X年版中国药典微生物检验主要增修订内容

2010年版中国药典

微生物检验主要增修订内容1增修订背景药品微生物限度检查、无菌检查各论标准化的研究药品微生物限度检查用培养基灵敏度检查方法的研究中国药典与国外药典细菌计数方法的比较离心集菌法标准化的研究贴膏剂微生物限度检查法的研究大肠菌群检查用培养基的比较白色念珠菌检查法的研究防腐剂效力测定方法的研究药品微生物检验替代方法验证的方法研究2浙江所承担的主要工作科研工作药品微生物检验替代方法验证的方法研究药品微生物限度检查、无菌检查各论标准化的研究药品微生物限度检查用培养基灵敏度检查方法的研究中国药典与国外药典细菌计数方法的比较大肠菌群检查用培养基的比较附录增修订工作药品微生物检验替代方法验证指导原则3主要成果药品微生物限度检查和无菌检查的各论标准化修订了无菌检查法增修订了微生物限度检查法修订了一个指导原则－灭菌法新增了四个指导原则抑菌剂效力检查法指导原则药品微生物实验室规范指导原则微生物限度检查法应用指导原则药品微生物检验替代方法验证指导原则4各论标准化微生物限度检查各论富马酸酮替芬滴鼻液、聚维酮碘溶液5各论标准化无菌检查各论亚叶酸钙注射液注射用泮托拉唑钠复方庚酸炔诺酮注射液甲硝唑注射液注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠

6无菌检查法前言部分培养基灵敏度检查稀释液、冲洗液等方法验证薄膜过滤法培养及观察结果判断表1、表2和表37前言部分规定了防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出规定了日常检验还需要对环境进行监控对无菌检查的人员资质提出了要求8培养基删除了硫乙醇酸盐流体培养基用于培养好氧菌、厌氧菌的规定删除了改良马丁培养基用于培养真菌的规定9灵敏度检查修订了黑曲霉的孢子悬液制备方法，规定应使用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液稀释规定了稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限10稀释液、冲洗洗液等规定可根据供供试品的特性性，选用其他他经验证的适适宜的溶液作作为稀释液、、冲洗液11方法验证标准菌种的选选择上，删除除了铜绿假单单胞菌，增订订了大肠埃希希菌明确规定了薄薄膜过滤法验验证时，应取取每种培养基基规定接种的的供试品总量量用于过滤12薄膜过滤法增订了抗生素素供试品应选选择低吸附的的滤器及滤膜膜的规定对每片滤膜的的总冲洗量进进行了规定，，不得过1000ml修订了无菌气气（喷）雾剂剂供试品的检检验方法，规规定冰室的温温度应至少为为-20℃对装有药物的的注射器供试试品的检验方方法进行了详详细的规定13培养及观察对于培养14天后，不能能从外观上判判断有无微生生物生长的情情况，删除了了可划线接种种于斜面培养养基上的规定定，同时删除除了可根据斜斜面是否有菌菌生长而判断断的规定14结果判断增订了阳性对对照管和阴性性对照管的实实验结果对于于整体实验结结果判断的作作用15表1、表2和和表3表1修订了注释项项，对供试品品容器装量不不够接种两种种培养基的情情况，明确规规定最少检验验数量应加倍倍表2修订了表格名名称，明确了了该表格用于于确定液体制制剂的最少检检验量修订了注释项项，对供试品品容器装量不不够接种两种种培养基的情情况，明确规规定最少检验验数量应加倍倍表3修订了表格名名称，明确了了该表格用于于确定固体制制剂的最少检检验量修订了注释项项，对供试品品容器装量不不够接种两种种培养基的情情况，明确规规定最少检验验数量应加倍倍16微生物限度检检查法前言及检验量量供试液制备计数实验的培培养基适用性性计数实验的方方法验证计数实验的操操作方法控制菌检查的的培养基适用用性控制菌检查的的方法验证控制菌检查的的内容标准体系17前言及检验量量前言中修订了了控制菌检查查的温度，规规定与细菌计计数实验温度度相同，均为为30～35℃前言中增订了了对于特殊品品种可以最小小包装单位报报告的规定检验量中对要要求进行沙门门菌检查的供供试品，其检检验量应增加加20g或20ml的规规定18供试液制备增订了贴剂供供试品的制备备方法修订了离心沉沉淀法，删除除了高速离心心的规定，并并对该方法的的使用范围进进行了限定19计数实验的培培养基适用性性该部分内容均均为新增规定了该内容容的应用范围围采用标准菌种种计数，回收收率以及形态态比较的判定定方法标准菌种为：：大肠埃希菌菌、金黄色葡葡萄球菌、枯枯草芽孢杆菌菌、白色念珠珠菌、黑曲霉霉；规定了稀稀释后