DNA重组技术的基本操作程序课件

1.2基因工程的基本操作程序1.2基因工程的1、原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区与RNA聚合酶结合位点启动子终止子启动子：位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。终止子：位于基因尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。原基核因细结胞构编码区：非编码区能转录为mRNA，编码蛋白质不能转录为mRNA，不能编码蛋白质功能1、原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区与RNA聚合酶结2、真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子

外显子

启动子终止子真核细胞基因结构编码区非编码区：外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列2、真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶内原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、______的相同点都由能够编码蛋白质的_______

和具有调控作用的_________组成的3、原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码区原核细胞真核细胞不同点编码区是编码区是间隔都由能够编码蛋白质原核生物的基因表达编码区非编码区非编码区RNA聚合酶mRNA转录翻译启动子终止子基因蛋白质原核生物的基因表达编码区非编码区非编码区RNA聚合酶mRNA真核生物的基因表达编码区非编码区非编码区剪接有关的酶RNA聚合酶mRNA前体mRNA转录剪接翻译启动子终止子基因蛋白质真核生物的基因表达编码区非编码区非编码区剪接有关的酶RNA聚1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定1.2基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受一、目的基因的获取1目的基因主要是编码蛋白质的基因获取目的基因的常用方法：如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因、具有调控作用的因子等。2

1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、利用DNA合成仪用化学方法直接人工合成一、目的基因的获取1目的基因主要是编码蛋白质的基因获取目的基（一）从基因文库中获取目的基因1.基因文库的概念:将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。2.基因文库的种类:基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库（一）从基因文库中获取目的基因1.基因文库的概念:基因文库的构建方法①基因组文库的构建提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶切割一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接重组DNA基因组文库导入受体菌中储存基因文库的构建方法①基因组文库的构建提取某种生物的全部DN②cDNA文库的构建-----反转录法：提取某种生物的mRNA单链DNA双链cDNA片段重组DNA与载体连接cDNA文库反转录酶DNA聚合酶导入受体菌中储存基因文库的构建方法mRNA单链DNA双链DNA②cDNA文库的构建-----反转录法：提取某种生物的m思考？真核生物的基因用反转录法得到的cDNA与原基因相同吗？思考？真核生物的基因用反转录法得到的真核细胞的cDNA的获取编码区非编码区非编码区DNA聚合酶剪接有关的酶RNA聚合酶mRNA前体mRNA单链DNAcDNA反转录酶转录剪接反转录复制启动子终止子基因不含非编码区和内含子真核细胞的cDNA的获取编码区非编码区非编码区DNA聚合酶剪cDNA文库与基因组DNA文库cDNA反转录受体菌群体与运载体连接导入cDNA文库某种生物某个时期的mRNA某生物体内全部DNA

许多DNA片段受体菌群体限制酶基因组文库与运载体连接导入cDNA文库与基因组DNA文库cDNA反转录受体菌群体与运载基因组文库与cDNA文库的比较文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子（具有启动作用的DNA片段）基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段）基因多少

物种间的基因交流小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以基因组文库与cDNA文库的比较文库类型cDNA文库基因组文库（二）利用PCR技术扩增目的基因1概念：PCR全称为_______________，是一项在生物_____复制______________的核酸合成技术。多聚酶链式反应体外特定DNA片段3前提：模板DNA；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；DNA引物DNA双链复制原理：条件：2一段已知目的基因的核苷酸序列（二）利用PCR技术扩增目的基因1概念：多聚酶链式反应体外特a.DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________b.退火（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部__________。c.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的__________。氢键单链DNA双链DNADNA单链d.重复a.b.c步骤：每重复一次，目的基因增加___倍1PCR反应原理示意图：a.DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，PCR反应原理示意图：PCR反应原理示意图：PCR技术的操作过程PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增PCR技术的操作过程PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形思考？1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次，理论上至少需要几个引物？2×（2n-1）(n为循环次数)（24-1）×2=30思考？1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次，2×（2n-1PCR技术扩增与DNA复制的比较DNA复制PCR技术场所原理条件解旋方式酶特点结果碱基互补配对原则碱基互补配对原则四种脱氧核苷酸、模板、酶、ATP四种脱氧核苷酸、模板、酶、引物DNA在高温下解旋解旋酶催化解旋半保留复制、边解旋变复制半保留复制、全解旋再复制体外复制主要在细胞核内大量的DNA片段形成整个DNA分子热稳定的DNA聚合酶细胞内的解旋酶、DNA聚合酶等PCR技术扩增与DNA复制的比较DNA复制PCR技术场所原理3.人工合成法在基因较小，核苷酸序列已知的情况下，可以利用DNA合成仪用化学方法人工合成蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因化学合成推测推测思考：化学法合成的目的基因含内含子、启动子和终止子吗？不含3.人工合成法在基因较小，核苷酸序列已知的情况下，可以利用课堂小结目的基因的获取1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成种类基因组文库部分基因文库课堂小结目的基因的获取1、从基因文库中获取2、利用PCR技术二、基因表达载体的构建——基因工程的核心1目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。2基因表达载体的组成：复制原点+启动子+目的基因+终止子+标记基因二、基因表达载体的构建——基因工程的核心1目的：2基因表达表达载体启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来。表达载体启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是R基因表达载体的构建过程质粒DNA分子限制酶处理两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口两个黏性末端基因表达载体的构建过程质粒DNA分子限制酶处理两个切口DNA注意：①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构②用到的工具酶：限制酶和DNA连接酶，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。注意：①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部

