免 疫 组 织 化 学课件

免疫组织化学

Immunohistochemistry免疫组化是什么？和医生有什么关系？？疑难病理诊断确定组织来源发现微小病灶免疫组化评价肿瘤细胞增殖程度指导治疗、评价预后病原体与肿瘤的关系常规切片病理诊断主要流程手术及活检标本常规切片阅片初步或最后诊断HE染色免疫组化染色最后诊断特殊染色HE染色病理诊断主要流程手术及活检标本常规切片阅片初步或最后诊断HE染色免疫组化染色最后诊断特殊染色HPV的诊断

步骤HEHPV疣？一把钥匙开一把锁一把锁有一个钥匙AbAbAgAg提取抗原。免疫动物(免疫血清)。获得相应的特异性抗体。用显示剂标记此抗体。以此抗体来检测抗原。通过化学显色反应，在显微镜下可见有颜色变化的部位即抗原的位置。

免疫组化技术的基本理论

免疫反应中的一些基本名词

抗原抗体(单克隆、多克隆)抗原-抗体复合物

为了使抗原抗体复合物在镜下成为可见，需进行标记。标记抗体:荧光素抗体酶标抗体

AgAgAbHRP+H2O2+DAB

免疫组化检测步骤

特异性是指抗原只与相应的抗体或致敏淋巴细胞结合。

抗原的特异性是由抗原物质表面的特殊化学基团即抗原决定簇（antigenditerminant)的性质、数量和空间构型所决定。不同抗原的抗原决定簇数目不等。抗原分子表面常有许多相同或不同的抗原决定簇。每一种抗原决定簇都可以刺激机体产生一种特异性抗体，因此某一抗原，可以产生一种或一种以上特异性抗体。不同的抗原，既可有各自独有的抗原决定簇，即特异性抗原，又有相同或相似的抗原决定簇，即共同抗原，可以引起交叉反应。t多克隆抗体天然抗原由多种抗原决定簇组成，每种决定簇均可激活有相应抗原受体的B淋巴细胞，产生针对抗原决定簇的抗体。因此用抗原免疫动物所产生的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物，称为多克隆抗体。提取抗原免疫动物

免疫血清多克隆抗体细胞抗原多克隆抗体单克隆抗体B淋巴细胞细胞克隆杂交瘤技术免疫动物抗原决定簇多种B细胞多克隆B细胞多克隆抗体单克隆B细胞单克隆抗体浆细胞浆细胞抗原抗体反应抗原抗体反应的概念:

抗原与抗体的反应具有高度特异性。通常一种抗原只能与其相应的抗体结合,同一抗原可具有多种不同的抗原决定簇,若两种不同的抗原分子具有一个或多个相同的抗原决定簇,则与抗体反应时可出现交叉反应。t免疫组织化学的基本技术1、石蜡切片脱蜡至水2、抗原修复3、3%H2O210min-PBS冲洗3min×3次4、加一抗60min-PBS冲洗3min×3次

5、加二抗15min--PBS冲洗3min×3次6、DAB显色3-10min--自来水冲洗7、苏木素复染、脱水、干燥、封片免疫组织化学的基本技术

免疫组织化学标本的取材、固定、切片及注意事项一、取材：（一）组织标本的取材

组织标本包括活体组织检查标本、手术切除和尸体解剖标本等。对于活体组织检查标本和手术切除标本，取材应在2小时内进行。

1、活体组织标本的取材：常见标本为口腔、喉、鼻咽、皮肤、

宫腔和各种内窥镜钳取的组织。2、手术切除标本的取材

由于免疫组化技术的组织块大小要适中，一般在1cm×1cm×0.2cm至2cm×1cm×0.2cm之间，这样有利于固定剂能快速渗出到组织内。为充分保存组织的抗原性，标本离体后应立即处理，可以速冻后制作冰冻切片，也可固定后制作石蜡切片。如不用迅速制片，可贮于液氮或-70℃低温冰箱备用。

