石蜡切片方法课件

FAA固定液

70%酒精↓80%酒精

85%酒精95%酒精100%酒精拟南芥石蜡切片方法总结花一、取材横切：建议取完整的花簇进行处理，包埋及切片时都保持完整的花簇形态，不要让单个的花朵掉离花簇。可较好的保持花簇上每朵花的完整性，可以看到连续的花期。纵切：前期都取完整花簇进行处理，浸蜡、包埋、切片时则分离成单朵处理，最小的几朵花可成簇处理。二、固定首先，将材料从植株上剪下，泡入FAA或者卡诺氏固定液中。取一针筒注射器，在针筒中加入3-4ml固定液（与泡材料的固定液同），将材料夹入，然后用针筒注射器进行真空抽气操作（左手握住针筒，右手推动推进器，推动液体排出针筒内空气，左手大拇指堵住针筒上插注射器针头的插口,右手向外拉推进器，如此反复），尽量抽尽材料内空气，然后将材料放入同一固定液保存。三、脱水70%酒精----30分钟↓80%酒精----30分钟↓85%酒精----20分钟↓95%酒精----20分钟↓100%酒精----5分钟100%酒精+少量龙胆紫固体(GUS材料不加)-5分钟四、透明及渗蜡（脱酒精，紧接着上部过程）加入1/3体积的纯二甲苯混匀-5分钟↓加入1/3体积的纯二甲苯混匀-5分钟↓加入1/3体积的纯二甲苯混匀-5分钟↓纯二甲苯20分钟↓纯二甲苯25分钟↓换新的纯二甲苯，削蜡块放入其中，室温下过夜（蜡块最好不要压到材料）五、升温浸蜡

将装着二甲苯、蜡块和材料的试管放到恒温箱中，将温度调到37度，等温度升到37度后继续上调升温。到37度→到42度→到47度→到50度→到52度→到54度→到56度→到58度→到60度→到61度→到62度→到63度（不要超过63度）各个温度等级最好稍做停留，如果有事的话可以适当延长停留时间，但高温时不宜停留超过标准操作太久的时间。升到63度后，保持20-30分钟，继续下步操作,将材料从试管中夹出（所用纯石蜡与渗蜡时所用蜡块石蜡同）：纯石蜡----1小时↓纯石蜡----1小时↓最好是0.5-1cm的方体，然后将其粘到小木块上，以备切片。粘好后，确保切面是正四方形，如不是继续修块。八、切片

将粘上材料蜡块的小木块固定到切片机上，尽量使切面与水平面垂直。切面上的两条与水平线平行的边也与刀刃线平行。切片时应该保证刀刃的锋利，切出来的蜡带应该平整且连续。把处理好的载有蜡带的玻片从恒温箱取出，将其泡入纯二甲苯中：纯二甲苯----30分钟↓纯二甲苯----30分钟↓纯二甲苯----30分钟取出等二甲苯挥发干净，即可进行下一步操作.注意在整个过程中要保持玻片有材料的一面不碰到东西，以防材料脱落。叶取材：取较为成熟的叶，幼小的嫩叶不适合于做石蜡切片。脱水：70%酒精----30分钟↓70%酒精----30分钟↓80%酒精----30分钟↓80%酒精----30分钟85%酒精----15分钟↓85%酒精----15分钟↓95%酒精----15分钟↓95%酒精----15分钟↓100%酒精----10分钟↓100%酒精+少量龙胆紫(GUS材料不加)-10分钟浸蜡：纯石蜡----2小时↓纯石蜡----2小时↓纯石蜡----2小时茎脱水：70%酒精----2小时↓70%酒精----2小时↓80%酒精----2小时↓80%酒精----2小时↓85%酒精----1小时↓85%酒精----1小时↓95%酒精----1小时↓95%酒精----1小时↓100%酒精----30分钟↓根取材：建议取完整的根系进行处理，包埋及切片时都保持完整的根系形态。完整的根系在切片时将得到横切，纵切以及各个角度的切片结果。脱水：70%酒精----过夜↓8