食品微生物学-实验基本

微生物学实验基本知识研究微生物的基本内容微生物的形态、生理以及生态等是研究微生物的基本内容对于这些问题的研究，不同于动植物的研究，必须应用一套特殊的实验方法。微生物学实验基本操作方法基本方法：显微镜的观察制片与染色培养基的制备

生理特性试验纯种分离接种与培养血清学试验

1234567显微镜种类：普通光学显微镜、紫外线显微镜荧光显微镜、相差显微镜、电子显微镜放大率=目镜放大率×物镜放大率

显微镜的结构显微镜显微镜性能的优劣不单是看它的总放大倍数．更重要的是看它分辨率的大小。分辨率是指显微镜能分辨出物体两点间最小距离(D)的能力。D值愈小表明分辨率愈高。D值与光线的波长成正比，与物镜的数值孔径成反比。

光线的波长

D值=2数值孔径从上式可看出，缩短光波长和增大数值孔径都可提高分辨率。数值孔径（开口率）指光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角，a)的一半正弦与介质折射率(n)的乘积：影响数值孔径大小的因素，一是镜口角，二是介质的折射率。空气的折射率为1，玻璃的折射率为1.52，香柏油的折射率为1.51，水是1.33油镜的观察观察较小的活细胞或细菌的运动观察活的、未染色的细胞、细胞内部的显微结构、鞭毛的运动情况观察死的细胞、病毒、蛋白质分子电子枪阴极电子枪阳极制片和染色制片：制成标本的过程。制片标本：非染色标本（普通玻片）染色标本非染色标本压滴法基本制片法：悬滴法单染色法染色标本复染色法革兰氏染色抗酸染色特殊染色芽孢、鞭毛、负染其他涂片过程示意图

注意事项

1注意擦镜头时，只能用撩镜纸。

2观察完毕，必须将镜筒上升，才能取下片．放入另一装片后，要按使用油镜要求作．不能在油镜下直接取下和替换装片，切记

3．无菌操作过程中，接种环灭菌后不能触及其他物品，挑菌不能过多。压滴法-观察细菌的运动悬滴法-观察细菌的运动情况基本染色法：涂片干燥：自然、加热固定染色：单染（美兰）、复染（革兰氏染色）水洗干燥镜检革兰氏染色法注意事项1、

涂片务求均匀．切忌过厚2、在染色过程个，不可使染液干涸。3、脱色时间十分重要，过长，则脱色过度，会使阳性菌被染成阴性菌4、老龄菌因体内核酸减少，会使阳性茵被染成阴性菌，故不能选用。

染料的种类碱性染料：

染料离子带阳电，与阴电的物质结合。常用的有：碱性复红、沙黄、中性红、龙胆紫、结晶紫、甲基紫、美蓝等。取其氯化物、硫酸盐、醋酸盐、草酸盐等酸性染料：染料离子带阴电，与阳电的物质结合。常用的有：酸性复红、伊红、刚果红等取其钠盐、钾盐、钙盐、铵盐等。

1.根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基，如自养型微生物的培养基完全可以（或应该）由简单的无机物质组成。异养型微生物的培养基至少需要含有一种有机物质。按微生物的主要类群来说，又有细菌、放线菌、酵母菌和霉菌之分。它们所需要的培养基成分也不同，分别称为牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号合成培养基，麦芽汁培养基，查氏合成培养基。配制培养基的原则有的放矢、营养协调、条件适宜、经济节约营养物的浓度：在一般情况下，浓度合适的营养物质才对微生物表现出良好作用，浓度大时对微生物生长起抑制作用，浓度小时不能满足微生物生长的需要。

各营养物质之间的浓度比：培养基中各营养物质之间的浓度比直接影响微生物的生长与繁殖和（或）代谢产物的形成与积累，尤其是碳氮比（C／N）（碳氮比一般指培养基中元素碳与元素氮的比值，有时也指培养基中还原糖与粗蛋白两种成分含量之比）的影响更为明显。例如在微生物的谷氨酸发酵中，培养基的C／N为4：l时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；当C／N为3：1时，菌体繁殖受到抑制，而谷氨酸大量增加。2.注意各种营养物质的浓度与配比各类微生物生长的最适pH各不相同，细菌与放线菌生长的pH在7—7.5之间，酵母菌与霉菌生长的pH值在4-5之间。在微生物的生长和代谢过程中，由于营养物质的利用和代谢产物的形成与积累，常会改变培养基的pH值，为了维持培养基pH值的相对恒定，通常采用下列两种方式：内源调节：在培养基里加一些缓冲剂或不溶性的碳酸盐；调节培养基的碳氮比。外源调节：按实际需要流加酸或碱液3.控制培养基的PH值配制培养基时，应尽量考虑利用价廉并且易于获得的原料作为培养基的成分，特别是在工业发酵中，培养基用量很大，更应该考虑到这一点，以便降低产品成本。4.经济节约培养基的种类按培养基的组成成分分类按培养基的物理状态分类按培养基的功能分类