三、将目的基因导入受体细胞1转化：

目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。3目的基因导入受体细胞的原理：

借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。常用的受体细胞：

大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、

酵母菌和动植物细胞等。2三、将目的基因导入受体细胞1转化：3目的基因导入受体细胞的1、目的基因导入植物细胞的方法（1）农杆菌转化法

①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。②原理：Ti质粒上的T—DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。1、目的基因导入植物细胞的方法（1）农杆菌转化法①农杆构建基因表达载体转入农杆菌植物细胞导入稳定维持和表达③过程：1、目的基因导入植物细胞的方法④优点：经济、有效整合到染色体DNA上构建基因表达载体转入农杆菌植物细胞导入稳定维持和表达③过程：（2）基因枪法：①操作方法：利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。②

金属粒子：钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um③适用：单子叶植物1、目的基因导入植物细胞的方法（2）基因枪法：①操作方法：利用压缩气体产生的动力，将包裹（3）花粉管通道法：①操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉管还未愈合前期，剪去柱头，然后，滴入DNA（含目的基因）使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞②

特点:十分简便经济

③实例：转基因抗虫棉1、目的基因导入植物细胞的方法（3）花粉管通道法：①操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉2、将目的基因导入动物细胞（1）方法：显微注射法（3）程序：含目地基因的表达载体提纯取卵（受精卵）显微注射受精卵新性状动物（2）受体细胞：受精卵2、将目的基因导入动物细胞（1）方法：显微注射法（3）程序：3、将目的基因导入微生物细胞①微生物作受体细胞原因：

繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少②常用细胞：大肠杆菌③常用方法：Ca2+处理获得感受态细胞④过程：Ca2+处理大肠杆菌感受态

细胞感受态细胞吸收DNA表达载体与感受态细胞混合3、将目的基因导入微生物细胞①微生物作受体细胞原因：Ca2+1.导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组DNA分子吗？真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。2.目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？不一定，需要检测思考四、目的基因的检测与鉴定1.导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组DNA分子探针15N15N转基因生物的DNA14N14N（1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因基因探针：放射性同位素等标记的含目的基因DNA分子方法——DNA分子杂交技术变性变性1、检测——分子水平的检测探针15N15N转基因生14N14N（1）检测转基因生物染色变性方法——分子杂交技术（2）检测目的基因是否转录出了mRNA探针15N15N转基因生物的mRNA14N1、检测——分子水平的检测变性方法——分子杂交技术（2）检测目的基因是否转录出了mRN提取（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质方法——抗原-抗体杂交苏云金杆菌将Bt毒蛋白注射小鼠体内从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体抗体蛋白质

出现杂交带脱分化组织培养Bt毒素蛋白1、检测——分子水平的检测提取（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质方法——抗原-抗体杂交2、鉴定——个体水平的鉴定抗虫、抗病接种实验，活性比较实验例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未导入目的基因或导入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明导入了抗虫基因并得到表达。2、鉴定——个体水平的鉴定抗虫、抗病接种实验，活性比较实验课堂练习1、有关基因工程的叙述中，错误的是()A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来

B、限制性内切酶用于目的基因的获得

C、目的基因须由运载体导入受体细胞

D、人工合成目的基因不用限制性内切酶A课堂练习1、有关基因工程的叙述中，错误的是()A2、下列属于获取目的基因的方法的是()①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取③从受体细胞中提取④利用PCR技术⑤利用DNA转录 ⑥人工合成