（二）细胞标本的取材

1、印片法：常用于活检和手术切除标本。优点：简便省时，细胞抗原保存良好。缺点：细胞分布不均匀，细胞重叠

2、穿刺法：常用于实质器官病变区的细胞采集，如肝、肾、肺、淋巴结、软组织等。

3、沉淀法：

常用于胸水、腹水、尿液、脑脊液等体液多细胞少的标本。

二、固定目的：是使细胞内蛋白质凝固，以保持细胞和组织的固有形态和结构，更重要的保存组织或细胞的抗原，防止抗原破坏和弥散。（一）常用的固定剂

1.醛类固定剂：特点：对组织的穿透性强，收缩性小。

（1）甲醛固定液：包括10%甲醛液、10%中性甲醛液和10%中性缓冲甲醛液等。固定时间不宜超过24小时（2）4%多聚甲醛磷酸缓冲液：适用于光学显微镜下免疫组化研究。（3）戊二醛-多聚甲醛缓冲液：适用于光镜、电镜免疫组化研究。

(4)Bouin液：比单独醛类固定更适合免疫组化。

2、丙酮及醇类固定剂：（1）乙醚（或氯仿）与乙醇等量混合液：是理想的细胞固定剂。（2）Carnoy液：适用于癌基因、抗癌基因蛋白等抗原固定。（3）丙酮：适合于冰冻切片和细胞涂片的后固定，抗原保存较好，且时间短，切片在冷丙酮中的固定仅需要5~15分钟。

3、其他固定剂（1）碳二亚酰胺-戊二醛液：适用于多肽类激素的固定。（2）Zenker液：对免疫球蛋白固定后染色效果好，固定时间2-4h.染色前应用0.5%碘液脱汞。（二）常用的固定方法1、浸入法：将组织或切片浸泡在固定液内2、注射、灌注固定法3、微波固定法（三）固定的注意事项1、固定剂的选择：多按HE常规处理组织和细胞，固定剂一般都是

10%中性缓冲甲醛液、可用于大多数抗原的保护。2、固定剂的量：一般不少于组织体积

4--5倍。3、固定后处理：必须充分冲洗。

三、切片

要求切片薄而平整一般厚度在3~5微米之间石蜡切片。（一）石蜡切片：与常规切片制备基本相同。（二）冰冻切片：

优点：能够较完整地保存抗原，尤其是细胞膜抗原、受体抗原、酶及多肽类抗原等，并且快速、方便。缺点：冰冻时，组织中水分易形成冰晶，影响抗原定位。载玻片的防脱片的处理

一、载玻片和盖玻片的处理新的载玻片先用流水冲洗，洗衣粉或肥皂水浸泡，再以流水充分冲洗。最后用蒸馏水清洗。再浸泡95%乙醇内，干燥后备用。

盖玻片可直接浸泡于无水乙醇中，干燥后备用。

二、玻片的防脱片处理（一）树脂胶（二）明胶:甘油明胶甲醛明胶铬矾明胶（三）多聚赖氨酸（PLL）多聚赖氨酸0.5g，加蒸馏水100ml，配成浓度0.5%的储存液，-20℃环境下可长期保存.使用时按1：10稀释配成工作液。将清洁载玻片在工作液中反复蘸几下，分散晾干备用。

(四）APESAPES是一种新型粘片剂，是通过化学作用改变玻璃表面的分子结构，使组织切片牢固的帖在载玻片上，不易脱落。使用时用丙酮按1：50稀释

免疫组织化学常用液体及抗体的配制一、常用液体的配制（一）0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）pH7.2试剂：NaH2PO4·2H2O9.0gNa2HPO4·12H2O64.5g

