实验动物遗传学质量标准化课件

第一节概述实验动物遗传学质量标准化的意义9/16/2020实验动物遗传学质量标准化实验动物遗传学质量标准化第一节概述实验动物遗传学质量标准化的意义9/16/2020实验动物遗传学质量标准化、实验动物遗传学质量标准化的意义动物实验结果的重复性取决于动物个体差异,而动物个体特征主要受遗传基因控制,故实验动物的遗传学质量对动物实验结果有重要影响不同基因型动物,生物学特性有明显差异,对实验刺激有不同反应。9/16/2020实验动物遗传学质量标准化文件)综日查看(收6)工具①D帮助后:因2△搜次收买的媒的·回·地址D同物以小下1业地冰翻喉···选·Google此购页内容为英语.要使用G0ge工具栏进行副泽吗?工蟹JEMAVANTLERSEHINTransformingGrowthFactorBProductionIsInversely,AbitamrsiheJ.Exp.Ned,Yolue188,Numberl,Julyl,199839-48CorrelatedwithSeverityofMurineMalariaInfection*firesByFakhereldinI.OmerandEleanorI.RileyFromtheInstituteofCell,AnimalandPopulationBiology,UniversityofEdinburgh,Edinburgh,EH93JTUnitedKingdombSimilararticlesinthinjoumAbstractHehaveexaminedtheroleoftheimmunomodulatorycytokine:AogtractanthologyofmalariainBALB/cmice.Circulatinglevelsof:量xmn7mh由m间知m油mTGF-B,andproductionofbioactiveTGF-Bbysplenocytes,were-ResultbCitingArticlesviaGooglescholarfmd1owinlethalinfections时mh|:mmYoverEMpeliiwereaccompaniedbysignificantTGF-pproduction.AceetwreenthefailuretoproduceTGFandtheseverityofmalariainfectionwas图已毕,但上有atmentofinfectedmicewithneutralizingantibodytoTGF-f,which开划⊙”中外文电子。-]nam.20春件」回五遭传控小2实轴动物!,」多51第一节概述实验动物遗传学质量标准化第一节概述1、实验动物遗传学质量标准化的意义动物实验结果的重复性取决于动物个体差异,而动物个体特征主要受遗传基因控制,故实验动物的遗传学质量对动物实验结果有重要影响不同基因型动物,生物学特性有明显差异,对实验刺激有不同反应。9/16/2020实验动物遗传学质量标准化、实验动物遗传学质量标准化的意义2文件)综日查看(收6)工具①D帮助后:因2△搜次收买的媒的·回·地址D同物以小下1业地冰翻喉···选·Google此购页内容为英语.要使用G0ge工具栏进行副泽吗?工蟹JEMAVANTLERSEHINTransformingGrowthFactorBProductionIsInversely,AbitamrsiheJ.Exp.Ned,Yolue188,Numberl,Julyl,199839-48CorrelatedwithSeverityofMurineMalariaInfection*firesByFakhereldinI.OmerandEleanorI.RileyFromtheInstituteofCell,AnimalandPopulationBiology,UniversityofEdinburgh,Edinburgh,EH93JTUnitedKingdombSimilararticlesinthinjoumAbstractHehaveexaminedtheroleoftheimmunomodulatorycytokine:AogtractanthologyofmalariainBALB/cmice.Circulatinglevelsof:量xmn7mh由m间知m油mTGF-B,andproductionofbioactiveTGF-Bbysplenocytes,were-ResultbCitingArticlesviaGooglescholarfmd1owinlethalinfections时mh|:mmYoverEMpeliiwereaccompaniedbysignificantTGF-pproduction.AceetwreenthefailuretoproduceTGFandtheseverityofmalariainfectionwas图已毕,但上有atmentofinfectedmicewithneutralizingantibodytoTGF-f,which开划⊙”中外文电子。