研究生分子生物学知识点

分子生物学学问点总结expressedbyagenome,〔相互作PPI〕〔染色〔胰肽酶〔指纹图谱〕-数据库搜寻鉴定蛋白性质子量，先经等电聚焦电泳(isoelectricfocusingIEF)，再经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳〔SDS-〕把简单的蛋白质成分分别。比较蛋白质组学：通过比较同一个体肿瘤细胞〔组织〕与正常细胞〔组织〕之间蛋白质在表达数量、表达位置和修饰状态上的差异，觉察与肿瘤发病或者进展有关的分子标记，用来作为肿瘤诊断的肿瘤相关蛋白。形成碎片离子。肿瘤血清蛋白质分析方〔tumorserologicproteome s，是从肿瘤免疫学观点动身建立的一种蛋白质组学和肿瘤免疫学相结合的方法。SERPA其试验过程如下：①双向电泳分别肿瘤组织〔细胞〕总蛋白质；②转膜；③建立westernblotting〔与患者或正常人血清反响；④软件分析确定差异反响的蛋白质斑点；⑤质谱鉴定和生物信息对肿瘤组织平行胶(replicagel)中相应的差异蛋白质点进展鉴定，筛选出肿瘤分子标志物；析该蛋白功能，争辩其在肿瘤进展中发挥的作用。蛋白质芯片：是将大量蛋白质分子按预先设置的排列固定于一种载体外表，形成微阵列，依据蛋白质分子间特异性结合的原理，构建微流体生物化学分析系统，以实现对生物分子的准确、快速、大信息量的检测。DNA/RNA建立细胞内外信号传递的简单网络。争辩方法主要有：蛋白质芯片技术目前常用蛋白质芯片有：SELDI-TOF-MS抗体芯片靶蛋白质芯片液相蛋白质芯片噬菌体呈现技术酵母双杂交系统免疫共沉淀〔Co-Immunoprecipitation胞内生理性相互作用的有效方法。SDS-1.制备凝胶试剂：丙烯酰胺〔单体；亚甲双丙烯酰胺〔胶联剂〕29130%〔引发剂引发交联N,N,N,’N’-〔TEMED〕〔SDS〔阴离子变性剂〕2.3.电泳缓冲液4.R2505.脱色液SDS-硝酸纤维素膜(nitrocellulosemembrane)上,在膜上进展固相免疫化学染色,原位显示蛋白质带,从而在分子量的根底上对蛋白质进展定性、定量分析。SDS-NCMDNA检测转移至膜上的蛋白质。细胞死亡形式Celldeath细胞坏死ApoptosisPCD:PCD:

表现细胞生命现象不行逆的停顿细胞构造和功能的不行逆丧失。细胞死亡并非与机体死亡同步。正常组织中也发生细胞死亡，它是维持组织机能和形态所必需的。细胞受到外来的急性的强力的致病因素作用下，细胞正常代谢活动被强行中断而引起的“意外”的、被动性死亡过程；只见于病理状况下。细胞肿胀，线粒体和内质网肿胀。核染色质随机降解呈絮状,蛋白合成削减。细胞膜、溶酶体裂开,细胞内容物流出,引起四周炎症指在肯定的生理和病理条件下，多细胞有机体为调控机体发育、维持内环境稳定，由基因把握并遵循肯定程序的细胞主动性死亡过程.又(programmedcelldeath,PCD).凋亡小体：胞膜皱缩内陷、反折，包围凝集断裂的染色质、胞质、细胞器等形成芽状、泡状突起并分别脱落，形成一些有膜包被，内涵物不外溢的小块，称凋亡小体〔apoptoticbody〕。多细胞生物体在生长发育过程中，细胞在基因调控下，依据肯定时空挨次发生的受到严格程序把握的PCD Apoptosis功能性概念发育学概念 形态学概念仅存在于发育细胞 可存在于发育和成体细胞大局部凋亡是PCD。PCD的最终结果是凋亡某些凋亡是非程序性。如细胞毒物诱导的凋亡1、确保正常生长发育、2、维持内环境稳定、3、防范功能;2亡小体内有构造完整的细胞器。DNA(DNAfragmentation)形成一些DNAnDNALadder，是推断DNADNA(DNAfragmentation)形成一些DNAnDNALadder，是推断DNA要标准〕有特异水解作用的，活性中心富含半胱氨酸的蛋白水解酶。Caspase1.细胞骨架蛋白和核纤层蛋白，导致细胞解体成凋亡小体DNACaspase-activatedDNaseCADCAD:CaspaseCaspaseICAD,CADDNA。灭活凋亡抑制物: 如Bcl-2、ICAD水解与DNA损伤修复相关的酶和蛋白质ADP〔poly-ADP-ribosepolymerase,PARP〕TNFR1FasCAR1NGFRDR3DR4、DR5〕Caspase8—Caspase3---细胞凋亡是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心，而且是细胞凋亡的调控中心。C〔Cyt.c〕和限制性核酸内切酶ROS细胞周期：从有丝分裂DNA复制前的一段时期，又称合成前期，此期主物质代谢著增大。