NaCl160g

蒸馏水加水至2000ml

(二)0.5mol/LTris-HCI缓冲液pH7.6

试剂：Tris(三羟甲基氨基甲烷）60.57g

1mol/LHCl420ml

蒸馏水加至1000ml

配制：先将少量蒸馏水溶解Tris，加入HCl

后，将pH值调至7.6,然后加蒸馏水至1000ml,置于4℃冰箱中保存备用。

(三)0.05mol/LTris-HCI缓冲液(TBS)pH7.6试剂：

0.05mol/LTris-HCI缓冲液100mlNaCl8.5～9.0g

蒸馏水加至1000ml配制：先用蒸馏水少许溶解NaCl,再加

Tris-HCI缓冲液(pH7.6),最后加蒸馏水至1000ml,充分摇匀使终浓度

0.05mol/L

（四）柠檬酸盐缓冲液储存液：A:0.01mol/L柠檬酸：称取21.01g柠檬酸溶解于1000ml蒸馏水中。B:0.01mol/L柠檬酸钠：称取29.41g柠檬酸钠溶解于1000ml蒸馏水中。工作液：取A液9ml和B液41ml分别加入450ml蒸馏水中，调节pH值为6.0±0.1，浓度为0.01mol/L。

柠檬酸盐缓冲液主要用于抗原修复。

（五）3%过氧化氢甲醇液试剂：30%过氧化氢H2O2

10ml

甲醇90ml

3%过氧化氢甲醇液处理标本，可以封闭内源性过氧化物酶的活性。

二、抗体的稀释和保存

(分浓缩型与即用型)（一）抗体的稀释1、影响抗体稀释度的因素（1）抗体的浓度（滴度）：抗体的浓度越高，稀释度就越高。（2）非特异性蛋白质的含量：（3）孵育时间：（4）免疫组织化学染色方法：

2、抗体最佳稀释度的测定方法：用已知阳性抗原切片，进行免疫组织化学染色，将其阳性强度与非特异性背景染色强度以“+”的多少表示。在某一稀释度下特异性染色较强且无背景着色，是较理想的稀释度。（1）直接测定法：在其他条件已知的情况下（如二抗或三抗的稀释度），用于检测第一抗体的最佳稀释度。

表3-1直接测定法————————————————————一抗稀释度特异性染色强度非特异性背景染色强度

1：50++++++1：100++++++1：200++++++1：400++++1：500++-

阴性对照--_____________________________________

（2）棋盘（方阵）测定法

表3-2棋盘稀释法——————————————————二抗稀释度一抗稀释度

____________________________1:501:1001:2001:400_________________________________________1:100+++++(++)++++(+)+++(-)+(-)1:200++++(+)+++(-)++(-)++(-)1:400++++(-)+(-)(-)(-)———————————————————————————注：括号内为背景着色强度

抗体稀释液的配制：取0.05mol/LpH值为7.4的TBS100ml,加温到60℃,再加入0.1g明胶，搅拌溶解后，冷却到室温，加入1.0g牛血清白蛋白、NaN30.2g溶解后，过滤分装，4℃保存.(二）抗体的保存

对于新购进的浓缩抗体，可按厂家提供的效价，按50μｌ或100μｌ为一单位分装,并注明标记（批号、名称、效价、量），密封后放入-20℃～40℃冰箱中保存备用,一般可保存1-2年。

三、显色剂的种类及配制

(一）3,3`-二氨基联苯胺(DAB)配制：取25mgDAB溶于50mlTBS(0.05mol/LpH7.6)中，完全溶解后，用滤纸过滤沉淀。显色前再加入适量H2O2

阳性部位呈棕色，一般以苏木精复染配制DAB时注意：（1）DAB有致癌性，可诱发皮肤癌和膀胱癌（2）DAB一定要新鲜配制（3）DAB的浓度不宜太高。

(二）3-氨基-9-乙基卡巴唑（AEC）取4mgAEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1mol/LpH5.2的醋酸缓冲液，然后加入适量H2O2，过滤去掉沉淀物。阳性部位呈红色，苏木精或亮绿复染抗原的修复一、抗原修复的原因甲醛固定剂使组织蛋白内或蛋白质之间发生交联，封闭了许多抗原决定簇，影响了抗原的定位，使染色结果不明显或失败。抗原修复或暴露是将固定时分子之间形成的交联打开，恢复到原有空间。二、抗原修复的机制