的工作作菌液的保存存条件和保存存期限引入了对照培培养基的概念念判定的依据：：回收率大于于70％，且且形态一致20计数实验的方方法验证增订了常见干干扰物的中和和剂或灭活方方法的参考表表格对采用多种方方法仍无法得得到满意验证证结果的情况况，提供了两两种办法允许使用更高高稀释级的供供试液进行方方法验证实验验，并以该稀稀释级供试液液作为最低稀稀释级供试液液进行供试品品检验允许选择回收收情况最接近近要求的方法法和试验条件件进行供试品品的检验21计数实验的操操作方法平皿法删除了应取2～3个连续续适宜稀释级级供试液进行行检验的规定定细菌培养时间间延长为3天天，霉菌、酵酵母菌培养时时间延长为5天；规定必必要时均可延延长至7天菌数报告规则则进行了修订订：计数不再再设置下限；；以最高的平平均菌落数乘乘以稀释倍数数的值报告供供试品中所含含的菌数薄膜过滤法滤膜直径调整整为约50mm，并规定定若采用其它它直径的滤膜膜，冲洗量应应进行相应的的调整总冲洗量规定定不得超过1000ml22控制菌检查的的培养基适用用性该部分内容均均为新增规定了该部分分内容的应用用范围以及检检查的项目采用标准菌种种比较的判定定方法根据培养基的的用途不同，，分为增菌培培养基的促生生长能力、固固体培养基的的促生长能力力、培养基的的抑制能力、、固体培养基基的指示能力力、液体培养养基的指示能能力等5种检检查方法在检查中引入入了涂布接种种的概念23控制菌检查的的方法验证删除了阴性菌菌对照组的概概念24控制菌检查的的内容所有的生化试试验均修订为为鉴定试验大肠菌群的培培养基进行了了修订，现改改用乳糖胆盐盐发酵培养基基梭菌的增菌培培养基修订为为梭菌增菌培培养基，删除除了庖肉培养养基增订了白色念念珠菌检查法法，并增订了了与之相关的的培养基25标准体系菌落计数单位位从“个”修修订为“cfu”阴道、尿道给给药制剂增订订了白色念珠珠菌控制要求求直肠给药制剂剂删除了大肠肠埃希菌的控控制要求26灭菌法前言湿热灭菌法过滤除菌法生物指示剂的的制备27前言修订了灭菌法法的定义，强强调灭菌法的的作用是使被被灭菌物品中中残存微生物物的概率下降降至某一预期期水平，从而而突出了灭菌菌不是绝对的的这一理念。。修订了无菌保保证水平的表表述方式，强强调其含义在在于物品中活活微生物的概概率降低至某某个可接受的的水平。明确确了对于最终终灭菌物品而而言，其微生生物存活概率率，即无菌保保证水平不得得高于百万分分之一。在选择确定灭灭菌工艺时，，增订了应考考虑灭菌后物物品的稳定性性的规定。28湿热灭菌法增订了选择湿湿热灭菌条件件时应综合考考虑的因素，，如灭菌物品品的热稳定性性、热穿透力力以及微生物物污染程度等等修订了F0值的概念，突突出了等效121℃标准准灭菌时间的的含义规定当选用F0值概念进行灭灭菌程序控制制时，除了对对灭菌程序进进行验证外，，还必须在生生产过程中对对微生物进行行监控，证明明其数量低于于设定的限度度对热不稳定物物品，强调应应在生产全过过程对产品中中污染的微生生物进行连续续监控，并防防止耐热菌的的污染。规定定这一类产品品的F0值一般不低于于8min，，删除了“如如产品的热稳稳定性很差时时，可允许湿湿热灭菌的F0低于8”的规规定。29过滤除菌法对过滤器孔径径的定义进行行了说明，强强调孔径与微微生物的截留留性能有关，，而不是平均均孔径的分布布系数根据滤器孔径径的定义，规规定用于最终终除菌的过滤滤器，必须选选择除菌级过过滤器，并应应提供截留实实验证明对过滤器的稳稳定性以及与与被过滤液体体的相容性进进行了规定，，明确过滤器器使用者具有有了解并评估估这些性能的的责任增订了滤膜完完整性测试的的标准，指出出该测试标准准应来自于相相关细菌截留留实验的数据据规定了过滤操操作的生产环环境－无菌环环境，将原标标准中的“建建议”修订为为“应”30生物指示剂的的制备规定生物指示示剂在制备完完成后，应测测定D值和孢孢子总数。31药品微生物实实验室规范指指导原则前言人员培养基菌种实验室的布局局和运行设备文件实验记录结果的判断32前言规定了该指导导原则用于指指导质量控制制指出制订实验验室规范的必必要性人员人员的专业背背景人员培训应覆覆盖仪器设备备操作、微生生物检验技术术和实验室生生物安全等应通过内部质质量控制、能能力验证或使使用标准菌株株等方法评估估检验人员的的能力33培养基培养基的制备备应按处方配制制培养基，也也可使用市售售的脱水培养养基配制培养基的的水应该是纯纯化水培养基灭菌一一般采用湿热热灭菌技术，，特殊培养基基可采用薄膜膜过滤除菌培养基应采用用验证合格的的灭菌程序灭灭菌。