这一期的主要意义在于为下阶段SDNA即DNA。DNAG2〔secondgap〕期为DNAM细胞周期蛋白或周期素〔Cyclins)：一类构造类似、能结合并调整CDK10，14〔cyclinA、B1-2、C、D1-3、E、F、G1-2、H、I、K。cyclins-CDKs-CKIsHIF-1a：几乎参与了对糖酵解每一步的调控；PI3K/Akt；Myc；P53CDK〔周期素依靠的蛋白激酶〕的调整亚基，分别在细胞周期的不同时期积存，激活CDK，使其具有催化关键底物的磷酸化修饰并调整其活性。参与细胞周期中不同时相的调整。G/SstartR(restrictionpoint)，1GDNADNA1细胞外环境是否适宜？细胞体积是否足够大？100，称为周期蛋白盒(cyclinboxCDKRNA(RNAinterference，RNAi)是将双链RNAmRNA试述CDK1活性的调控机制？认为CDK与周期素的结合以及保守的苏氨酸残基的磷酸化是较为重要的两种磷酸化修饰的激活作用：CDKCDK1〔p34cdc2〕Thr161CDK1CDK2CA〔CDKactivitingkinase，P34cdc2磷Thr14Tyr15Thr14Myt1，使Tyr15Wee1/Mik1Thr14Tyr15CDC25。DNADNADNADNA插入、缺失、重排。突变形式〔一DNAAT-TA；(地中海贫血)〔三〕重排：指DNADNA段可在位点颠倒方向反置〔倒位，也可在染色体之间发生交换重组。的的材料，是进化的分子根底DNADNA1.光修复、2.链断裂的直接重接、3.碱基的直接插入、4.转甲基作用切除修复(excissionrepair)：DNADNADNADNA板，合成一段正确配对的碱基序列来修补缺口。DNA〔1〕ATP，〔2〕修复〔3〕DNA。重组修复：DNA重组修复：DNADNA到子链缺口，进展重组修复。发生在复制后，故又称“复制后修复”DNA〔1〕伤部位，子链对应位点留下空缺；无损母链复制成完整双链。空缺与无损母链相应片段重组交换(RecBCD空缺转移到无损母链，有缺子链完整，损伤母链仍旧保存。DNA酶的催化下，重修复缺口;DNA.DNA式。SOS物种类繁多。信号转导通路★★★〔配体〕并能激发靶细胞产生特异生物效应的特别蛋白质分子。内侧，由三个亚基组成，一般称为经典G蛋白或大GG〔存在于不同的细胞部位的小分子量GGRas被觉察的小G〕SH2构造域：由约100个氨基酸残基组成，中心为反向平行的β片层构造，两侧为α螺旋。SH2介导信号分子与含磷酸酪氨酸蛋白分子的结合，并与磷酸化酪氨酸的磷酸基团结合。这种结〔motifSH2性。30.1.简述细胞膜受体的类型及其特征：SH355-75βSH330.1.简述细胞膜受体的类型及其特征：22.举例说明cAMP-PKA信号传递途径。cAMP肾上腺素ATPcAMP↑，cAMPPKA〔cAMP〕行使功能，PKA*肾上腺素3RTK－Ras－MAPKEGF、PDGF、IGF、FGF、VGEF〔与配体结合及受体二聚化/寡聚化使酶激活〕GDP，GDP，结合GTP，本身即被激活，RasGTPaseGTPGDPRasRasGTPG100sα有丝分裂原活化蛋白激酶或微管相关蛋白激酶属Ser/Thr激酶是承受转换与传递的信号并将其带入细胞核内的一类重要分子在多种受体信号传递途径中具有 关键性作用。抑癌基因〔tumorsuppressorgene：又称为抗癌基因负调控作用，而在两个等位基因都缺失p53、Rb、VHL、APCp53〔1〕cyclinA〔〕DNADNA起始复合物的结合〔3〕激活抑制细胞分裂的基因〔4〕抑制癌基因对细胞的转化。分子生物学相关试验:承受分子生物学的技术方法来分析受检者的某一特定基因的构造病因的诊断。分子生物学相关试验PCR-RFLP：多聚酶链式反响-限制性片段长度多态性分析PCR扩增、DNA〔长度多态性。主要用于核酸变异性分析与比较。PCR-SSCP〔诊断有无突变〕：聚合酶链反响-单链构象多态性分析(singlestrandconformationpolymorphismDNA经过变性处理，形成单链，由于序列不同，单链构象就有差异在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率不同有无突变不能鉴别全部的突变。PCR-southernblotDotblotPCR原体特异基因等方面的争辩及检测。依据碱基互补配对原则，将不同来源的序列互补单链的原位杂交：用核苷酸探针对特别的核苷酸挨次在其原位进展(insituhybridizationDNA、RNADNA(Southernblotting)：SouthernDNADNAPCR又叫体外基因扩增技术。