒与NaOH熔融分解成Na2SO3,经硝酸氧化成Na2SO4。

3.丙磺舒加热分解，生成SO2气体，有臭味五、分解产物反应五、分解产物反应24

1.测定λmax；λmin。

例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备0.25mg/ml；λmax；265nm,273nm;λmin。245nm,271nm。

2.在λmax处测定一定浓度供试液的吸收度A。

例如：羟苯乙酯，5μg/mlλmax=295nm;A=0.48

3.在λmax处测定供试液的百分吸收系数。

例如：贝诺酯在λmax=240nm;E1%1cm=730~760

六、紫外吸收光谱法六、紫外吸收光谱法25

4.在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度比值法）

例如：对氨基水杨酸钠10μg/ml;A265/A299=1.56~1.56

再例如：甲芬那酸14μg/ml;A278~280/A348~352=1.15~1.30

4.在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收26七、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱3700~2900cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H七、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱3700~2900cm27返回3700~2900cm-1N-H、O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱返回3700~2900cm-1N-H、O-H128第三节特殊杂质检查一、ASA中特殊杂质的检查

1.溶液的澄清度

主要检查Na2CO3中不溶物，有苯酚；醋酸苯酯；水杨酸苯酯；乙酰水杨酸苯酯。ASA溶解因此ASA溶液应澄清。

2.游离水杨酸检查

利用SA可与FeCl3呈色，用比色法检查。

3.易炭化物检查

主要检查ASA中能被硫酸炭化显色的低分子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。第三节特殊杂质检查一、ASA中特殊杂质的检查29

主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚。间氨基酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要严格控制。

双向滴定法：利用间氨基酚溶于乙醚，取3.0g样品用乙醚提取0.02mol/LHCl测定方法滴定V＜0.3ml。

HPLC法：采用内标法，以磺胺作内标（USP）

二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查30THANKYOUSUCCESS2022/12/1231可编辑THANKYOUSUCCESS2022/12/11三、羟苯乙酯中有关物质的检查BP收载的方法，由于杂质的结构不清，故采用TLC法中的供试品自身对照法：固定相：GF254C18化学键合硅胶展开剂：甲醇-水-冰醋酸反相TLC法三、羟苯乙酯中有关物质的检查BP收载的方法，由于杂质的结构不32

甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在Cu的催化下缩合而成，因此成品药物中要检查铜盐及有关物质。分光光度法：利用Cu2+与Na-DDC呈色后测定A

1.铜盐检查法

原子吸收分光光度法：BP（2000）

2.有关物质的检查主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲酸各国药典均采用TLC法中的自身高低浓度对照法。四、甲芬那酸中特殊杂质的检查四、甲芬那酸中特殊杂质的检查33五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查

主要检查成品药物中残留的对氯酚原料和挥发性杂质GC-FID法HPLC法：以对-羟乙基酚作内标，用正相HPLC2.挥发性杂质的检查方法

GC法1.对氯酚检查返回五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查

主要检查成品药物中残留的对氯酚34

一、酸碱滴定法（一）直接滴定法

基于本类药物-COOH；可用碱直接滴定，如ASA的含量测定，其原理如下：第四节含量测定1.原理：2.条件：在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为1:1。3.应用：多国药典用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测定；USP和BP还用于甲芬那酸的测定。一、酸碱滴定法第四节含量测定1.原理：2.条35（二）水解后剩余滴定法

1.ASA含量测定原理：条件：水溶液（二）水解后剩余滴定法原理：条件：水溶液36具体试验：I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相当于ASA消耗

硫酸的ml数ASA%=(Vo–V)×F×T/W×100%具体试验：I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相当于A372.羟苯乙酯的含量测定2.羟苯乙酯的含量测定38（三）两步滴定法

1.ASA片的含量测定第一步为中和ASA+NaOHASA-Na+H2O水解产物SA+NaOHSA-Na+H2O酸性稳定剂+NaOH中性盐第二步为水解与测定（三）两步滴定法

1.ASA片的含量测定第一步为中和AS39

2.氯贝丁酯含量测定

第一步：中和酸性杂质

第二步：水解与测定2.氯贝丁酯含量测定40二、亚硝酸钠滴定法

对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在HCl中与NaNO2发生重氮化反应Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O

因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此法在下章重点讨论。二、亚硝酸钠滴定法对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在41三、双相滴定法

是指在水相和有机相中的滴定。如苯甲酸钠的含量测定：

生成的苯甲酸不溶于水，终点pH突跃不明显，不易观察。苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定中产生的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终点明显。三、双相滴定法

是指在水相和有机相42（一）直接紫外分光光度法

丙磺舒片的测定：Ch.P(2000)在HCl中，采用百分吸收系数法。

BP(1998)再盐酸-乙醇,采用百分吸收系数法.

