甲基绿-派洛宁法显示细胞内DNA、RNA的分布实验报告 山东大学_第1页
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文档简介

甲基绿——派宁法显细胞内的分【实验目的】学作血涂；熟基绿—派洛宁法显示核酸的原理与操作步骤；观、RNA在细的分布。【实验原理】1、电用：脱氧核糖核酸和糖核酸都有磷酸基，又有碱基，故为两性电解质。在一定的条下，可以电离而带电荷，因此都有一定等电点。甲基绿、派洛宁为两种碱性染料在水中电离后，都产生带阳电荷的离子，常与带负电荷的磷根形成盐键。甲基绿电离后，在五价氮处产生个正电荷，碱性较强，易与双链DNA分子（胞核等电点pH3.8）进行极性吸着而结合示绿色宁电离后仅产生一个正电荷较绿弱链RNA（胞质等电点pH4.6）附合，使RNA显色。2、聚合作用：甲基绿对聚合高有和力，派洛宁对聚合低的RNA亲和力。因此，甲绿选染DNA，洛宁选染RNA。【甲基—派洛宁法实验步骤1．取蟾蜍（蟾蜍破髓，仰位剪下颌、舌头）制备血涂片，干燥后滴0%的醇溶液固定10分，干。2．滴染色液于血膜上，染分染中）3．蒸馏水冲洗，去染液。4．向染色液血膜滴加95%乙醇分色、同时倾斜载片弃液体，晾干。5.观甲基—派洛宁染液配制试剂醋缓冲液PH4.8A液：冰醋酸蒸水至100mlB：醋酸钠）2.72克100ml蒸水中使用时A液液2：3比例混合。甲基—派洛宁染液A液:2克甲加醋冲液至100mlB:1克洛宁Y加醋冲液至100ml。临用时A液液：2混合甲基绿派洛宁法试剂配制（改良）（一2%基绿水溶液：甲基绿methyl蒸馏水加至50ml用三氯甲烷抽提，方法详后。（二5%洛宁水溶液：派洛宁（pyronine蒸馏水加至20ml（三0.2M醋缓冲液pH）0.2M醋酸液41ml0.2M醋酸钠液59ml（三）甲基绿派洛宁染液：1

2%基绿水溶液（经抽提）5ml5%洛宁水溶液1ml蒸馏水12ml0.2M醋酸盐缓冲液pH18ml甲基绿派洛宁染液的pH值必严控PH4.8，甲基绿与派洛宁分别和RNA有亲和性，可获较好结果PH9时基绿着色，派洛宁不色。PH极，甲基绿不着色DNA和RNA染液MGP液）原理方法Vnna-Pappenheim氏基绿派洛宁法。适用范围：适宜组织石蜡切片染。产品组成：试剂染剂3瓶PMG料3瓶染色方法1、组织切片脱蜡至2试（酶染剂）染色钟3剂PMG染）色～30分钟4水洗，此时切片应淡绿色，若偏红，可用冷丙酮快速分色干，二苯透明，中性树胶封固。结果参考DNA呈～深绿色RNA粉红色。有效期：十二个月。贮存：常保存。【实验用品】1.材料蟾蜍2.试剂蒸馏水70%乙醇溶液95%乙液。3．器材解剖针、载玻片、盖玻片、显微、镊子。【操作步骤】1.取蟾蜍（蟾蜍破髓，仰位剪下颌、舌头）制备血涂片，干燥后滴加70%的乙醇溶液固定10分钟，晾干；2.3.4.5.

滴两种染色液分别于两张血膜上染15分钟染缸中蒸馏水冲洗，去染液；向染色液血膜滴加乙溶液色，同时倾斜载片弃液体，晾干；观察。【实验结果】甲基绿——派罗宁染色液1

甲基绿——派洛宁染色液22

实验结果分析

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