1、化学反应

2、热反应

3、微波的高速震荡效应

三、常用的抗原修复的方法

（一）酶消化方法

1、胰蛋白酶消化方法浓度一般是0.05%~0.1%。主要用于细胞内抗原的修复。

2、胃蛋白酶消化方法浓度一般为0.04%

主要用于细胞间质抗原的修复。

3、尿素消化方法浓度为3mol/L,37℃消化5分钟。

主要用于单克隆抗体所做的石蜡切片。t

（二）物理化学方法

1、单纯加热方法

2、高压加热方法：

3、微波加热方法t抗原修复前抗原修复后抗原修复的注意事项任何修复方法都不能使组织片干燥；加热必须达到规定的温度；加热后应放置足够的时间使之冷却。抗原修复效果取决于缓冲液的组成成分及pH值。实践中证明柠檬酸缓冲液效果较好，最常使用。

各种抗原修复方法的评价

（一）酶消化方法

（二）物理化学方法

各有优缺点，应注意各公司的抗体产品的说明书。免疫组织化学的染色

常规取材、固定、切片免疫组化的染色显色剂的种类

(一）3,3`-二氨基联苯胺(DAB)

阳性部位呈棕色

(二）3-氨基-9-乙基卡巴唑（AEC）阳性部位呈红色t显色反应

HRP+H2O2

H2O+O

DABAEC

HRP+H2O2

H2O+O

DABAEC

棕色

红色

免疫组化染色后，必须对切片进行复染，更能衬托出组织形态结构，便于对结果分析。石蜡切片常用苏木精复染冰冻切片常用甲基绿免疫金银法染色常用核固红。E-cad（+）DAB显色苏木精复染P-185（+），AEC显色角蛋白，DAB显色，甲基绿衬染丙型肝炎病毒,AEC显色苏木精复染免疫组织化学的染色方法

免疫组织化学的染色方法有很多，根据标记物的种类不同可分为三大类。即:免疫荧光法、免疫酶标法、免疫胶体金银法。每一类染色方法均可分为直接法、间接法。免疫荧光法在肾脏、皮肤的免疫性疾病的诊断上，具有重要价值。目前，逐渐被免疫酶标法所代替。免疫酶标法

常用的染色方法:

一步法--直接酶标法二步法:间接酶标法

EnvisionSystem法

SP二步法三步法:PAP法、ABC法四步法:酶桥法、ASPAPAP法五步法:双PAP法

免疫酶标染色方法及原理

(以辣根过氧化物酶(HRP)

和二氨基联苯胺(DAB）显示剂为例)

直接酶标法（一步法）：

将酶标记在特异性抗体上，然后与组织中的相应抗原结合形成抗原---特异性抗体---酶复合物，再与显色剂反应，以显示抗原所在部位t

免疫酶标染色方法及原理

(以辣根过氧化物酶(HRP)

和二氨基联苯胺(DAB）显示剂为例)

间接酶标法（二步法）：先用未标记的特异性抗体（一抗）与组织中的相应抗原结合，形成抗原抗体复合物，再用酶标记的抗特异性抗体的抗体（二抗）与特异性抗体结合，形成抗原--特异性抗体--酶标抗体复合物，最后用显色剂，显示抗原所在部位。

EnvisionSystem法

多重免疫组织化学染色方法1、染色原理：是利用各种染色方法之间所利用的标记物及显色剂的不同而加以组合，在同一张切片上，进行多种免疫组化染色的方法。2、染色方法：同前。3、应用：最普遍的是双重免疫组化染色，即用HRP-DAB与碱性磷酸酶AP-red显色系统染色方法进行组合。P504S胞浆呈棕色P63核呈黑色前列腺癌双重染色，EMA胞膜呈红色，Ki-67核呈蓝黑色

免疫组织化学染色结果的判断原则1、首先应观察常规石蜡切片，形成初步诊断意见并选好靶细胞2、每一批染色都应设置阳性和阴性，这是正确判断染色结果的前提。3、抗原的表达必须在靶细胞或组织的特定部位上，才能视为阳性，不在抗原特定部位上的阳性颗粒不能视为阳性表达。t4、阴性结果不能视为抗原不表达。阴性的原因很多，从固定到制片以及细胞的分化程度均可影响着色。5、当免疫组织化学染色结果与HE诊断不相符或发生矛盾时，应以HE诊断为标准，而不能用免疫组化染色结果代替HE诊断。