USP(24)用氯仿提取后，采用对照品比较法。四、紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法四、紫外分光光度法43（二）离子交换-紫外分光光度法

氯贝丁酯及其制剂Ch.P(2000)采用酸碱滴定法；当含有酸性杂质对氯酚时，可采用强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后，在甲醇溶液中，226nm波长处，采用对照品比较法。

具体计算：W×1000×1/100×1/100=Cu(μg/ml)Au/As=Cu/CCu=C(Au/As)W(mg)=10×Cu=10×C(Au/As)（二）离子交换-紫外分光光度法氯贝丁酯及其制剂44（三）柱分配色谱-紫外分光光度法

USP(24)采用此法同时测定ASA胶囊中ASA和SA。

1.SA的限量测定

色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。（三）柱分配色谱-紫外分光光度法USP45供试品液：CHCl3液洗脱液1：CHCl3洗脱液2：HAC-

乙醚硅藻土，FeCl3-尿素玻璃棉硅藻土，Na2CO3供试品液：CHCl3-HCl液洗脱液1：HAC-CHCl3

(1:10)10ml洗脱液2：HAC-CHCl3(1:100)85ml

1-杂质先洗脱2-SA后洗脱max=306nmAu＜As1-杂质先洗脱2-ASA后洗脱max=280nmASA(mg)=C(Au/As)供试品液：CHCl3液洗脱液1：CHCl3硅藻土，FeCl346

2.ASA的含量测定色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。2.ASA的含量测定47

Ch.P(2000)ASA的胶囊剂的含量测定采用此法。

USP（24）ASA片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。五、HPLC法五、HPLC法48（一）ASA栓剂的含量测定色谱条件：色谱柱ODSC18；流动相为甲醇：0.1%二乙胺：HAC(40:60:4);检测波长280nm；内标物为咖啡因。系统适用性试验：

n＞2000;ASA与SA与内标物的R＞1.5具体计算：

Cx=Rx/RR×CRW(g)×1/50×2/50=CxW测=1250×Cx标示量%=W测/W×W平/标示量×100%

=Cx×1250×W平/W×标示量×100%（一）ASA栓剂的含量测定色谱条件：色谱柱ODSC18；流动49

色谱条件：色谱柱苯基硅胶柱；流动相为NaH2PO3

0.1%HAC液-0.1%HAC乙腈液(50:50);检测波长254nm。

系统适用性试验：

n＞3900;T＞2.3;重复性RSD＜1.5%

具体计算：（二）丙磺舒原料的含量测定W×1/100=Cu(mg/ml);Cu=Au/As×C

供试品中丙磺舒(Mg)=100C(Au/As)返回色谱条件：色谱柱苯基硅胶柱；流动相为NaH2PO3050

一、血清中ASA和SA浓度的HPLC法

色谱条件：色谱柱为ODS-C18(150mm×4.6mm,5μm)

流动相为甲醇-水-正丁醇(30:20:1)检测波长为237nm；内标物为苯甲酸。

血清样品预处理

血清100μl+HClO450μl+不同浓度ASA和SA+内标液涡旋混合2min离心5min取上清液20μl进样。

第五节体内药物分析一、血清中ASA和SA浓度的HPLC法第五节体内药物51回归方程：以峰高比（H标/H内）对浓度回归ASA的回归方程：Y=5.8×10-3+5.29×10-2Xr=0.9996SA的回归方程：Y=6.0×10-3+8.33×10-2Xr=0.9981ASA和SA的线性范围分别为：1～20μg/ml;2～30μg/ml回收率：空白血清+五种不同浓度测定，ASA为96.0%～106.0%;SA为92.0%～119.5%;（五种不同浓度均应在线性范围内）回归方程：以峰高比（H标/H内）对浓度回归52色谱条件：色谱柱为LiChrospher100RP(125mm×4mm,5μm)