根据培养基中化学成分的了解程度将其分为：

合成培养基：由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基，该类培养基的组成成分精确、重复性强，但微生物生长较慢，且价格昂贵，故一般适于在实验室范围内他有关研生物营养需要、代谢、分类鉴定、生物测定以及菌种选育、遗传分析等方面的研究工作。

天然培养基：利用化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物质（如自汉奸、因母没计、土壤没液、豆芽汁、玉米粉、麦皮、牛奶、血清等）制成的培养基，天然培养基比较经济，除实验室经常使用外，更适宜于在生产上用来大规模地培养微生物和生产微生物产品。固体培养基：在液体培养基中加入1.5-2.0%的凝固剂制成的呈固体状态的培养基。常用于微生物的分离、纯化、计数等方面的研究。

半固体培养基：在液体培养基中加入0.2-0.7％的琼脂构成的培养基。常用来观察细菌运动的特征，以进行菌种鉴定和噬菌体效价滴定等方面的实验工作。液体培养基：液体培养基不含任何凝固剂，它常用于大规模的工业生产以及在实验室进行微生物生理代谢等基本理论的研究工作。科研与生产中常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅胶三种，除在液体培养基中加入凝固剂之外，一些由天然的固体基质制成的培养基也属于固体培养基根据培养基的物理状态可将其分为：

加富培养基：加富培养基是指在普通培养基里加过血、血清、动物（或植物）组织液或其他营养物质（或生长因子）的一类营养丰富的培养基，用以培养某种或某类营养要求苛刻的异养微生物

选择培养基：选择培养基是根据某种或某一类群微生物的特殊营养需要或对某种化合物的敏感性不同而设计出来的一类培养基。利用这种培养基可以将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。

鉴别培养基：普通培养基中加入能与某种代谢产物发生反应的指示剂或化学药品，从而产生某种明显的特征性变化，以区别不同的微生物按照培养基的用途，可将其分为接种和培养接种培养基接种活体接种涂布法划线法倾注法点植法穿刺法浸洗法动物接种法禽体活组织接种法鸡接种胚胎法

培养培养厌氧培养需氧培养无菌空气供氧通风搅拌处理物理方法化学方法生物方法

纯种分离分离方法：以获得纯菌种。

平板划线稀释倾注选择和鉴别培养单细胞分离培养

菌种保藏任务：使菌种在保藏过程中保持原有的特性，不死亡，不污染，以供获纯菌种后，较长时间的研究和生产上的应用。原理：人为的创造合适的环境条件，使微生物的代谢活动不活跃，生长繁殖受到抑制的休眠状态。方法：低温、砂土管或硅胶管、矿油、干燥生理特性试验生长温度试验温度存活试验耐酸性试验耐盐/糖性试验生化试验适于测定微生物适应环境能力试验区分微生物的种类

血清学试验微生物以及其它一些抗原性物质进入机体后,能在机体的血清中产生特异性抗体。这种抗体与相应的抗原在体外相遇,可以表现出凝集、沉淀、溶解、补体结合等多种反应,这些反应的试验都是采用免疫血清来进行的,所以称为血清学试验。抗原是指凡能刺激机体产生特异性抗体，并能与所产生的抗体进行结合发生反应的物质。抗体：由于抗原的刺激后，在机体内产生的免疫球蛋白，这种免疫球蛋白在机体的血清或体液中出现，它能与相应的抗原结合，发生各种反应。免疫血清：血清内因受抗原刺激后而产生抗体，这种含有抗体的血清。动物试验动物试验常应用于：病原微生物致病力的测定.病原微生物的分离免疫血清的制备病原菌种鉴定等各个方面。食品微生物学检验方法采样：从待鉴定的一批食品中抽取小部分用于检验的过程。通常按标