应对高高压灭菌器的的蒸汽循环系系统进行验证证，确保在一一定装载方式式下的正常热热分布应确定每批培培养基灭菌后后的pH值（（25℃下测测定）应对分装后的的培养基进行行质量检查，，并记录批数数量、有效期期及无菌情况况等信息34培养基的贮藏藏自配培养基应应标记名称、、批号、配制制日期等信息息，商品化的的成品培养基基应标记名称称、批号、生生产日期和失失效期等信息息。灭菌后的培养养基应尽快从从灭菌器内取取出，琼脂培培养基应防止止冷冻，容器器应密闭，防防止水分流失失；琼脂平板板宜临用新配配，如置冰箱箱保存，一般般不超过一周周，如需延长长，则应对保保存期进行验验证。固体培养基灭灭菌后只允许许再融化一次次，一般采用用水浴加热或或流通蒸汽的的方式，如使使用微波炉，，应避免过度度加热和水分分流失。融化化后的培养基基应置45～～50℃的水水浴中保温，，时间不得超超过8小时。。35培养基的质量量控制试验实验室应制订订培养基质量量控制程序所有配制好的的培养基均应应进行质量控控制试验培养基质量控控制的项目有有：pH值、、适用性检查查和定期的稳稳定性检查当培养基的配配制和灭菌程程序等均已验验证，则同一一批次的脱水水培养基的适适用性检查试试验可只进行行一次用于环境监控控的培养基须须特别防护，，用于关键区区域监控的培培养基宜双层层包装和终端端灭菌，以防防出现假阳性性36菌种菌种的来源：：已认可的国国内或国外菌菌种保藏机构构的标准菌株株，或与标准准菌株所有相相关特性等效效的商业派生生菌株由标准菌株复复活得到的为为标准储备菌菌株；应对标标准储备菌株株进行纯度和和特性确认；；建议采用冻冻干、液氮或或超低温保存存的方法使用标准准储备菌菌株制备备工作菌菌株冷冻菌株株解冻后后，不得得重新冷冷冻和再再次使用用工作菌株株的传代代次数不不得超过过5代代的定义义：活的的培养物物接种到到微生物物生长的的新鲜培培养基中中培养，，任何亚亚培养的的形式均均被认为为是转种种或传代代一次实验室应应建立文文件化的的程序管管理菌种种（从标标准菌株株到工作作菌株））37实验室的的布局和和运行实验室布布局的原原则：最最大程度度防止微微生物的的污染，，防止检检验过程程对环境境和人员员造成危危害实验室应应具备：：满足无无菌检查查、微生生物限度度检查和和无菌采采样等活活动的独独立设置置的洁净净室（区区）或隔隔离系统统；配套套的细菌菌（真菌菌）实验验室、培培养室、、准备区区、样品品接受和和贮藏区区、标准准菌株贮贮藏区、、污染物物处理区区和文档档处理区区等辅助助实验室室；上述述区域应应明确标标识应建立洁洁净区的的使用、、维护、、验证等等活动的的标准操操作规程程实验室的的操作应应避免交交叉污染染应建立实实验室生生物安全全的应急急控制预预案应建立微微生物实实验废弃弃物的处处理规程程38设备微生物实实验室所所用的仪仪器设备备应定期期校准，，并记录录培养箱、、冰箱等等重要设设备应确确保状态态正常，，并有措措施保证证其工作作的连续续性培养箱、、冰箱、、灭菌器器等应对对关键参参数进行行连续观观测和记记录，应应评估发发生的偏偏差对实实验结果果的影响响水浴锅、、培养箱箱、冰箱箱和生物物安全柜柜等应定定期清洁洁和消毒毒无菌器具具应有明明显的标标识39文件一般包括括以下内内容人员培训训与资格格确认设备验收收、检定定（校准准、期间间核查））和维修修设备关键键参数和和使用记记录（如如24小小时或7天记录录图）培养基制制备、贮贮藏和质质量控制制检验过程程中的关关键步骤骤数据记录录与结果果计算数据偏离离的调查查40实验记录录原始记录录至少包包括以下下内容实验日期期检品名称称实验人员员姓名实验方法法实验结果果偏差（存存在时））实验参数数（设备备、菌种种、培养养条件、、培养基基信息等等）签名41结果的判判断主要是对对不符合合标准的的结果进进行判断断导致不符符合的原原因实验过程程中的污污染样品污染染了超过过限度标标准的微微生物对前一种种原因，，应充分分考虑实实验室环环境、抽抽样条件件、样品品检验过过程等环环节如确定为为第一种种原因，，则应判判结果无无效，重重新进行行实验对重试应应加以监监控42微生物限限度检查查法应用用指导原原则制订该指指导原则则的目的的在于指指导对微微生物限限度检查查法的应应用，是是对该检检查法某某些未尽尽事宜的的说明主要对以以下内容容进行了了说明应采用产产品中可可能污染染的微生生物进行行表面活活性剂、、灭活剂剂、中和和剂等的的毒性试试验应选择操操作简便便、快速速的检验验方法，，避免对对微生物物的损伤伤；去除除抑菌作作用首选选薄膜过过滤法对离心法法限制使使用的原原因作出出了解释释43对培养基基适用性性实验中中提到的的对照培培养基作作出了说说明，并并指出由由中检所所提供