流动相为25%乙腈溶液-醋酸缓冲溶液梯度洗脱。检测波长为254nm；内标物为依他尼酸。尿样品预处理：C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后用0.5ml蒸馏水活化。2.0ml尿样+内标300μl(10μg/ml)上柱1.0ml水洗脱生物杂质再用甲醇0.5ml洗脱保留在柱上的丙磺舒和内标。洗脱液0.45μm浸滤膜滤过，取5μl直接进样分析。

二、尿中丙磺舒的固相萃取净化-HPLC法(运动员违禁药物)色谱条件：色谱柱为LiChrospher100RP(125m53线性关系和回收率：

取空白尿样2.0ml+不同浓度丙磺舒+内标液按上述方法分析(浓度范围为0.1μg/ml～100μg/ml);A丙/A内对C丙回归。回收率：丙磺舒为100%±3%(n=14)；内标为101%±3%(n=12)；人尿样测定：丙磺舒(单剂量500mg)尿排泄药-时曲线(见P136)线性关系和回收率：54

三、HPLC法测定人血浆中布洛芬含量

色谱条件：色谱柱为Shim-packCLC-ODS(150mm×6mm,10μm)

预柱为YWG-C18；流动相为甲醇-20mol/L磷酸二氢钾冲溶液(70:30,pH=4.0);流速为1.0ml/min;

检测波长为221nm；内标物为肉桂酸。

样品预处理：取肝素抗凝血浆0。24ml+内标液+甲醇0.5ml,振荡混匀，离心(1000r/min)15min,取上清液10μl直接进样分析。布洛芬和肉桂酸tR为5.15和2.85min。三、HPLC法测定人血浆中布洛芬含量55回归方程：以对照品与内标的峰高比对浓度回归，其回归方程为：

Y=4.05×10-2C–2.0×10-3,r=0.9999。回收率测定：空白血浆+布洛芬对照品高、中、低三种浓度，按样品处理项下测定，测得平均回收率为99.2±1.6%。精密度：日内精密度为RSD＝1.8%；日间精密度为2.8%。回归方程：以对照品与内标的峰高比对浓度回归，其回归方程为：56

1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0h自肘静脉取血1.5ml，肝素抗凝，按“样品处理方法”项下操作，求算血药浓度，结果见P137表6－1。

试验结果：

1.血浆用甲醇除蛋白后，直接进样，经预柱净化，再进分析柱

回收率高，分析速度快(6min完成)，分离效果好。2.口服一次后Tmax=30min～90min；体内维持4h～6h。与文献报道的结果一致。3.本法可用于临床治疗药物浓度检测和药代动力学研究。

人血浆样品测定：受试者8人；给药剂量600mg，给药后0.5，0.75返回1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，6.057练习与思考[A型题]

1．阿司匹林中检查的特殊杂质是A.水杨醛B.砷盐C.水杨酸D.苯甲酸E.苯酚2．对氨基水杨酸钠中检查的特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.水杨酸D.苯甲酸E.苯酚练习与思考[A型题]1．阿司匹林中检查58[B型题]FeCl3反应B.水解后FeCl3反应C.AgNO3反应D.重氮化-偶合反应E.麦芽酚反应1.阿司匹林2.水杨酸3.SMZ4.苯甲酸钠BADA[B型题]FeCl3反应B.水解后FeCl3反应59A.直接酸碱滴定法B.两步酸碱滴定法

C.亚硝酸钠溶液滴定法

D.HPLC法E.双相滴定法

5.苯甲酸钠

6.阿司匹林

7.阿司匹林栓剂

8.对氨基水杨酸钠

EBDCA.直接酸碱滴定法B.两步酸碱滴定法

6061写在最后成功的基础在于好的学习习惯Thefoundationofsuccessliesingoodhabits61写在最后成功的基础在于好的学习习惯结束语当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的，所以不要放弃，坚持就是正确的。WhenYouDoYourBest,FailureIsGreat,SoDon'TGiveUp,StickToTheEnd演讲人：XXXXXX

时间：XX年XX月XX日

结束语62

芳酸及其酯类药物的分析

典型药物鉴别试验含量测定体内药分

返回主目录练习与思考杂质检查第六章基本要求芳酸及其酯类药物的分析典型药物鉴63基本要求

一、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉其他方酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。。三、了解本类药物的体内分析方法。返回基本要求一、掌握水扬酸类、苯甲酸64