免疫组织化学染色过程中的注意事项（一）正确设置阳性、阴性对照

免疫组化染色常用的对照有阳性对照、阴性对照（空白对照、替代对照）吸收实验、抑制实验和自身对照等。1、阳性对照：是指用已经被证实了含有靶抗原的组织切片与待检组织切片一起做免疫组织化学染色，结果为阳性，称为阳性对照。每一次都应设置阳性对照。

2、阴性对照：是指已知不含靶抗原的组织切片与待检组织切片一起做免疫组织化学染色，结果为阴性，称为阴性对照。阴性对照主要包括空白对照和替代对照两种。每一次染色均应设置阴性对照。设置阴性对照的方法有：

PBS液（空白对照）或用动物非免疫血清（替代对照）代替一抗进行染色，结果为阴性。

（二）时间

在免疫组化染色时，除严格按照操作规程进行外，还应严格控制各步的染色时间。每个实验室都应根据自己实验室的特点，逐步摸索出适合自己实验室的每一步骤的染色时间。（三）显色

应在显微镜下控制显色，当阳性颗粒显示较清楚，而背景清晰无着色时，即可终止显色。

（四）温度在免疫组化染色过程中，温度也直接影响免疫组化的染色结果。（五）湿度

在免疫组化染色过程中，应滴加足够量的稀释好的抗体或复合物，将组织块完全覆盖，并将切片放入湿盒内，湿盒下面加入适量温水，表面密封盖好，在湿盒内进行孵育，确保组织切片表面湿润，以免抗体蒸发。

常用免疫组织化学染色方法的评价

1、常用染色方法敏感性比较

各种免疫组化染色的方法和使用的标记物的不同，敏感性也不相同。一般胶体金标志的染色方法敏感性比酶标记的染色方法敏感性高。

2、常用染色方法的优缺点（1）直接法：

优点：简单、快速、特异性强，背景非特异性染色轻。缺点：敏感性低。（2）间接法：

优点：敏感性比直接法高，且一种酶标记抗体可与多种特异性一抗配合检测多种抗原缺点：敏感性比酶桥法、PAP法低。

免疫组织化学染色结果的判断原则1、首先应观察常规石蜡切片，形成初步诊断意见并选好靶细胞2、每一批染色都应设置阳性和阴性，这是正确判断染色结果的前提。3、抗原的表达必须在靶细胞或组织的特定部位上，才能视为阳性，不在抗原特定部位上的阳性颗粒不能视为阳性表达。4、阴性结果不能视为抗原不表达5、当免疫组织化学染色结果与HE诊断不相符或发生矛盾时，应以HE诊断为标准，而不能用免疫组化染色结果代替HE诊断。

假阳性、假阴性及背景着色的原因1、出现假阳性染色的原因（1）抗体浓度过高（2）抗体特异性较差（3）内源性过氧化物酶封闭不彻底。（4）由于抗原的弥散或被肿瘤细胞吞噬。

(5)抗原的例外表达等。

出现假阴性染色的原因（1）抗体稀释不当，浓度过低。（2）抗体失活或抗体效价过低，敏感性较差。（3）标本处理不当，致使抗原丢失或破坏过多。如切片长期保存抗原会丢失。（4）抗体孵育时间过程短，致使抗体与抗原不能充分结合，导致染色呈现假阴性。室温保存半年切片染色新切片对照染色

（5）染色过程中，组织切片未放入湿盒内，组织表面过分干燥。（6）染色操作步骤不正确，随意省略步骤等。（7）冲洗步骤、PBS缓冲液的pH值对染色结果有影响。（8）抗体与检测试剂盒不匹配。Ki-67:PBSpH6.0冲洗染色Ki-67:PBSpH7.6冲洗染色