-]nam.20春件」回五遭传控小2实轴动物!,」多51文件)综日查看(收6)工具①D帮助3文件)综日查看(收6)工具①D帮助后:因2△搜次收买的媒的·回·地址D同物以小下1业地冰翻资讯按钮库喉···选·Google此网页容为英语,要快用G0ge工具栏进行翻泽吗?工ntheabilityofparasiteantigenstoinduceTGF+MaterialsandMethodsP.berghei(NK65),P.chabaudichabaudi(A/J),andP.yoelii(17X)wereobtainedfromProfesDavidWalliker,WHOMalariaRepository,UniversityofEdinburgh,Edinburgh,UK.P.bergheiis-Reaultahighlyvirulentinmice(31),susceptibilitytoP.chabaudichabaudivariesbetweenstrainsofinbredmicebutresolvesspontaneouslyinBALB/cmice(32),andP.yoeliiisgenerallyvReferencvirulent,althoughalethalstrain(17XL/YI)hasbeenderivedfromtheavirulent17Xstrain(33),Cryopreservedparasiteswerethawed,injectedintraperitoneallyintoBALB/cmice,andmaintainedbyregularpassageParasitizedmouseerythrocytes(20-40%parasitemia)werepurifiedbylayeringonto72%Percoll(PharmaciaBiotechAB,sala,Sweden)andcentrifugedat2,300rpmfor15min.SchizontswererecoveredfromthegradientinterfaceandwashednRPII(GIBOO-BRL,Paisley,UK)I4-6-wk"oldmaleBALB/cmicewereobtainedfromHarlan(Oxford,UM).Thedrinkingwaterofexperimentalmicewassupplementedwith2.5g/lithatparasitegrowthwasnotinhibitedbyalackofessentialnutrients(34).ExperimentallalariaInfecti图已完毕,但网页上有错误,开划⊙”3E,·2春件回hoP,第五传控。回2实对物遭,」M1:面图多51:25文件)综日查看(收6)工具①D帮助4文件E我报E视图文稳)工具CD窗口(帮助心中国组织工程研究与临床康复第12卷第47那2008-11-18出版点8waMRR基础医学不同品系小鼠骨髓间质干细胞扩增能力及细胞表型差异的比较*郭振宇,郑芹2,雷俊霞Comparisonofamplificationandcellphenotypeofmurinebonemarrow-derivedmesenchymalstemcellGuoZhenyu,ZhengQin?,LeiJun-xia2'BACKGROUND:Alhoughtherearemanyreportsaboutisolationandcultureofbonemarrowmesenchymalstemcell(MSC)frommce,someprocedureisverycomplexandtedious,anddoesnotsuitcomesticexpenments,suchasantbodynegativeselectedormpleandstablemethodtoisolateandexpandmurineMSCinvitroandinvestigatetheirbiologicalionofcytologywasperformedattheDepartmentofPathophysiology.MedicalCollege,SunYat-seve6week-oldmaleC57BL/6and5BABLACmicewereprovidedbytheexperimentalanimalcenterofSunMETHODS:B:lateralfemaraoftwokindsofmicewereharvested,andattachedtissueswere4-wellplateusingDMEMcontainingtO%fetalcalfserum.Plateswerekeptin5%CO,at37C.Afterseveralcloneellplates.Theseluencewasattainedexpansion,MSCsgrewrapidlyfromthesixtnthpassagewithevenfibroblastgroups.BochkindsofMSCscouldpassageto开划⊙C6”画3hm文件E我报E视图文稳)工具CD窗口(帮助心5文件E我报E视图文)工具D窗口()帮助出GuoZY,ZhengQLeiJX.Comperisonlificationandcellphenotypeefmurinebonemarrow-tenivedmesenchymalstemcellbengYanjiayuLinchuangKangfu2008:12(47):9257-9260Thapc//crterenzglckf摘要背景:虽然近年来对小鼠骨间质干组胞分离培养的报道层出不穷,但就其方法而言,有的操作步骤过于繁,有的不适用于国内相关实验,如采用一系列抗体负选或利用自行研制的新抗体辩目的;拟建立简便稳定的小鼠骨髓间质干细胞体外分离和扩增的方法,并比较不同品系小鼠骨解间质干细胞的生物学特点计、时间及地点:旧胞学体外对比观察,于中山大学中山医学院病理生理教研室完成料:清洁级6周龄雄性C57BL和BABLAC小鼠各5只,由中山大学中山医学院实验动物中心提供去:取两种品系小鼠双侧骨,去除股骨上附带组织,用含10%FCS的DMEM培养基冲洗骨腔,过200目不锈钢网,收集骨链细胞,用TsNH红细胞裂解液溶解2min,用含10%FCS的DMEM培养基调整年愿浓低密度接种于24孔板,置于37℃、体积分数为005的CO2培养箱中。出现成纤锥样细胞克降后消化收集并移至6孔板待细胞70%-80%融合时消化传主要观察指标:细胞形态和生长特点,流式细胞仪检测细表型,茜素红染色观察成骨诱导情况,油红O染色观察成脂诱结果:约培养2周可形成阻胞克降,经历一缓慢扩增阶段后,第67代细胞生长明显加快,可见形态均一的成纤细胞呈典型的旋状生长,两种品系小鼠青酸问质干细胞均可传全10代以上,但C57BL6小鼠骨简间质干细胞体外扩增能力更坐。C57BL6和BABLAC小鼠骨间质干细胞均呈CD45CDIBcD117,CD44和$ca1呈阳性表达,可连续表达MH少量表达CD80,此外前者可少量表达MHC,而后者儿平不表达MHC∏,两者体外均能够向成骨、成脂方向分化。结论:通过低密度培养技术可简单方便的体外分离并扩增C57BL和BALB/c小鼠骨髓间质干细胞。两品系小鼠骨髓间质干细胞均易向成肯成后分化,但在扩增能力、细胞表型上略有不同关键词:骨简间质干细胞;体外培养;扩增:C57BL6;BALBc郭振宇,郑芹,雷俊霞不同晶系小鼠骨髓间质于细胞扩增能力及细胞表型差异的比较门中国组织工程研究与临床康复/S.1673-8225CN2//539/RCODEN:ZLKHAH9257击开始⊙”西3InternetE.,实动物设计第五章遭传控实验动物遗3·画图文件E我报E视图文)工具D窗口()帮助出6文件E我报E视图文)工具D窗口()帮助出改变培养条件,如首先采用RPM培养基以骨髓间质干细胞的表型分析:选择第8代塔胎牛血清和马血清各半的血清培养,以抑制造细胞,消化制备单细胞悬液,用不含胎牛血清血细胞的优势生长还有实验采用一些独特的的培养基悬浮细胞,调整浓度为1×10L,立培养体系。这些方法或繁琐,或筛选压力对刻进行细胞标记。