一、水扬酸类

（一）典型药物结构第一节典型药物分类与理化性质水杨酸（salycylicacid）第一节典型药物分类与理化性质水杨酸（saly65阿司匹林（aspirin)阿司匹林（aspirin)66

对氨基水杨酸钠（sodiumaminosalicylate)对氨基水杨酸钠67双水杨酯（salsalate)双水杨酯（salsalate)68贝诺酯（benorilate)贝诺酯（benorilate)69

1.酸性

SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)、双水杨酯均有酸性。

2.溶解性:

均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。

3.UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。

4.芳伯氨基和酚羟基特性：5.水解特性：ASA、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸,对氨基水杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。（二）主要理化性质1.酸性SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.470

（一）典型药物结构苯甲酸及其钠盐(benzoicacid）二、苯甲酸类（一）典型药物结构苯甲酸及其钠盐(benzoicaci71羟苯乙酯(ethylparoben)羟苯乙酯(ethylparoben)72丙磺舒(probenecid)丙磺舒(probenecid)73甲芬那酸(mefenamicacid)甲芬那酸(mefenamicacid)74（二）主要理化性质

1.溶解性:

均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。

2.UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。

3.具有酚羟基特性：

4.分解反应特性：苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解为SO2

5.酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基，可用NaOH直接滴定测定其含量。（二）主要理化性质1.溶解性:均为固体，有一定溶点75三、其他芳酸类

(一)典型药物结构氯贝丁酯（clofibrate）三、其他芳酸类氯贝丁酯（clofibrate）76布洛芬（ibuprofen）布洛芬（ibuprofen）77

(二)主要理化性质

1.溶解性：水中不溶，有机溶剂溶解，氯贝丁酯为液体；布洛芬为固体，有一定熔点。

2.UV和IR特征吸收光谱：基于分子结构中具有苯环和特征基团。返回(二)主要理化性质返78

一、与三氯化铁反应

含有酚羟基药物可与FeCl3反应；能与FeCl3反应不一定含酚羟基.第二节鉴别试验Ar-OH+FeCl3紫堇色铁配位化合物pH4~6一、与三氯化铁反应第二节鉴别试验Ar-OH+791.直接反应

SA在中性或弱酸性条件下，与FeCl3生成紫堇色配位化合物赭色苯甲酸（中性或碱性水溶液）+FeCl31.直接反应赭色苯甲酸（中性或碱性水溶液）+FeCl80

丙磺舒与NaOH成钠盐后，在pH5.0~6.0中与FeCl3生成米黄色布洛芬与高氯酸羟胺，N，N’-双环基己羧二亚胺及高氯酸铁反应，即显紫色[JP（14）方法]。基于分子中-COOH的结构。2.水解或分解后与三氯化铁反应ASA水解成SA后与FeCl3

反应，成紫堇色丙磺舒与NaOH成钠盐后，在pH5.0~6.0中81二、重氮化-偶合反应

凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。二、重氮化-偶合反应82

1.直接反应

对氨基水杨酸钠

2.水解后反应

贝诺酯具有潜在芳伯氨基

3.甲芬那酸与对-硝基苯重氮盐在NaOH介质中偶合产生橙红色。1.直接反应对氨基水杨酸钠83

+K2Cr2O7

深蓝色

棕绿色甲芬那酸+H2SO4

黄色

绿色荧光[JP(14)△三、氧化反应△三、氧化反应84

1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp为156℃～161℃。

2.双水杨酯水解生成SA：SA的mp为158℃。

3.氯贝丁酯碱水解后与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，在弱酸条件下再与三氯化铁反应生成紫色的异羟肟酸铁。四、水解反应1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp为85

1.苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物，可用于鉴别。

2.丙磺舒与NaOH熔融分解成Na2SO3,经硝酸氧化成Na2SO4。

3.丙磺舒加热分解，生成SO2气体，有臭味五、分解产物反应五、分解产物反应86

1.测定λmax；λmin。

例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备0.25mg/ml；λmax；265nm,273nm;λmin。245nm,271nm。

