大鼠皮层神经元细胞原代培养课件

煮辞州大学皮层神经元细胞原代培养煮辞州大学1可主要内容:4实验原理准备工作实验步骤影响因素可主要内容:21实验原理◆细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之可分为原代培养和传代培养两种。◆原代培养:将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖1实验原理32实验准备仪器、材料与试剂无菌操作台,培养箱实验仪器培养板,青霉素瓶,离心机,计数板冰盒,滤器(200目自制),手术器械新生鼠材料与试剂DMEMF12培养基(20%血清),025%胰酶多聚赖氨酸,碘酒,75%酒精,PBS,阿糖胞苷242实验准备实验前准备工作培养板包被制备冰盒培养基,阿糖胞苷配制==,-----0.1%多聚赖氨酸包被25实验步骤要点细节决定成败细心耐心实验步骤62实验步骤胰酶消化法1准备:取名种2滑奋的培用品宽涂华台面紫绯擦拭手及台面2布局点燃酒精灯,安装吸管帽;准备离心管;平皿及器械放置妥当272实验步骤布局剥离血管及筋膜广器减酒精PBSPBBS断头剪碎组织块冰盒取脑,分离皮层神经清洗血液元28实验步骤3断头取脑:超净台内,断头取脑,置于盛有PBS的培养皿内,洗涤3次,弃除表面残余血迹,迅速置于无菌的生理盐水冰浴上4剥离软脑膜:剥离大脑皮层至预冷的PBS中,用两把无齿弯镊仔细剥离软脑膜和血丝,剥离干净后用PBs液洗23遍实验步骤9实验步骤5剪碎将大脑皮层转移到另一装有PBS的平皿中,用手术剪将其剪成小块(1mm3),用PBS液洗三次,转移至离心管中离心1000rpm×5min。6消化:加入025%胰蛋白酶,放入37℃培养箱消化20min,中间翻转振荡一次。使细胞分离实验步骤10大鼠皮层神经元细胞原代培养课件11大鼠皮层神经元细胞原代培养课件12大鼠皮层神经元细胞原代培养课件13大鼠皮层神经元细胞原代培养课件14大鼠皮层神经元细胞原代培养课件15大鼠皮层神经元细胞原代培养课件16大鼠皮层神经元细胞原代培养课件17大鼠皮层神经元细胞原代培养课件18大鼠皮层神经元细胞原代培养课件19大鼠皮层神经元细胞原代培养课件20煮辞州大学皮层神经元细胞原代培养煮辞州大学21可主要内容:4实验原理准备工作实验步骤影响因素可主要内容:221实验原理◆细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之可分为原代培养和传代培养两种。◆原代培养:将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖1实验原理232实验准备仪器、材料与试剂无菌操作台,培养箱实验仪器培养板,青霉素瓶,离心机,计数板冰盒,滤器(200目自制),手术器械新生鼠材料与试剂DMEMF12培养基(20%血清),025%胰酶多聚赖氨酸,碘酒,75%酒精,PBS,阿糖胞苷2242实验准备实验前准备工作培养板包被制备冰盒培养基,阿糖胞苷配制==,-----0.1%多聚赖氨酸包被225实验步骤要点细节决定成败细心耐心实验步骤262实验步骤胰酶消化法1准备:取名种2滑奋的培用品宽涂华台面紫绯擦拭手及台面2布局点燃酒精灯,安装吸管帽;准备离心管;平皿及器械放置妥当2272实验步骤布局剥离血管及筋膜广器减酒精PBSPBBS断头剪碎组织块冰盒取脑,分离皮层神经清洗血液元228实验步骤3断头取脑:超净台内,断头取脑,置于盛有PBS的培养皿内,洗涤3次,弃除表面残余血迹,迅速置于无菌的生理盐水冰浴上4剥离软脑膜:剥离大脑皮层至预冷的PBS中,用两把无齿弯镊仔细剥离软脑膜和血丝,剥离干净后用PBs液洗23遍实验步骤29实验步骤5剪碎将大脑皮层转移到另一装有PBS的平皿中,用手术剪将其剪成小块(1mm3),用PBS液洗三次,转移至离心管中离心1000rpm×5min。6消化:加入025%胰蛋白酶,放入37℃培养箱消化20min,中间翻转振荡一次。使细胞分离实验步骤30大鼠皮层神经元细胞原代培养课件31大鼠皮层神经元细胞原代培养课件32大鼠皮层神经元细胞原代培养课件33大鼠皮层神经元细胞原代培养课件34大鼠皮层神经元细胞原代