高效液相色谱仪的使用及运行性能测试

高效液相色谱仪的使用及运行性能测试实验目的了解高效液相色谱仪的基本原理和结构。？掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。掌握测试高效液相色谱仪运行性能的指标和方法，验证各部件及整机的性能。实验器材?高效液相色谱仪，LC-ATvp高压泵、SCL-10Avp程序控制器、SPD-M10Avp二极管阵列检测器、CTO-10Asvp温度控制器。Shim-packVP-ODSC18150x分析柱、20|jl进样器、AS3210型超声波发生器。无水甲醇和双蒸水各500ml（脱气处理）、萘、咖啡因（均为色谱纯或分析纯）。实验原理高效液相色谱法是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。描述高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。LC-2010和Agilent1100型为单泵型，适于单一流动相的洗脱；LC-10Avp型为双泵型高效液相色谱仪，适于程序洗脱。单泵型高效液相色谱仪的结构示意见图9-1。实验步骤?（一）高效液相色谱仪的基本操作步骤（以岛津LC-10A为例）依照顺序开机，自检完毕后进入操作模板；设定洗脱程序、检测器的条件及测定报告；完成实验过程，打印试验结果，依照顺序关机。（二）性能测试高效液相色谱仪的性能检查分为单个部件的验证和整机验证。验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。验证目的是检查并确认高效液相色谱仪运行性能是否符合要求。验证标准按照中华人民共和国国家计量检定规程，高效液相色谱仪各验证部件的验证项目的合格标准见表9-1。表9-1高效液相色谱仪各验证部件的验证项目的合格标准验证部件验证项目合格标准流量设定值误差Ss输液泵流量稳定性误差SR柱温箱设定值误差ATs<±2°C柱温箱柱温箱控温稳定性Tc<1C自动进样器进样量准确度误差<±2%基线噪声<2x1Q+5AU检测器最小检测浓度柱温箱柱温箱控温稳定性Tc<1C自动进样器进样量准确度误差<±2%基线噪声<2x1Q+5AU检测器最小检测浓度<1x（萘的甲醇溶液）基线漂移<5x整机性能定性测量重复性误差RSD<%验证步骤（1）输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定表9-2流量、次数、收集时间表333流量设定值（mL/min）测量次数流动相收集时间（min）1Q55Ss=(F.-F0/F5X1OO%(1)333式中=Ss：流量设定值误差(%)；电流量设定值U.min1);Sn：流量稳定性误差(%);F：同一组测量值的算术平均值(mL.min'1)；Em：同一组测量中流量最大值(mL.min'1)；队：同一组测量中流量最小值(mL.min"狭F.为流量实测值(也.niin'1),其值由下式计算：F.=(R一队)/5……⑶-其中=M：容量瓶+流动相的重量(g)；W1：容量瓶的重量(g)；£j：实验温度下流动］相的密度(g.cm'5)；t：收集流动相的时间(min)；⑵拄渍毗fi•温度设定值误差追,和控温稳定性T「的检定d将数字温度计探头固定新退触.，选择35.C和技匚进行检定。技仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计T次，求出平均值。平均值与设定值之差为AT%7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性玲结—|自动进样器进样量准确度误差的检定取进样瓶装入1ml水，用天平精密称定其重量，然后置于自动进样器上让其进样10次，每次50pl。进样完成后再精密称定其重量，由重量差计算进样量准确度，结果填入数据记录与处理的表16-5中。检测器的检定①的萘/甲醇溶液进样20pl，记录色谱图，由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高算按照下列公式计最小检测浓度CL。CL=(2xNdxC)/H式中：CL：最小检测浓度，；Nd：基线噪声峰峰高，mm；C：标准溶液浓度，；H：标准溶液峰峰高，mm。实验结果填入数据记录与处理的表16-6中。整机性能的检定°C数据记录与处理将上述的实验数据记录于下列各表，并进行相应的数据处理，得出检定结论。(1)输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定表9-3输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定结果仪型号：泵型号：流动相：色谱柱：鉴定日期：检定人：复核人：Fs1次2次3次1次2次3次1次2次3次W1W2PtFm=(W2-W1)/pT-tSS=(Fm—FS)/FSx100%平均SSF=(Fm1+Fm2+Fm3)/3FmaxFminSR=(Fmax—Fmin)/Fx100%

此项检定结论：(2)柱温箱柱箱温度设定值误差ATS和控温稳定性TC的检定表9-4柱温箱柱箱温度设定值误差ATS和控温稳定性TC的检定结果仪型号：柱温箱型号：数字温度仪型号：T设定35°C45°C时间读数时间读数稳定时第1次第2次第3次第4次第5次第6次第7次T平均T最大T最小ATs=T平均-T设定Tc=T最大-T最小此项检定结论:(3)自动进样量准确度误差的检定表9-5自动进样量准确度误差的检定结果液相色谱仪型号:自动进样器型号:检定温度:液相色谱仪型号:自动进样器型号:检定温度:进样前进样瓶加水的总重进样后进样瓶加水的总重水的密度P进样量准确度误W1(g)W2(g)(g/ml)差(％)进样量准确度误差=[(W1-W2)-(50x10x10-3xp)]/(50x10x10-3xp)x100%此项检定结论：(4)检测器的检定表9-6检测器的检定结果液相色谱仪型号：检测器型号：色谱柱：流动相：流速：萘甲醇标准溶液浓度C：配制人：配制日期：基线噪声Nd基线漂移H最小检测浓度CL最小检测浓度的计算:CL=(2xNdxC)/H此项检定结论：(5)高效液相色谱仪整机性能的检定表9-7整机性能的检定结果液相色谱仪型号：检测器型号：色谱柱：检测波长：nm流动相：流速：标准溶液类型：浓度：