向收获的细胞中分别加入荧细胞的增殖和分化能力有所影响,为此实验探光素标记的抗体FITC-antimouseCD44、CD45、讨小鼠间质千细胞体外大量扩增的方法,比较CDlb,PE-antimouseMHC-Il、CDl17、CD80两种不同品系小鼠间质干细胞的生物学特征PEcy5-antimouseSca-1,摇匀,避光4℃冰箱放置20min。1000r/min离心10min,弃去上清液1材料和方法PBS冲洗2次,加多聚甲醛固定液450μL固定待上机检测,所有标本均在6h内完成标定设计:细胞学体外对比观察流式细胞仪的配套软件CellQuestVer3.0分析样时间及地点:于2007-040在中山大学中山本中1×10个细胞的阳性表达率。每个样本均设同型标记抗体作为阴性对照材料:清洁级6周龄雄性C57BL6和BABL/C骨髓间质于细胞的多向分化潜能鉴定小鼠各5只,体质量15g左右,由中山大学中山成骨诱导":常规消化传代,以1×105孔的医学院实验动物中心提供,动物许可证号:粤密度接种于预先放置有盖玻片的6孔培养板中检证字2007A047,2007A045,实验过程中对动制备细胞爬片。当骨髓间质干细胞长至80%融合物的处置符合2006年科技部关于善待实验动物时,将培养基更换为含体积分数为01的胎牛血的规定清、103moL地塞米松、0.2mmol维生素C和实验方法10mmolLB.磷酸甘油钠的LDMED成骨诱导骨髓间质干细胞的分离培养与传代扩增:取液,于37℃,体积分数为0.05的CO2培养箱中9258POBer1200,Shemyung1/00Ch-tgickfcam开划⊙⊙”画3hmt,实动物设计」回第五遗传控,回2实动物遭,JM+画图「世不同品系小鼠,由多la文件E我报E视图文)工具D窗口()帮助出7文件①)编辑)视图0插入①格式)工具①)表格)密口()帮助0D回的舀国E,cmx·?正文+宋得,宋体三号国日Ⅱ·图目日律律g·△,x显示标记的最终状态·显示四)·份·8··诊田2601221画2323第364大学生创新素质教育实验动物设计汇编第一集张成都医学院2009年6月1/260位置:2厘米行1列录制修订扩展以写中文仲中国)g老开⊙C6”她五章遗2.实验动物,回)2009实验四1文件①)编辑)视图0插入①格式)工具①)表格)密口()帮助081907年,C.Little以毛色基因为标记,采用近亲繁殖而育成了DBA近交系小鼠,成为实验动物科学发展史上第一个近交系动物。至今已经80多年,仍在保持饲养,广泛应用Bagg用相同的方法于1913培育成功BALB/c近交系小鼠1966年,在无菌动物技术的基础上,又培育出了突变系小鼠一裸鼠,为肿瘤、免疫、传染病学的研究开创了新的道路9/16/2020实验动物遗传学质量标准化1907年,C.Little以毛色基因为标记,采用9实验动物按遗传学控制分类9/16/2020实验动物遗传学质量标准化实验动物按遗传学控制分类10实验动物遗传学质量标准化课件11实验动物遗传学质量标准化课件12实验动物遗传学质量标准化课件13实验动物遗传学质量标准化课件14实验动物遗传学质量标准化课件15实验动物遗传学质量标准化课件16实验动物遗传学质量标准化课件17实验动物遗传学质量标准化课件18实验动物遗传学质量标准化课件19实验动物遗传学质量标准化课件20实验动物遗传学质量标准化课件21实验动物遗传学质量标准化课件22实验动物遗传学质量标准化课件23实验动物遗传学质量标准化课件24实验动物遗传学质量标准化课件25实验动物遗传学质量标准化课件26实验动物遗传学质量标准化课件27实验动物遗传学质量标准化课件28实验动物遗传学质量标准化课件29实验动物遗传学质量标准化课件30实验动物遗传学质量标准化课件31实验动物遗传学质量标准化课件32实验动物遗传学质量标准化课件33实验动物遗传学质量标准化课件34实验动物遗传学质量标准化课件35实验动物遗传学质量标准化课件36实验动物遗传学质量标准化课件37实验动物遗传学质量标准化课件38实验动物遗传学质量标准化课件39实验动物遗传学质量标准化课件40实验动物遗传学质量标准化课件41实验动物遗传学质量标准化课件42实验动物遗传学质量标准化课件43实验动物遗传学质量标准化课件44实验动物遗传学质量标准化课件45实验动物遗传学质量标准化课件46实验动物遗传学质量标准化课件47实验动物遗传学质量标准化课件48实验动物遗传学质量标准化课件49实验动物遗传学质量标准化课件50实验动物遗传学质量标准化课件51实验动物遗传学质量标准化课件52实验