色谱分析 平面色谱法课件

平面色谱法《色谱分析法》系列课件第五章平面色谱法第一节概述1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一书，推动了这一技术的发展。因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高，结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪器化，并实现了计算机化。Thin-layerchromatographyofstandardPLsamplesFig.1Description:Thethermo-stabilityofphospholipidsandlysophospholipidswasdeterminedbyonedimensionalthin-layerchromatography(TLC).Achloroform-methanol-28%aqueousammoniasolventsystem(65:35:8,v/v)providedclearseparationofmajorphospholipids(PL)andtheirlysoforms.The5%(w/v)dodecamolybdophosphoricacidsolutioninethanolwasusedassprayreagent.ThethermostabilityofphospholipidswasevaluatedbycomparethespotsdensityandareaofPLsampleswithvaryingheattreatment.Rapiddeterminationofthermo-stabilityofphospholipidsbyTLC二、平面色谱法的基本流程确定样品的预处理方法选择吸附剂和展开剂制备层析用薄板点样层析分离显色定性或定量分析分析结果，给出结论三、平面色谱法参数（一）定性参数1.比移值Rf(retardationfactor;Rf)溶质移动的距离与流动相移动距离之比

Rf范围：

0<Rf<1Rf=0.2~0.8（常用）

Rf=0.3~0.5（最佳）Lds1ds2图18－12.相对比移值Ris

讨论参考物与被测组分在完全相同条件下展开可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性；参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分相对比移值Ris与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1（三）容量因子k’与比移值Rf的关系容量因子：k’=ts/tmts

、tm分别为组分在固定相和展开剂中的保留时间保留值的定义：2.分离数(separationnumber;SN)定义：相邻斑点分离度为1.177时，在Rf=0(原点)到Rf=1(溶剂前沿)之间能容纳的色谱斑点数。

W(1/2)0,W(1/2)1为实验测得的某组分色谱峰的半峰宽对ds作图外推至在原点处和溶剂前沿处的半峰宽。

一般薄层板的分离数为7~10，高效薄层板可达10~20。SN是衡量分离容量的重要参数。概述1．TLC定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形成薄层而进行色谱分离和分析的方法2．操作过程：铺板→活化

→点样

→

展开

→定位(定性)/洗脱(定量)3．分离机制：吸附*、分配*、离子交换、空间排阻4．特点；分离能力强、灵敏度高、展开时间较短、显色方便。5．应用：药物杂质检查、纯度测定、定性及定量等。一、主要类型（一）吸附薄层色谱

固定相为吸附剂的薄层色谱。利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离.经过吸附、解吸、再吸附、再解吸……最后混合物得到分离.K大，Rf值小，移动慢；K小，Rf大，移动快。（二）分配薄层色谱

固定相为液体，吸留在载体上的薄层色谱。利用被分离组分在固定相与流动相中的分配系数不同而被分离。常用的是反相薄层色谱法，固定相是烷基化学键合相，展开剂是水及与水相溶的有机溶剂。二、吸附剂与展开剂(一）吸附剂1.硅胶：硅胶H------不含黏合剂硅胶G------含煅石膏（13-15%）硅胶F254---既含煅石膏，又含荧光指示剂2.氧化铝：可分为中性（pH7.5)、碱性（pH9.0）和酸性（pH4.0）（二）展开剂常用的有：

石油醚<环己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烷<苯<甲苯<二氯甲烷<乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<吡啶<酸<水吸附剂与展开剂的选择展开剂的选择：根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性吸附剂的选择：根据被测物极性和吸附剂的吸附能力

被测物极性强——弱极性吸附剂

被测物极性弱——强极性吸附剂图18－3连续展开：层析缸，预饱和，防止边缘效应浸入展开剂深度0.51.0cm，展开至整板3/4距离,标记。1,2样品3标准品前沿原点

•••1.5-2.0cm2.0cm123展开方式展开方式二维展开——在两个垂直的方向上进行展开。将样品点在薄层板的一个角上，展开适当距离后，挥干溶剂，再将薄层板以与原展开方向成90

的方向进行展开。原点12定量分析1.目视比较半定量2.测量斑点面积3.洗脱法4.薄层扫描法五、高效薄层色谱法高效薄层色谱法（highperformancethinlayerchromatography；HPTLC)所用的吸附剂颗粒很小（5μm或10μm），用喷雾法制成高效薄层板。常用的有硅胶、氧化铝、纤维素和化学键合相预制薄层板。第四节纸色谱法以纸做载体的色谱法，分离原理属于液-液分配色谱法，操作与薄层法类似。选纸→点样

→

展开

→显色(定性)/洗脱(定量)固定相：纸纤维吸附的水流动相：与水不互溶的有机溶剂（水饱和正丁醇）分离机制：同液-液分配色谱定性参数：讨论：Rf与组分性质、流动相及溶解度有关极性组分→易保留，Rf小（流动相极性↑，Rf↑）非极性组分→易流出，Rf大（流动相极性↑，Rf↓）本章小结掌握:平面色谱法的基本分离原理及相关参数的计算（比移值、相对比移值，分离度）；薄层色谱法的特点；吸附薄层色谱中吸附剂和展开剂的选择原则。熟悉:薄层色谱法的主要操作步骤。了解:薄层扫描法的应用及技术；纸色谱法的分离原理及实验条件。参考书及文献1.《分析化学》（第四版）下册，孙毓庆主编，人民卫生出版社2．周同惠等．纸色谱和薄层色谱。分析化学丛书．第三卷．第五册．北京：科学出版社，1989．3．林珍安等译．高效薄层色谱．上海：上海科技出版社，1984．4.孙毓庆主编．薄层扫描法及其在药物分析中的应用．北京，人民卫生出版社，1990．5.FriedBandShermaJ．Thin-layerChromatography．NewYork：MarcelDekkerlnc，1982．6.GrinbergN．ModernThin-layerChromatography．NewYork：MarcelDekkerlnc，1990。7.ShermaJandFriedB．HandbookofThin-LayerChromatography.NewYork：MarcelDekkerlnc，1991.（二）相平衡参数相平衡参数：分配系数K和容量因子k前面推导出R’表示单位时间内一个分子在流动相中出现的几率，也可以表示组分分子在平面上移动的速度.Rf＝L/L0=ut/u0t，定时展开时R’＝Rf讨论

⑴

Rf与K有关，即