毒物分析方法概述

分析方法概述（第一部分）第1页，共36页。定性分析与定量分析定性分析目的

确定检材是不是某种药毒物，或确定检材中是否含有某种或某几种药毒物。过程

探查方向初步判断确证

方法要求

Ø灵敏

Ø

具有一定的选择性第2页，共36页。定量分析目的确定某种药毒物在检材中的含量和浓度，或确定某几种药毒物分别在检材中的含量和浓度。需定量的情况

Ø

医疗中正常用药

Ø

饮食或人体中常有的成分

Ø

需根据量界定犯罪性质或法律责任的方法要求

灵敏度不一定很高（能测出即可），但需具有良好的计量关系。R/S=f（x）第3页，共36页。定性与定量的关系定性是定量的基础界限有些定性方法在定性的同时就有定量关系。有些定量方法在一定条件下，本身也具有不同程度的定性意义。第4页，共36页。

随着分析科学和技术的迅速发展，能应用于法医毒物分析并完成毒物的定性鉴别和定量检测任务的分析方法很多，将主要对以下分析方法，尤其是仪器分析方法进行重点介绍。分析方法类别第5页，共36页。方法类别第6页，共36页。常用毒物分析方法方法类别方法原理方法特点形态学方法利用检材外观形态或显微形态特征进行辨认、比对简便、快速，能在一定程度上起到筛选和鉴别的作用，为侦查或检验提供线索动物试验法利用毒物的毒性及毒理作用机制，通过观察染毒试验动物是否死亡或其中毒表现，初步判断检材中是否含有剧毒物质或可能含有哪种毒物简便易行，结果直观，可初步筛查、判断毒物类别免疫分析法利用标记毒物与非标记毒物竞争结合抗体的原理检测毒物操作简便，检测省时，灵敏度高，选择性强，耗材少，但需专用试剂盒，且试剂都有一定的时效理化分析法利用毒（药）物的各种理化性质进行鉴别检测，如理化常数的测定，显色反应，沉淀反应等操作简单，对设备要求不高，结果直观，但选择性差，准确度低，往往用作筛查试验或预试验第7页，共36页。形态学方法——外观性状鉴别通过感观对天然药毒物的外观性状进行鉴别形状：根、茎、叶、花、果实、种子等大小：大小、长短、粗细等颜色：表面和内部的色泽表面特征：光滑还是粗糙，皱褶、槽沟、皮孔、毛茸等质地：软硬、脆韧、轻重、粘性、粉性等折断面：平整－粗糙、致密－疏松、断面纹路及颜色。第8页，共36页。形态学方法——显微形态鉴别利用显微镜观察药毒物的组织结构、细胞种类和形态以及细胞后含物的种类及形态等，通过与已知物核对进行。细胞种类:纤维细胞、石细胞、栅栏细胞、薄壁细胞等。后含物:如淀粉粒、菊糖、草酸钙结晶、钟乳体、油珠等。第9页，共36页。动物试验(animaltest)

大多毒性大，且具有较强的生理活性和特殊的中毒症状。体外检材充裕、新鲜时，可用动物作急性毒性试验或毒效试验，以预试是否有剧毒或有某类毒物存在。青蛙毒性试验第10页，共36页。动物试验(animaltest)第11页，共36页。免疫分析法机理：抗原－抗体特异性结合方法酶免疫法（enzymeimmunoassay,EIA)放射免疫法（radioimmunoassay,RIA)荧光免疫法（luoroimmunoassay,FIA)薄层免疫法（thinlayerimmunoassay,TIA)特点：简便、快速、灵敏，种类有限，试剂较贵。应用：吸毒者和运动员尿液中毒品或兴奋剂的筛查。尿样滴入S孔内，样品在毛细效应作用下向前迁移。尿样中无吗啡存在或吗啡浓度低于阈值浓度时，因胶体金抗体全部或部分与被固定在板上的吗啡偶联物结合，使测试区（T）内出现一条紫红色的条带。当吗啡高于阈值浓度时，胶体金抗体全部与样品中的吗啡结合，未与吗啡偶联物结合，因此，在测试区不出现紫红色条带。质控区未出现红色线条，说明操作有误或试剂盒失效，结果无效。尿样中吗啡检测阈值浓度为300ng/ml。测试区（T）吗啡偶联物和被胶体金标记的抗吗啡单克隆抗体质控区（C）加样孔（S）第12页，共36页。颜色和沉淀反应机理大多为生物碱，能与具有氧化性质的酸性试剂反应生成有色物质；或与某些试剂生成沉淀，甚至特殊晶体。方法颜色反应:点滴板沉淀或结晶反应：载玻片显微镜选用原则选择性和实用性第13页，共36页。鸦片生物碱的颜色和结晶反应吗啡＋碘－碘化镉钾马尾松状结晶用于可疑毒品的预试。第14页，共36页。理化方法第15页，共36页。常用毒物分析方法方法类别方法原理方法特点仪器分析法主要包括利用毒物光学性质的光谱分析法（spectralanalysis）利用毒物色谱行为差别的色谱分析法（chromatography）根据物质分子量、断裂碎片质量大小及结构特征信息的质谱分析法（massspectrographicanalysis）常用的有紫外分光光度法（ultravioletspectrophotometry）原子吸收分光光度法（atomicabsorptionspectrophotometry）气相色谱法（gaschromatography）高效液相色谱法（highperformancechromatography）薄层色谱法（thinlayerchromatography）毛细管电泳法（capillaryelectrophoresis）各类质谱法及多级色质联用法灵敏，准确，自动化程度高，适用范围广，但仪器设备昂贵，对使用人员要求较高，可因使用不当或仪器失准而得出错误结果第16页，共36页。紫外分光光度法（ultravioletspectrophotometry）荧光分光光度法（fluorescencespectrophotometry）红外分光光度法（infraredspectrophotometry）原子吸收分光光度法（atomicabsorptionspectrophotometry）成分大多结构复杂，一般具有紫外吸收或荧光。现场收缴纯品药物制剂或较纯的毒品可直接用光谱法检验。植物、掺假毒品、生物检材，因成分复杂，一般需与色谱联用。母体结构成酯结构药物名称特征吸收