动物遗传学质量标准化课件53实验动物遗传学质量标准化课件54实验动物遗传学质量标准化课件55实验动物遗传学质量标准化课件56实验动物遗传学质量标准化课件57实验动物遗传学质量标准化课件58实验动物遗传学质量标准化课件59实验动物遗传学质量标准化课件60实验动物遗传学质量标准化课件61实验动物遗传学质量标准化课件62实验动物遗传学质量标准化课件63实验动物遗传学质量标准化课件64实验动物遗传学质量标准化课件65实验动物遗传学质量标准化课件66实验动物遗传学质量标准化课件67实验动物遗传学质量标准化课件68实验动物遗传学质量标准化课件69实验动物遗传学质量标准化课件70实验动物遗传学质量标准化课件71实验动物遗传学质量标准化课件72实验动物遗传学质量标准化课件73实验动物遗传学质量标准化课件74实验动物遗传学质量标准化课件75实验动物遗传学质量标准化课件76实验动物遗传学质量标准化课件77实验动物遗传学质量标准化课件78实验动物遗传学质量标准化课件79实验动物遗传学质量标准化课件80实验动物遗传学质量标准化课件81实验动物遗传学质量标准化课件82实验动物遗传学质量标准化课件83实验动物遗传学质量标准化课件84实验动物遗传学质量标准化课件85实验动物遗传学质量标准化课件86实验动物遗传学质量标准化课件87实验动物遗传学质量标准化课件88实验动物遗传学质量标准化课件89实验动物遗传学质量标准化课件90实验动物遗传学质量标准化课件91实验动物遗传学质量标准化课件92实验动物遗传学质量标准化课件93实验动物遗传学质量标准化课件94实验动物遗传学质量标准化课件95实验动物遗传学质量标准化课件96实验动物遗传学质量标准化课件97实验动物遗传学质量标准化课件98实验动物遗传学质量标准化课件99实验动物遗传学质量标准化课件100实验动物遗传学质量标准化课件101实验动物遗传学质量标准化课件102第一节概述实验动物遗传学质量标准化的意义9/16/2020实验动物遗传学质量标准化实验动物遗传学质量标准化第一节概述实验动物遗传学质量标准化的意义9/16/2020实验动物遗传学质量标准化、实验动物遗传学质量标准化的意义动物实验结果的重复性取决于动物个体差异,而动物个体特征主要受遗传基因控制,故实验动物的遗传学质量对动物实验结果有重要影响不同基因型动物,生物学特性有明显差异,对实验刺激有不同反应。9/16/2020实验动物遗传学质量标准化文件)综日查看(收6)工具①D帮助后:因2△搜次收买的媒的·回·地址D同物以小下1业地冰翻喉···选·Google此购页内容为英语.要使用G0ge工具栏进行副泽吗?工蟹JEMAVANTLERSEHINTransformingGrowthFactorBProductionIsInversely,AbitamrsiheJ.Exp.Ned,Yolue188,Numberl,Julyl,199839-48CorrelatedwithSeverityofMurineMalariaInfection*firesByFakhereldinI.OmerandEleanorI.RileyFromtheInstituteofCell,AnimalandPopulationBiology,UniversityofEdinburgh,Edinburgh,EH93JTUnitedKingdombSimilararticlesinthinjoumAbstractHehaveexaminedtheroleoftheimmunomodulatorycytokine:AogtractanthologyofmalariainBALB/cmice.Circulatinglevelsof:量xmn7mh由m间知m油mTGF-B,andproductionofbioactiveTGF-Bbysplenocytes,were-ResultbCitingArticlesviaGooglescholarfmd1owinlethalinfections时mh|:mmYoverEMpeliiwereaccompaniedbysignificantTGF-pproduction.AceetwreenthefailuretoproduceTGFandtheseverityofmalariainfectionwas图已毕,但上有atmentofinfectedmicewithneutralizingantibodytoTGF-f,which开划⊙”中外文电子。