利用人工合成的一对引物，在被扩组成体系：templateDNA.atleastacoupleofprimer〔长度：20bp碱基分布:均匀随机，G+C:40-60%;引物自身不存在发卡构造;两个引物间不能互补；引物与非特异靶区段同源性不能超过70%；5‘端可修饰〔酶切位点--便利基因隆；TaqdNTPsbuffer〔Mg2+。过程：①变性：将双链DNA〔95℃〕使之变性，DNA变成单链56℃DNADNADNATaq酶的特性：耐热(3’-5’外切酶活性)，相对简洁错误掺入c)合成速度:1200bp/min3’-A5’-3’realtimePCRDNAcDNA严密排列固定于单位面积的支持物上。1.〔生物学2.3.显微注射法。RNAi〔RNAinterference：是指在生物体细胞内，RNA〔dsRNA〕mRNA，因而抑制相应基因表达的过程。一种转录后水平的同源靶基因沉默，RNAiSiRNA基因工程一般步骤：1.分别目的基因〔化学合成、制备DNA组文库、PCR；2.DNA〔vector；3.连接；4.转化：b〕E.Coli:CaCl2真核细胞转化:micro-injection磷酸钙共沉淀法(贴壁细胞)electroporation(电穿孔,电激,电击)(悬浮细胞)基因枪(贴壁细胞/组织块)liposome(脂质体)5.筛选重组体：蓝白筛选(α-互补法)；养分缺陷互补法；抗生素抗性互补。genemanipulation表达的载体。Plasmid：质粒，指一种小环状DNA分子，存在与细胞染色体外，能够自主复制产生特定的功能。LncRNA：长链非编码RNA，由基因组编码产生，长度大于200个核苷酸，没有编码蛋白的力量。Palindrome5`-3`方向与其另一条链一样。CRISPRDNADNACas9蛋白有两个核酸酶构造域，可以分别切割DNA的两条单链。Cas9先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAN序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复DNADNA基因工程常用的酶：限制性内切酶、反转录酶、TaqDNApolymeraseQRT-PCR〔可以结合文献，举例说明。qRT-PCR〔荧光定量PC〕在PCR时监测整个PCR进展定量分析的方法。逆转录-聚合酶链反响，提取组织或细胞中的总RNAmRNAOligo〔dT〕或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA.GreenI〔举例说明。RecombinantDNATechnology--Processofcloning:Isolationoftargetgene〔分别目的基因〕Selectionandconstructionofvectors〔载体的选择和构建〕LigationoftargetDNAandvector〔载体与目的基因结合〕提取质粒，限制酶切割质粒，用限制酶从其他组织切割目的基因暴露粘性末端。载体与目的基因结合得到重组质粒，重组质粒导入E.coliTransformationoftargetgeneintoreceptorcell〔目的基因导入受体细胞〕Introduction:transformation(E.coli)transfection(Tumorcells)infection(Virus)。Screeningforrecombinantplasmids〔重组质粒的筛选〕Expressingaclonedgene〔克隆基因的表达〕内含子：真核生物细胞DNA外显子：为蛋白质氨基酸编码的DNA基因组：一个细胞或者生物体所携带的一套完整的单倍体序列，包括全套基因和间隔序列。真核细胞基因组的特征DNA/〔DNA性、不存在操纵子构造、微卫星(microsatellite1bp~6bp，60350bp。操纵子(operon)：(structuralgenes)串联在一起，包括上游的调控区共同构成。试述转录前水平的表达调控的方式：基因丧失〔体细胞分化过程中，必需将某些基因永久性关闭。最简洁有效的方式是将这些基因丧失。将要分化为生殖细胞的细胞则始终保存着整套基因组〔需要量急剧增加－－增加该基因的拷贝数、重排〔某些基因片段转变原来存在的、甲基化修饰〔脊椎动物中，DNACpGC生甲基化修饰5m、染色体构造。>50055%G+C0.65更大比率的观看和预期[o/e]CpG二核苷酸频率)，定义为CpG顺式调控元件(cis-actingelement,CAE)：基因四周能与特异转录因子