古柯碱

优卡因λmax=234nmλmin=275nm

异戊卡因

光谱法第17页，共36页。咖啡因的紫外光谱图第18页，共36页。气相色谱法（gaschromatographyGC）高效液相色谱法（highperformancechromatographyHPLC）薄层色谱法（thinlayerchromatographyTLC）毛细管电泳法（capillaryelectrophoresisCE）色谱法第19页，共36页。第20页，共36页。DiagramofChromatograph第21页，共36页。A：全谱扫描方式总离子流图；B：毒鼠强的质量碎片图；第22页，共36页。根据物质分子量、断裂碎片质量大小及结构特征信息的质谱分析法。各类质谱法及多级色质联用法质谱分析法（massspectrometryMS）MassSpectrometry:

AToolwithIncreasingAnalyticalPotentialsSampleIntroductionIonSourceMassAnalyzer+++第23页，共36页。SampleIntroduction:GasPhase(GC)LiquidPhase(LC)SolidIonSource:EICIESIFABSIMSAPCIMALDIAnalyzers:QuadrupolesSectorsIonTrapFTMSTOF第24页，共36页。海洛因O3-单乙酰吗啡

O6-单乙酰吗啡乙酰可待因海洛因及其相关药物质谱图第25页，共36页。各类分析方法的效用上述各类分析方法由于所依据的原理不同，实行的操作方法不同，以及应用的场合不同，不同的作用和效果。主要有以下两类效用。第26页，共36页。第27页，共36页。毒物分析可靠性控制事先熟练地掌握检测方法。应该对所用检测方法的适用场合、操作中的细节、正常与不正常现象的辨认和处理、结果正确性的辨析等方面，都有充分把握。这就必须有一些措施能保证所做分析工作的可靠性第28页，共36页。检验工作不应临时照搬书籍刊物上记载的方法，因为其中有些方法并不切合实用。而对其中可适用于实际工作的方法，若没有亲身体验也是难以把握的。在建立一种新的分析方法时，尤其应该对方法的效能进行验证。第29页，共36页。另外法医毒物分析工作中涉及的一些组成复杂检材中的毒物，常需经分离净化等处理，容易使分析结果产生较大误差，所以验证其可靠性尤为必要。方法认证有其具体的内容和实施办法。第30页，共36页。作为提供科学证据的法医毒物分析的检验结果和鉴定结论，必须保证其科学性、公证性和权威性。除了需对分析方法进行认证而外，还需实施毒物分析实验室的规范化管理和质量控制建设。第31页，共36页。认证分析方法的主要项目法医毒物分析对方法的要求主要是准确和灵敏。对于组分复杂的检材，首先要求有良好的分离净化效能。（下一学时）

第32页，共36页。法医毒物分析工作所出具的检验结果或鉴定结论必须科学、公正和权威。而鉴定工作涉及的检材复杂，且待检物未知，含量低微，所以分析质量控制尤为重要。除了对分析方法进行认证而外，对毒物分析实验室的规范化建设，建立有效的技术和质量管理体系也非常重要。毒物分析实验室规范管理和分析质量控制基本框架Ⅰ认证分析方法的主要项目纯度和收得率方法的准确性分析方法的灵敏性线性与检测范围专属性耐用性论证的实施方法模拟试验空白试验已知对照试验随行参比法第33页，共36页。国际标准化组织（internationalstandardorganization，ISO）对行业实验室有国际化的认可准则。1991年法庭毒物学协会（societyofforensictoxicology，SOFT）和美国法庭科学协会（Americanassociationofforensicscience,AAFS）曾共同发布了《法庭毒物学实验室准则》（forensictoxicologylaboratoryguidelines），2002年又在该准则基础上进行了修改和完善，为毒物分析实验室的规范化提供了技术和管理要求。毒物分析实验室规范管理和分析质量控制基本框架Ⅱ第34页，共36页。质量控制应贯穿毒物分析实验室接受和实施毒物检测的各个环节，主要包括人员综合素质，环境设施条件，仪器设备验收、使用、保管、降级及报废制度，合格的实验动物，合格的标准对照品、基准物质，标准操作步骤（standardoperatingprocedures，SOP），检材的采集及保护链，分析步骤，报告结果和资料归档等内容。最终的检验报告和鉴定结果应有行业质量控制专职人员进行质量分析和核查。毒物分析实验室规范管理和分析质量控制基本框架Ⅲ第35页，共36页。内容梗概分析方法概述（第一部分）。目的确定检材是不是某种药毒物，或确定检材中是否含有某种或某几种药毒物。界限有些定性方法在定性的同时就有定量关系。利用检材外观形态或显微形态特征进行辨认、比对。简便、快速，能在一定程度上起到筛选和鉴别的作用，为侦查或检验提供线索。利用标记毒物与非标记毒物竞争结合抗体的原理检测毒物。形态学方法——外观性状鉴别。大小：大小、长短、粗细等。折断面：平整－粗糙、致密－疏松、断面纹路及颜色。形态学方法——显微形态鉴别。利用显微镜观察药毒物的组织结构、细胞种类和形态以及细胞后