2.在λmax处测定一定浓度供试液的吸收度A。

例如：羟苯乙酯，5μg/mlλmax=295nm;A=0.48

3.在λmax处测定供试液的百分吸收系数。

例如：贝诺酯在λmax=240nm;E1%1cm=730~760

六、紫外吸收光谱法六、紫外吸收光谱法87

4.在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度比值法）

例如：对氨基水杨酸钠10μg/ml;A265/A299=1.56~1.56

再例如：甲芬那酸14μg/ml;A278~280/A348~352=1.15~1.30

4.在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收88七、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱3700~2900cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H七、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱3700~2900cm89返回3700~2900cm-1N-H、O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱返回3700~2900cm-1N-H、O-H190第三节特殊杂质检查一、ASA中特殊杂质的检查

1.溶液的澄清度

主要检查Na2CO3中不溶物，有苯酚；醋酸苯酯；水杨酸苯酯；乙酰水杨酸苯酯。ASA溶解因此ASA溶液应澄清。

2.游离水杨酸检查

利用SA可与FeCl3呈色，用比色法检查。

3.易炭化物检查

主要检查ASA中能被硫酸炭化显色的低分子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。第三节特殊杂质检查一、ASA中特殊杂质的检查91

主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚。间氨基酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要严格控制。

双向滴定法：利用间氨基酚溶于乙醚，取3.0g样品用乙醚提取0.02mol/LHCl测定方法滴定V＜0.3ml。

HPLC法：采用内标法，以磺胺作内标（USP）

二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查92THANKYOUSUCCESS2022/12/1293可编辑THANKYOUSUCCESS2022/12/11三、羟苯乙酯中有关物质的检查BP收载的方法，由于杂质的结构不清，故采用TLC法中的供试品自身对照法：固定相：GF254C18化学键合硅胶展开剂：甲醇-水-冰醋酸反相TLC法三、羟苯乙酯中有关物质的检查BP收载的方法，由于杂质的结构不94

甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在Cu的催化下缩合而成，因此成品药物中要检查铜盐及有关物质。分光光度法：利用Cu2+与Na-DDC呈色后测定A

1.铜盐检查法

原子吸收分光光度法：BP（2000）

2.有关物质的检查主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲酸各国药典均采用TLC法中的自身高低浓度对照法。四、甲芬那酸中特殊杂质的检查四、甲芬那酸中特殊杂质的检查95五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查

主要检查成品药物中残留的对氯酚原料和挥发性杂质GC-FID法HPLC法：以对-羟乙基酚作内标，用正相HPLC2.挥发性杂质的检查方法

GC法1.对氯酚检查返回五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查

主要检查成品药物中残留的对氯酚96

一、酸碱滴定法（一）直接滴定法

基于本类药物-COOH；可用碱直接滴定，如ASA的含量测定，其原理如下：第四节含量测定1.原理：2.条件：在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为1:1。3.应用：多国药典用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测定；USP和BP还用于甲芬那酸的测定。一、酸碱滴定法第四节含量测定1.原理：2.条97（二）水解后剩余滴定法

1.ASA含量测定原理：条件：水溶液（二）水解后剩余滴定法原理：条件：水溶液98具体试验：I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相当于ASA消耗

硫酸的ml数ASA%=(Vo–V)×F×T/W×100%具体试验：I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相当于A992.羟苯乙酯的含量测定2.羟苯乙酯的含量测定100（三）两步滴定法

1.ASA片的含量测定第一步为中和ASA+NaOHASA-Na+H2O水解产物SA+NaOHSA-Na+H2O酸性稳定剂+NaOH中性盐第二步为水解与测定（三）两步滴定法

1.ASA片的含量测定第一步为中和AS101

2.氯贝丁酯含量测定

第一步：中和酸性杂质

第二步：水解与测定2.氯贝丁酯含量测定102二、亚硝酸钠滴定法

对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在HCl中与NaNO2发生重氮化反应Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O

因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此法在下章重点讨论。二、亚硝酸钠滴定法对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在103三、双相滴定法

是指在水相和有机相中的滴定。如苯甲酸钠的含量测定：

生成的苯甲酸不溶于水，终点pH突跃不明显，不易观察。苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定中产生的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终点明显。三、双相滴定法

是指在水相和有机相104（一）直接紫外分光光度法

丙磺舒片的测定：Ch.P(2000)在HCl中，采用百分吸收系数法。

BP(1998)再盐酸-乙醇,采用百分吸收系数法.