-]nam.20春件」回五遭传控小2实轴动物!,」多51第一节概述实验动物遗传学质量标准化第一节概述103、实验动物遗传学质量标准化的意义动物实验结果的重复性取决于动物个体差异,而动物个体特征主要受遗传基因控制,故实验动物的遗传学质量对动物实验结果有重要影响不同基因型动物,生物学特性有明显差异,对实验刺激有不同反应。9/16/2020实验动物遗传学质量标准化、实验动物遗传学质量标准化的意义104文件)综日查看(收6)工具①D帮助后:因2△搜次收买的媒的·回·地址D同物以小下1业地冰翻喉···选·Google此购页内容为英语.要使用G0ge工具栏进行副泽吗?工蟹JEMAVANTLERSEHINTransformingGrowthFactorBProductionIsInversely,AbitamrsiheJ.Exp.Ned,Yolue188,Numberl,Julyl,199839-48CorrelatedwithSeverityofMurineMalariaInfection*firesByFakhereldinI.OmerandEleanorI.RileyFromtheInstituteofCell,AnimalandPopulationBiology,UniversityofEdinburgh,Edinburgh,EH93JTUnitedKingdombSimilararticlesinthinjoumAbstractHehaveexaminedtheroleoftheimmunomodulatorycytokine:AogtractanthologyofmalariainBALB/cmice.Circulatinglevelsof:量xmn7mh由m间知m油mTGF-B,andproductionofbioactiveTGF-Bbysplenocytes,were-ResultbCitingArticlesviaGooglescholarfmd1owinlethalinfections时mh|:mmYoverEMpeliiwereaccompaniedbysignificantTGF-pproduction.AceetwreenthefailuretoproduceTGFandtheseverityofmalariainfectionwas图已毕,但上有atmentofinfectedmicewithneutralizingantibodytoTGF-f,which开划⊙”中外文电子。-]nam.20春件」回五遭传控小2实轴动物!,」多51文件)综日查看(收6)工具①D帮助105文件)综日查看(收6)工具①D帮助后:因2△搜次收买的媒的·回·地址D同物以小下1业地冰翻资讯按钮库喉···选·Google此网页容为英语,要快用G0ge工具栏进行翻泽吗?工ntheabilityofparasiteantigenstoinduceTGF+MaterialsandMethodsP.berghei(NK65),P.chabaudichabaudi(A/J),andP.yoelii(17X)wereobtainedfromProfesDavidWalliker,WHOMalariaRepository,UniversityofEdinburgh,Edinburgh,UK.P.bergheiis-Reaultahighlyvirulentinmice(31),susceptibilitytoP.chabaudichabaudivariesbetweenstrainsofinbredmicebutresolvesspontaneouslyinBALB/cmice(32),andP.yoeliiisgenerallyvReferencvirulent,althoughalethalstrain(17XL/YI)hasbeenderivedfromtheavirulent17Xstrain(33),Cryopreservedparasiteswerethawed,injectedintraperitoneallyintoBALB/cmice,andmaintainedbyregularpassageParasitizedmouseerythrocytes(20-40%parasitemia)werepurifiedbylayeringonto72%Percoll(PharmaciaBiotechAB,sala,Sweden)andcentrifugedat2