实验八脂肪酸氧化作用正规版资料

实验(shíyàn)八脂肪酸氧化作用第一页，共14页。一、目的(mùdì)与任务了解脂肪酸的β-氧化作用通过测定和计算反响液内丁酸氧化生成(shēnɡchénɡ)丙酮的量，掌握测定β-氧化作用的方法及其原理第二页，共14页。二、实验(shíyàn)原理在肝脏中，脂肪酸经β氧化作用生成乙酰辅酶A。2分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可复原生成β-羟丁酸。乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢(dàixiè)的中间产物。问题(wèntí)：为什么要生成酮体，其意义是什么？第三页，共14页。氧化的生化(shēnɡhuà)历程

乙酰CoAFADFADH2

NAD+NADHRCH2CH2CO-SCoA脂酰CoA脱氢酶脂酰CoA

β-烯脂酰CoA水化酶

β-羟脂酰CoA脱氢酶

β-酮酯酰CoA硫解酶RCHOHCH2CO~ScoARCOCH2CO-SCoARCH=CH-CO-SCoA

+CH3CO~SCoAR-CO~ScoAH2O

CoASHTCA乙酰CoA

乙酰CoA

乙酰CoAATPH20呼吸链H20呼吸链乙酰CoA

乙酰CoA乙酰CoA乙酰CoA第四页，共14页。酮体的生成(shēnɡchénɡ)—肝脏羟甲基戊二酸单酰CoA〔HMGCoA〕脂肪酸硫解酶2CH3COSCoACH3COCH2COSCoA乙酰乙酰CoAHOOCCH2-C-CH2COSCoA|CH3OH|HMG-CoA裂解酶HMG-CoA合成酶CH3COSCoACoASH--氧化(yǎnghuà)CH3COCH2COOHCH3CHOHCH2COOH乙酰乙酸丙酮--羟丁酸脱氢酶CO2NADH+H+NAD+CH3COCH3脱羧酶CoASH第五页，共14页。2NaOH+I2NaOI+NaI+H2OCH3COCH3+3NaOICHI3+CH3COONa+2NaOH剩余(shèngyú)的碘用标准硫代硫酸钠溶液滴定：NaOI+NaI+2HClI2+2NaCl+H2OI2+2Na2S2O3Na2S4O6+NaI碘仿(diǎnfǎnɡ)本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件(tiáojiàn)下，与碘生成碘仿。反响式：问题：为什么说本实验的关键是制备新鲜的肝糜?第六页，共14页。15%三氯乙酸溶液：15g三氯乙酸溶解于水中，定容至100mlβ-烯脂酰CoA水化酶1M碘液和3ml10%NaOH。碘仿(diǎnfǎnɡ)15%三氯乙酸溶液：15g三氯乙酸溶解于水中，定容至100mlA：滴定对照所消耗的0.8ml+1/15MNaH2PO413.01M硫代硫酸钠溶液的ml数称肝组织5g置研钵中，加少量的0.六、结果(jiēguǒ)计算课后研讨(yántǎo)题2、酮体为什么只能在肝外组织进行作用？酮体测定：吸取两种滤液各2ml分别放入另2个锥形瓶中，各加3ml0.其中(qízhōng)一个锥形瓶中加2ml正丁酸，另一个锥形瓶中不加正丁酸〔对照〕。二、实验(shíyàn)原理滴至浅黄色时，参加3滴0.根据滴定对照与滴定样品所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成(shēnɡchénɡ)丙酮的量。第七页，共14页。三、实验(shíyàn)器材5ml微量滴定管恒温水浴吸管剪刀(jiǎndāo)50ml锥形瓶漏斗试管及试管架第八页，共14页。四、试剂(shìjì)与材料鲜猪肝(zhūɡān)：0.5g/ml0.5%淀粉溶液：0.5g淀粉溶解于水中，定容至100ml0.9%氯化钠溶液：0.9g氯化钠溶解于水中，定容至100ml0.5M丁酸溶液：取5ml丁酸溶于100ml0.5M氢氧化钠溶液中15%三氯乙酸溶液：15g三氯乙酸溶解于水中，定容至100ml第九页，共14页。10%氢氧化钠：10g氢氧化钠溶解(róngjiě)于水中，定容至100ml10%盐酸：10ml浓盐酸稀释至100ml0.2M碘液：25.4gI2+50gKI定容到1000ml，用标准0.05M硫代硫酸钠标定标准0.01M硫代硫酸钠：将已标定的0.05M硫代硫酸钠稀释成0.01M1/15MPH7.6磷酸缓冲液：1/15MNa2HPO486.8ml+1/15MNaH2PO413.2ml第十页，共14页。五、操作步骤肝糜制备：取肝用0.9%NaCl冲洗污血，用滤纸吸去外表水分。称肝组织5g置研钵中，加少量的0.9%NaCl研成细浆。再加0.9%NaCl到总体积10ml。取2个50ml锥形瓶，各参加3ml1/15M磷酸盐缓冲液〔pH7.6〕。其中(qízhōng)一个锥形瓶中加2ml正丁酸，另一个锥形瓶中不加正丁酸〔对照〕。再各参加2ml肝糜。混匀于43℃恒温水浴内保温1.5小时。第十一页，共14页。取出锥形瓶，各参加3ml15%三氯乙酸，混匀，对照瓶内追加2ml正丁酸，混匀，静置15min。分别过滤，滤液收集在2支试管中。酮体测定：吸取两种滤液各2ml分别放入另2个锥形瓶中，各加3ml0.1M碘液和3ml10%NaOH。摇匀，静置10min。参加6ml10%盐酸中和。用0.01M标准(biāozhǔn)硫代硫酸钠滴定剩余的碘。滴至浅黄色时，参加3滴0.1%淀粉作指示剂。摇匀，滴至蓝色消失为止。记录所消耗的硫代硫酸钠液的ml数。问题(wèntí)：15%三氯乙酸的作用是什么?第十二页，共14页。2NaOH+I2NaOI+NaI+H2O2、酮体为什么只能在肝外组织进行作用？取2个50ml锥形瓶，各参加3ml1/15M磷酸盐缓冲液〔pH7.4gI2+50gKI定容到1000ml，用标准0.5、查阅资料，介绍在哪些(nǎxiē)情况下会促进脂肪酸的氧化?。B：滴定样品所消耗的0.三、实验(shíyàn)器材CH3CHOHCH2COOHβ-烯脂酰CoA水化酶A：滴定对照所消耗的0.羟甲基戊二酸单酰CoA〔HMGCoA〕HOOCCH2-C-CH2COSCoAB：滴定样品所消耗的0.氧化的生化(shēnɡhuà)历程2、酮体为什么只能在肝外组织进行作用？β-烯脂酰CoA水化酶肝脏(gānzàng)的丙酮含量〔mmol/g〕=〔A—B〕*CNa2S2O3*1/6*5A：滴定对照所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的ml数B：滴定样品所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的ml数CNa2S2O3:标准硫代硫酸钠溶液的浓度〔M〕1/6：1mol标准硫代硫酸钠相当于丙酮的量六、结果(jiēguǒ)计算第十三页，共14页。七.课后研讨(yántǎo)题1、总结本实验操作的关键环节和本卷须知。2、酮体为什么只能在肝外组织