USP(24)用氯仿提取后，采用对照品比较法。四、紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法四、紫外分光光度法105（二）离子交换-紫外分光光度法

氯贝丁酯及其制剂Ch.P(2000)采用酸碱滴定法；当含有酸性杂质对氯酚时，可采用强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后，在甲醇溶液中，226nm波长处，采用对照品比较法。

具体计算：W×1000×1/100×1/100=Cu(μg/ml)Au/As=Cu/CCu=C(Au/As)W(mg)=10×Cu=10×C(Au/As)（二）离子交换-紫外分光光度法氯贝丁酯及其制剂106（三）柱分配色谱-紫外分光光度法

USP(24)采用此法同时测定ASA胶囊中ASA和SA。

1.SA的限量测定

色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。（三）柱分配色谱-紫外分光光度法USP107供试品液：CHCl3液洗脱液1：CHCl3洗脱液2：HAC-

乙醚硅藻土，FeCl3-尿素玻璃棉硅藻土，Na2CO3供试品液：CHCl3-HCl液洗脱液1：HAC-CHCl3

(1:10)10ml洗脱液2：HAC-CHCl3(1:100)85ml

1-杂质先洗脱2-SA后洗脱max=306nmAu＜As1-杂质先洗脱2-ASA后洗脱max=280nmASA(mg)=C(Au/As)供试品液：CHCl3液洗脱液1：CHCl3硅藻土，FeCl3108

2.ASA的含量测定色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。2.ASA的含量测定109

Ch.P(2000)ASA的胶囊剂的含量测定采用此法。

USP（24）ASA片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。五、HPLC法五、HPLC法110（一）ASA栓剂的含量测定色谱条件：色谱柱ODSC18；流动相为甲醇：0.1%二乙胺：HAC(40:60:4);检测波长280nm；内标物为咖啡因。系统适用性试验：

n＞2000;ASA与SA与内标物的R＞1.5具体计算：

Cx=Rx/RR×CRW(g)×1/50×2/50=CxW测=1250×Cx标示量%=W测/W×W平/标示量×100%

=Cx×1250×W平/W×标示量×100%（一）ASA栓剂的含量测定色谱条件：色谱柱ODSC18；流动111

色谱条件：色谱柱苯基硅胶柱；流动相为NaH2PO3

0.1%HAC液-0.1%HAC乙腈液(50:50);检测波长254nm。

系统适用性试验：

n＞3900;T＞2.3;重复性RSD＜1.5%

具体计算：（二）丙磺舒原料的含量测定W×1/100=Cu(mg/ml);Cu=Au/As×C

供试品中丙磺舒(Mg)=100C(Au/As)返回色谱条件：色谱柱苯基硅胶柱；流动相为NaH2PO30112

一、血清中ASA和SA浓度的HPLC法

色谱条件：色谱柱为ODS-C18(150mm×4.6mm,5μm)

流动相为甲醇-水-正丁醇(30:20:1)检测波长为237nm；内标物为苯甲酸。

血清样品预处理

血清100μl+HClO450μl+不同浓度ASA和SA+内标液涡旋混合2min离心5min取上清液20μl进样。

第五节体内药物分析一、血清中ASA和SA浓度的HPLC法第五节体内药物113回归方程：以峰高比（H标/H内）对浓度回归ASA的回归方程：Y=5.8×10-3+5.29×10-2Xr=0.9996SA的回归方程：Y=6.0×10-3+8.33×10-2Xr=0.9981ASA和SA的线性范围分别为：1～20μg/ml;2～30μg/ml回收率：空白血清+五种不同浓度测定，ASA为96.0%～106.0%;SA为92.0%～119.5%;（五种不同浓度均应在线性范围内）回归方程：以峰高比（H标/H内）对浓度回归114色谱条件：色谱柱为LiChrospher100RP(125mm×4mm,5μm)

流动相为25%乙腈溶液-醋酸缓冲溶液梯度洗脱。检测波长为254nm；内标物为依他尼酸。尿样品预处理：C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后用0.5ml蒸馏水活化。2.0ml尿样+内标300μl(10μg/ml)上柱1.0ml水洗脱生物杂质再用甲醇0.5ml洗脱保