,300rpmfor15min.SchizontswererecoveredfromthegradientinterfaceandwashednRPII(GIBOO-BRL,Paisley,UK)I4-6-wk"oldmaleBALB/cmicewereobtainedfromHarlan(Oxford,UM).Thedrinkingwaterofexperimentalmicewassupplementedwith2.5g/lithatparasitegrowthwasnotinhibitedbyalackofessentialnutrients(34).ExperimentallalariaInfecti图已完毕,但网页上有错误,开划⊙”3E,·2春件回hoP,第五传控。回2实对物遭,」M1:面图多51:25文件)综日查看(收6)工具①D帮助106文件E我报E视图文稳)工具CD窗口(帮助心中国组织工程研究与临床康复第12卷第47那2008-11-18出版点8waMRR基础医学不同品系小鼠骨髓间质干细胞扩增能力及细胞表型差异的比较*郭振宇,郑芹2,雷俊霞Comparisonofamplificationandcellphenotypeofmurinebonemarrow-derivedmesenchymalstemcellGuoZhenyu,ZhengQin?,LeiJun-xia2'BACKGROUND:Alhoughtherearemanyreportsaboutisolationandcultureofbonemarrowmesenchymalstemcell(MSC)frommce,someprocedureisverycomplexandtedious,anddoesnotsuitcomesticexpenments,suchasantbodynegativeselectedormpleandstablemethodtoisolateandexpandmurineMSCinvitroandinvestigatetheirbiologicalionofcytologywasperformedattheDepartmentofPathophysiology.MedicalCollege,SunYat-seve6week-oldmaleC57BL/6and5BABLACmicewereprovidedbytheexperimentalanimalcenterofSunMETHODS:B:lateralfemaraoftwokindsofmicewereharvested,andattachedtissueswere4-wellplateusingDMEMcontainingtO%fetalcalfserum.Plateswerekeptin5%CO,at37C.Afterseveralcloneellplates.Theseluencewasattainedexpansion,MSCsgrewrapidlyfromthesixtnthpassagewithevenfibroblastgroups.BochkindsofMSCscouldpassageto开划⊙C6”画3hm文件E我报E视图文稳)工具CD窗口(帮助心107文件E我报E视图文)工具D窗口()帮助出GuoZY,ZhengQLeiJX.Comperisonlificationandcellphenotypeefmurinebonemarrow-tenivedmesenchymalstemcellbengYanjiayuLinchuangKangfu2008:12(47):9257-9260Thapc//crterenzglckf摘要背景:虽然近年来对小鼠骨间质干组胞分离培养的报道层出不穷,但就其方法而言,有的操作步骤过于繁,有的不适用于国内相关实验,如采用一系列抗体负选或利用自行研制的新抗体辩目的;拟建立简便稳定的小鼠骨髓间质干细胞体外分离和扩增的方法,并比较不同品系小鼠骨解间质干细胞的生物学特点计、时间及地点:旧胞学体外对比观察,于中山大学中山医学院病理生理教研室完成料:清洁级6周龄雄性C57BL和BABLAC小鼠各5只,由中山大学中山医学院实验动物中心提供去:取两种品系小鼠双侧骨,去除股骨上附带组织,用含10%FCS的DMEM培养基冲洗骨腔,过200目不锈钢网,收集骨链细胞,用TsNH红细胞裂解液溶解2min,用含10%FCS的DMEM培养基调整年愿浓低密度接种于24孔板,置于37℃、体积分数为005的CO2培养箱中。