3、引起背景染色的原因有很多，主要有以下几方面：（1）组织标本陈旧，固定不及时或固定时间过长。（2）组织切片太厚，脱蜡不彻底。（3）组织切片处理不当，防脱片剂浓度过高。（4）内源性过氧化物酶封闭不完全，导致内源性酶显色。

（5）所用的动物非免疫血清与抗体不匹配。（6）抗体浓度过高。（7）抗体特异性较差，与组织内某些抗原或其他成分发生交叉反应或非特异性染色。（8）PBS液冲洗不彻底。（9）标记物质量较差，纯度不够，游离的标记物过多等，均可导致背景着色。（10）底物染色时间过长。免疫组化应用中的注意事项正确认识设置对照的意义正确判断免疫组化的染色结果正确分析假阳性、假阴性的原因正确认识抗原的“例外”表达正确认识抗原的联合表达

正确应用双重互补及反正法t抗原的“例外”表达与联合表达抗原的“例外”表达是指在正常情况下或从理论上讲不应该为阳性的抗原而出现了阳性表达的现象。如CK不仅可表达在上皮组织，而且还可表达在非上皮组织。联合表达即一种细胞可表达多种抗原。如肺癌细胞可同时表达CK,VIMNF,DES。t双重互补及反正法

恶性黑色素瘤阳性阴性

HMB45CKS-100EMAVIMLCA

恶性黑色素瘤HEVIMHMB45CK免疫组化检查流程镜检HE染色切片确定待检靶细胞（待检抗原）选择决定用哪几种相应抗体免疫组化染色镜检免疫组化染色结果中间丝的特异性组织表达

不同的中间丝有其特异的组织分布，这种特异分布是比较稳定的，即正常组织及其相应肿瘤组织都保持相同的中间丝。基于这一理论，中间丝作为组织起源的标记，可识别正常组织及其肿瘤。代表性的最有五种抗原

１、角蛋白（CytoKeratin,CK）

２、波纹蛋白（Vimentin,Vim）３、结蛋白（Desmin,Des）４、神经丝（Neurofilament，NF）５、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）

(GlialFibrillaryAcidicProtein）

中间丝的特异性组织表达

CKVimDesGFAPNF

上皮组织＋

间叶组织＋

肌组织＋

神经胶质＋

神经元

＋

常用抗体分类上皮细胞及其肿瘤标记物(抗体)间叶组织及其肿瘤标记物淋巴造血细胞标记物神经和内分泌细胞标记物癌基因蛋白标记物其他标记物:病原、激素、激素受体、细胞增殖活性等标记物

常用的标记物１、上皮细胞及其肿瘤标记物:

（１）细胞角蛋白（CK）位于上皮细胞及其肿瘤细胞的胞浆内,可用于鉴别上皮性和非上皮性细胞及其肿瘤。如未分化癌与淋巴瘤、癌与恶性黑色素瘤、癌与肉瘤的鉴别。tHECK正常鳞状上皮NPCNpc:CKHECK正常腺上皮CK正常腺上皮低分化癌CK低分化癌淋巴结转移癌CK淋巴结转移癌CK（２）甲胎蛋白(AFP）

（－fetoprotein）

是肝细胞癌的一种重要标记物。在卵巢或睾丸的内胚窦瘤、胚胎性癌的癌细胞中亦有表达。

t肝细胞肝癌HEAFPHEHE肝细胞肝癌AFPAFP肝细胞癌内胚窦瘤CKAFPHE胚胎性癌AFP（３）EMA抗原

(EMA）

（epithelialmembraneantigen上皮膜抗原）

主要用于检测内脏上皮及其腺癌,优于CK。

EMA正常腺上皮肠腺癌肠腺癌EMA（4）前列腺特异性抗原(PSA)(ProtateSpecificAntigen):

主要用于检测前列腺增生和前列腺癌,对转移性前列腺癌的确诊特别有意义。

tHEPSA正常前列腺前列腺癌PSA前列腺癌HE２、间叶组织及其肿瘤标记物：

（１）波纹蛋白（Vim）:

主要位于间叶细胞及其肿瘤细胞的胞浆内，是间叶细胞及其肿瘤的特异性标记物。常与细胞角蛋白配对使用，鉴别癌与肉瘤、恶性黑色素瘤与癌、未分化癌与淋巴瘤等肿瘤。

tVIM正常纤维组织纤维肉瘤VimHE（２）结蛋白（Des）:

结蛋白是平滑肌、骨骼肌及其肿瘤的特异性标记物。主要用于标记平滑肌、横纹肌及其肿瘤；对一些未分化的肿瘤可与其他标记物合用进行鉴别诊断。

tDes正常肠壁平滑肌平滑肌肉瘤平滑肌肉瘤Des

（３）肌动蛋白(Actin)

广泛分布于各种类型的肌细胞中，对肌源性肿瘤特异性强,敏感性更高。

平滑肌型的肌动蛋白（SMA）：主要用于平滑肌源性肿瘤的诊断。对一些外分泌腺的肌上皮细胞和肌上皮瘤有较高特异性。

Act正常肠壁平滑肌平滑肌肉瘤HEVIMACT平滑肌肉瘤SMA3、淋巴造血细胞标记物（１）

CD45（LCA）:

全白细胞共同抗体只存在于所有的造血细胞中，不存在于非造血组织中。是区别淋巴瘤（/白血病）与非造血组织肿瘤的一个良好标记物。tLCA肠粘膜淋巴小结（２）

CD3CD45RO

T细胞标记抗体（３）

CD20CD79a

B细胞标记抗体

(4)CD15CD30Hodgkindisease标记抗体t正常淋巴结HECD20CD3CD3HE

T细胞淋巴瘤B细胞淋巴瘤CKHECD20HodgkindiseaseCD154、神经和内分泌细胞标记物

（１）S-100蛋白（S-100

）

广泛分布于中枢及外周神经系统，还分布于软骨细胞，脂肪细胞，肌上皮细胞等，为神经外胚叶肿瘤的一种有用的标记物。在良性神经鞘瘤、神经纤维瘤以及几乎所有的黑色素瘤都表达。

t神经鞘HES-100神经鞘瘤Benign

神经鞘瘤

Malignant

s-100S-100恶性黑色素瘤（2）黑色素瘤(HMB45)

对黑色素瘤特异性更强。

H.E恶性黑色素瘤HMB45HMB45HE恶性黑色素瘤恶性黑色素瘤HES-100HMB45CK（３）胶质纤维酸性蛋白

(GFAP):

存在于星形细胞,室管膜细胞,神经鞘细胞,视网膜细胞。

胶质细胞GFAP胶质细胞瘤正常胶质细胞（４）嗜铬素A(CgA)

(chromograninA)(5)突触素

(SY)

(synaptophysin)

主要检测神经内分泌细胞及其肿瘤。

突触素

(SY)嗜铬素A(CgA)嗜铬细胞瘤HECg-A胃类癌CKSYHE直肠类癌CKHESY

(6)

神经元特异性烯醇化酶

(NSE)（NeuronSpecificEnolase)

只存在于神经原细胞和神经内分泌细胞，因此在髓母细胞瘤、嗅母细胞瘤、神经母细胞瘤、节细胞神经瘤、神经内分泌细胞瘤、类癌等有表达。神经元特异性烯醇化酶NSEHE

5、癌基因蛋白标记物

（１）C-erbB2（P185）:

是一种细胞来源癌基因，其蛋白产物是P185，它们在多种腺癌细胞中均有超量表达，可作为判断乳腺癌预后的一个指标。

C-erbB-2乳腺癌＋＋＋＋＋＋＋＋（２）抗癌基因

P53（突变）:

Ｐ５３蛋白为核蛋白，主要表达在恶性肿瘤细胞，Ｐ５３的表达与细胞分化有关，分化越差，Ｐ５３表达越高，恶性程度越高。

P53乳腺癌

６、其他标记物

（１）病原标记物:EB病毒(EBV)乳头状瘤病毒(HPV)乙型肝炎核心抗原(HBCAg)乙型肝炎表面抗原(HBSAg)等用于检测相应的病原HPVHPV尖锐湿疣H.EHBsAgHBsAgHBsAg乙型肝炎表面抗原乙型肝炎核心抗原腮腺巨细胞包涵体病毒鼻NK/T细胞淋巴瘤：EBV（２）激素标记物胰岛素胰高血糖素降钙素甲状腺素胃泌素血清素生长激素等