A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥D课堂练习2、下列属于获取目的基因的方法的是()D课堂练习3、有关基因工程的叙述正确的是（）

A、限制酶只在获得目的基因时才用

B、重组质粒的形成在细胞内完成

C、质粒都可作为运载体

D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料D【拓展深化】

工具酶只有两种：限制酶在操作程序1、2中用到且要求用同一种，目的是产生相同的黏性末端；DNA连接酶只在操作程序2中用到。课堂练习3、有关基因工程的叙述正确的是（）D【拓展深化】4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是

（）

A、人工合成目的基因

B、目的基因与运载体结合

C、将目的基因导入受体细胞

D、目的基因的检测和表达C【拓展深化】只有第三步将目的基因导入受体细胞不需碱基互补配对，其余三个步骤都涉及碱基互补配对课堂练习4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的即时应用(随学随练，轻松夺冠)5．(2009年高考浙江卷)下列关于基因工程的叙述，错误的是(

)A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达D课堂练习即时应用(随学随练，轻松夺冠)D课堂练习演讲完毕，谢谢观看！演讲完毕，谢谢观看！1.2基因工程的基本操作程序1.2基因工程的1、原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区与RNA聚合酶结合位点启动子终止子启动子：位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。终止子：位于基因尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。原基核因细结胞构编码区：非编码区能转录为mRNA，编码蛋白质不能转录为mRNA，不能编码蛋白质功能1、原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区与RNA聚合酶结2、真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子

外显子

启动子终止子真核细胞基因结构编码区非编码区：外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列2、真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶内原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、______的相同点都由能够编码蛋白质的_______

和具有调控作用的_________组成的3、原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码区原核细胞真核细胞不同点编码区是编码区是间隔都由能够编码蛋白质原核生物的基因表达编码区非编码区非编码区RNA聚合酶mRNA转录翻译启动子终止子基因蛋白质原核生物的基因表达编码区非编码区非编码区RNA聚合酶mRNA真核生物的基因表达编码区非编码区非编码区剪接有关的酶RNA聚合酶mRNA前体mRNA转录剪接翻译启动子终止子基因蛋白质真核生物的基因表达编码区非编码区非编码区剪接有关的酶RNA聚1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定1.2基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受一、目的基因的获取1目的基因主要是编码蛋白质的基因获取目的基因的常用方法：如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因、具有调控作用的因子等。2

1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、利用DNA合成仪用化学方法直接人工合成一、目的基因的获取1目的基因主要是编码蛋白质的基因获取目的基（一）从基因文库中获取目的基因1.基因文库的概念:将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。2.基因文库的种类:基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库（一）从基因文库中获取目的基因1.基因文库的概念:基因文库的构建方法①基因组文库的构建提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶切割一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接重组DNA基因组文库导入受体菌中储存基因文库的构建方法①基因组文库的构建提取某种生物的全部DN②cDNA文库的构建-----反转录法：提取某种生物的mRNA单链DNA双链cDNA片段重组DNA与载体连接cDNA文库反转录酶DNA聚合酶导入受体菌中储存基因文库的构建方法mRNA单链DNA双链DNA②cDNA文库的构建-----反转录法：提取某种生物的m思考？真核生物的基因用反转录法得到的cDNA与原基因相同吗？思考？真核生物的基因用反转录法得到的真核细胞的cDNA的获取编码区非编码区非编码区DNA聚合酶剪接有关的酶RNA聚合酶mRNA前体mRNA单链DNAcDNA反转录酶转录剪接反转录复制启动子终止子基因不含非编码区和内含子真核细胞的cDNA的获取编码区非编码区非编码区DNA聚合酶剪cDNA文库与基因组DNA文库cDNA反转录受体菌群体与运载体连接导入cDNA文库某种生物某个时期的mRNA某生物体内全部DNA

许多DNA片段受体菌群体限制酶基因组文库与运载体连接导入cDNA文库与基因组DNA文库cDNA反转录受体菌群体与运载基因组文库与cDNA文库的比较文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子（具有启动作用的DNA片段）基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段）基因多少