出现成纤锥样细胞克降后消化收集并移至6孔板待细胞70%-80%融合时消化传主要观察指标:细胞形态和生长特点,流式细胞仪检测细表型,茜素红染色观察成骨诱导情况,油红O染色观察成脂诱结果:约培养2周可形成阻胞克降,经历一缓慢扩增阶段后,第67代细胞生长明显加快,可见形态均一的成纤细胞呈典型的旋状生长,两种品系小鼠青酸问质干细胞均可传全10代以上,但C57BL6小鼠骨简间质干细胞体外扩增能力更坐。C57BL6和BABLAC小鼠骨间质干细胞均呈CD45CDIBcD117,CD44和$ca1呈阳性表达,可连续表达MH少量表达CD80,此外前者可少量表达MHC,而后者儿平不表达MHC∏,两者体外均能够向成骨、成脂方向分化。结论:通过低密度培养技术可简单方便的体外分离并扩增C57BL和BALB/c小鼠骨髓间质干细胞。两品系小鼠骨髓间质干细胞均易向成肯成后分化,但在扩增能力、细胞表型上略有不同关键词:骨简间质干细胞;体外培养;扩增:C57BL6;BALBc郭振宇,郑芹,雷俊霞不同晶系小鼠骨髓间质于细胞扩增能力及细胞表型差异的比较门中国组织工程研究与临床康复/S.1673-8225CN2//539/RCODEN:ZLKHAH9257击开始⊙”西3InternetE.,实动物设计第五章遭传控实验动物遗3·画图文件E我报E视图文)工具D窗口()帮助出108文件E我报E视图文)工具D窗口()帮助出改变培养条件,如首先采用RPM培养基以骨髓间质干细胞的表型分析:选择第8代塔胎牛血清和马血清各半的血清培养,以抑制造细胞,消化制备单细胞悬液,用不含胎牛血清血细胞的优势生长还有实验采用一些独特的的培养基悬浮细胞,调整浓度为1×10L,立培养体系。这些方法或繁琐,或筛选压力对刻进行细胞标记。向收获的细胞中分别加入荧细胞的增殖和分化能力有所影响,为此实验探光素标记的抗体FITC-antimouseCD44、CD45、讨小鼠间质千细胞体外大量扩增的方法,比较CDlb,PE-antimouseMHC-Il、CDl17、CD80两种不同品系小鼠间质干细胞的生物学特征PEcy5-antimouseSca-1,摇匀,避光4℃冰箱放置20min。1000r/min离心10min,弃去上清液1材料和方法PBS冲洗2次,加多聚甲醛固定液450μL固定待上机检测,所有标本均在6h内完成标定设计:细胞学体外对比观察流式细胞仪的配套软件CellQuestVer3.0分析样时间及地点:于2007-040在中山大学中山本中1×10个细胞的阳性表达率。每个样本均设同型标记抗体作为阴性对照材料:清洁级6周龄雄性C57BL6和BABL/C骨髓间质于细胞的多向分化潜能鉴定小鼠各5只,体质量15g左右,由中山大学中山成骨诱导":常规消化传代,以1×105孔的医学院实验动物中心提供,动物许可证号:粤密度接种于预先放置有盖玻片的6孔培养板中检证字2007A047,2007A045,实验过程中对动制备细胞爬片。当骨髓间质干细胞长至80%融合物的处置符合2006年科技部关于善待实验动物时,将培养基更换为含体积分数为01的胎牛血的规定清、103moL地塞米松、0.2mmol维生素C和实验方法10mmolLB.磷酸甘油钠的LDMED成骨诱导骨髓间质干细胞的分离培养与传代扩增:取液,于37℃,体积分数为0.05的CO2培养箱中9258POBer1200,Shemyung1/00Ch-tgickfcam开划⊙⊙”画3hmt,实动物设计」回第五遗传控,回2实动物遭,JM+画图「世不同品系小鼠,由多la文件E我报E视图文)工具D窗口()帮助出109文件①)编辑)视图0插入①格式)工具①)表格)密口()帮助0D回的舀国E,cmx·?正文+宋得,宋体三号国日Ⅱ·图目日律律g·△,x显示标记的最终状态·显示四)·份·8··诊田2601221画2323第364大学生创新素质教育实验动物设计汇编第一集张成都医学院2009年6月1/260位置:2厘米行1列录制修订扩展以写中文仲中国)g老开⊙C6”她五章遗2.实验动物,回)2009实验四1文件①)编辑)视图0插入①格式)工具①)表格)密口()帮助01101907年,C.Little以毛色基因为标记,采用近亲繁殖而育成了DBA近交系小鼠,成为实验动物科学发展史上第一个近交系动物。至今已经80多年,仍在保持饲养,广泛应用Bagg用相同的方法于1913培育成功BALB/c近交系小鼠1966年,在无菌动物技术的基础上,又培