用于检测相应的激素。

tGlucagonInsulin胰岛细胞HECalcitonin降钙素Ccell髓样癌甲状腺髓样癌HECKTHG甲状腺癌颅内转移颅内占位性病变HCG绒毛ACTH类癌（３）激素受体：

雌激素受体(ER)

孕激素受体(PR)

雄激素受体(AR)

预测肿瘤对激素治疗的反应及预后。

tH.EERPRBREAST乳腺癌（4）肿瘤细胞增殖活性的常用标记物增殖细胞核抗原(PCNA)单克隆抗体(Ki-67)表皮生长因子受体(EGFR)核仁区嗜银蛋白(AgNOR)

检测细胞增殖程度,对确定肿瘤的良、恶性和恶性程度有价值。t胃腺癌Ki-67淋巴瘤精原细胞瘤PCNA

常见肿瘤的常用的免疫组化鉴别要点

(１)未分化肿瘤免疫组化

淋巴瘤癌肉瘤恶黑

LCA+

－－－

CK－+

－－

S-100－－－+

Vim+

－+

+

NSE－－－+

HECKLCA非霍奇金淋巴瘤

癌肉瘤淋巴瘤神经内分泌瘤恶黑

CK

+++

++Vim

++++Des

++LCA

+++

S-100++

SY

+++

HMB45++(2)原发灶不明肿瘤的鉴别PSA:前列腺癌THG:甲状腺滤泡癌HCG:绒癌，生殖细胞癌CEA:大肠/胃癌AFP:肝癌，生殖细胞癌CT

:甲状腺髓样癌(3)几种特异性抗体t(4)淋巴瘤的免疫组化标记

CD20CD3CD15CD68B淋巴瘤+

–+/–

–T淋巴瘤–+

+/–

–组织细胞瘤

–+/––+

何杰金氏病–/+–+

–常用免疫组化鉴别表CK+

Vim-CK+

滑膜肿瘤间皮肿瘤Vim+

上皮样肉瘤

CK-

NSE+Vim-

NF+/-Des+───肌源性肿瘤

CD34+───血管源性肿瘤CK-

S-100+─黑色素瘤、脂肪肿瘤、神经鞘瘤

Vim+LCA+──淋巴、造血系细胞肿瘤

GFAP+─胶质细胞肿瘤

CD68+──组织细胞肿瘤

上皮源性肿瘤节细胞神经母细胞瘤CD3ActHET细胞淋巴瘤KrukenbergtumorCKHETHG肝内肿瘤

滑膜肉瘤HECKVIM估计肿瘤病人的预后估计肿瘤病人的预后

结果预后ER/PR

阳性好AR

阳性好P185阳性

差PCNA

高指数差P53

高表达差估计乳腺癌预后

低危高危ER/PR

阳性阴性P185

低表达高表达P53

阴性低%阳性高%PCNA低%高%t对治疗的指导ERPR

及其功能

雌、孕激素由卵巢和胎盘产生，通过血循环到靶器官（如子宫、乳腺）与靶器官中的细胞浆内的特异蛋白结合，从而起调节细胞代谢，控制其生长发育的作用。这种能与雌、孕激素特异性结合的蛋白分别称为雌激素受体（ＥＲ）和孕激素受体（ＰＲ）。乳腺癌与

雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)

检测ER、PR的临床意义1.估计乳腺癌的予后。

ER、PR阳性者予后较阴性者好。2.合理进行内分泌治疗的依据。

ER、PR阳性者内分泌治疗有效率高:。Tamoxifen的治疗机制

一般认为

Tamoxifen是一种雌激素竞争性抑制剂，通过阻断ER与雌激素结合达到治疗目的。但它又是一种化疗增敏剂，能增强某些癌细胞对化疗药的敏感性。C-erbB-2(P185、Her-2