物种间的基因交流小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以基因组文库与cDNA文库的比较文库类型cDNA文库基因组文库（二）利用PCR技术扩增目的基因1概念：PCR全称为_______________，是一项在生物_____复制______________的核酸合成技术。多聚酶链式反应体外特定DNA片段3前提：模板DNA；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；DNA引物DNA双链复制原理：条件：2一段已知目的基因的核苷酸序列（二）利用PCR技术扩增目的基因1概念：多聚酶链式反应体外特a.DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________b.退火（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部__________。c.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的__________。氢键单链DNA双链DNADNA单链d.重复a.b.c步骤：每重复一次，目的基因增加___倍1PCR反应原理示意图：a.DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，PCR反应原理示意图：PCR反应原理示意图：PCR技术的操作过程PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增PCR技术的操作过程PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形思考？1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次，理论上至少需要几个引物？2×（2n-1）(n为循环次数)（24-1）×2=30思考？1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次，2×（2n-1PCR技术扩增与DNA复制的比较DNA复制PCR技术场所原理条件解旋方式酶特点结果碱基互补配对原则碱基互补配对原则四种脱氧核苷酸、模板、酶、ATP四种脱氧核苷酸、模板、酶、引物DNA在高温下解旋解旋酶催化解旋半保留复制、边解旋变复制半保留复制、全解旋再复制体外复制主要在细胞核内大量的DNA片段形成整个DNA分子热稳定的DNA聚合酶细胞内的解旋酶、DNA聚合酶等PCR技术扩增与DNA复制的比较DNA复制PCR技术场所原理3.人工合成法在基因较小，核苷酸序列已知的情况下，可以利用DNA合成仪用化学方法人工合成蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因化学合成推测推测思考：化学法合成的目的基因含内含子、启动子和终止子吗？不含3.人工合成法在基因较小，核苷酸序列已知的情况下，可以利用课堂小结目的基因的获取1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成种类基因组文库部分基因文库课堂小结目的基因的获取1、从基因文库中获取2、利用PCR技术二、基因表达载体的构建——基因工程的核心1目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。2基因表达载体的组成：复制原点+启动子+目的基因+终止子+标记基因二、基因表达载体的构建——基因工程的核心1目的：2基因表达表达载体启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来。表达载体启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是R基因表达载体的构建过程质粒DNA分子限制酶处理两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口两个黏性末端基因表达载体的构建过程质粒DNA分子限制酶处理两个切口DNA注意：①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构②用到的工具酶：限制酶和DNA连接酶，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。注意：①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部

三、将目的基因导入受体细胞1转化：

目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。3目的基因导入受体细胞的原理：

借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。常用的受体细胞：

大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、

酵母菌和动植物细胞等。2三、将目的基因导入受体细胞1转化：3目的基因导入受体细胞的1、目的基因导入植物细胞的方法（1）农杆菌转化法

①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。②原理：Ti质粒上的T—DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。1、目的基因导入植物细胞的方法（1）农杆菌转化法①农杆构建基因表达载体转入农杆菌植物细胞导入稳定维持和表达③过程：1、目的基因导入植物细胞的方法④优点：经济、有效整合到染色体DNA上构建基因表达载体转入农杆菌植物细胞导入稳定维持和表达③过程：（2）基因枪法：①操作方法：利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。②

金属粒子：钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um③适用：单子叶植物1、目的基因导入植物细胞的方法（2）基因枪法：①操作方法：利用压缩气体产生的动力，将包裹（3）花粉管通道法：①操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉管还未愈合前期，剪去柱头，然后，滴入DNA（含目的基因）使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞②

特点:十分简便经济

③实例：转基因抗虫棉1、目的基因导入植物细胞的方法（3）花粉管通道法：①操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉2、将目的基因导入动物细胞（1）方法：显微注射法（3）程序：含目地基因的表达载体提纯取卵（受精卵）显微注射受精卵新性状动物（2）受体细胞：受精卵2、将目的基因导入动物细胞（1）方法：显微注射法（3）程序：3、将目的基因导入微生物细胞①微生物作受体细胞原因：

繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少②常用细胞：大肠杆菌③常用方法：Ca2+处理获得感受态细胞④过程：Ca2+处理大肠杆菌感受态

细胞感受态细胞吸收DNA表达载体与感受态细胞混合3、将目的基因导入微生物细胞①微生物作受体细胞原因：Ca2+1.导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组DNA分子吗？真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。2.目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？不一定，需要检测思考四、目的基因的检测与鉴定1.导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组DNA分子探针15N15N转基因生物的DNA14N14N（1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因基因探针：放射性同位素等标记的含目的基因DNA分子方法——DNA分子杂交技术变性变性1、检测——分子水平的检测探针15N15N转基因生14N14N（1）检测转基因生物染色变性方法——分子杂交技术（2）检测目的基因是否转录出了mRNA探针15N15N转基因生物的mRNA14N1、检测——分子水平的检测变性方法——分子杂交技术（2）检测目的基因是否转录出了mRN提取