免疫标志课件

免疫状态标志概述肾移植后受者的免疫状态与移植效果密切相关。许多因素可以影响受者的免疫状态，进而影响移植肾功能。对移植后受者的免疫状态进行监测，不但有助于早期诊断排斥及预测其转归，还能够指导免疫抑制剂的应用。目前，用于移植后免疫监测的方法较多，这些方法从不同的侧面检测受者体内的某一免疫指标，以期反映机体整个免疫系统的功能。

T淋巴细胞表型的检测

T淋巴细胞是参与免疫应答的主要细胞，许多免疫抑制剂通过影响T细胞而发挥作用。根据外周血T细胞表型的不同，可以将T淋巴细胞分成不同的亚群，而不同亚群的T细胞具有不同的功能。对T细胞表型进行检测，能较好的反映体内的免疫状态。T淋巴细胞表型的检测CD4+/CD8+比值的变化是预测感染与排斥的重要指标；在急排的病人中该比值明显升高，可以协助诊断；若比值明显降低，提示机体处在过度抑制状态，免疫抑制剂用量过大，容易发生严重的感染。T淋巴细胞表型的检测表1肾移植患者不同时期的外周血淋巴细胞亚群比值的变化(x±s)抽血期免疫状态CD4+/CD8+比值术前期非免疫状态2.08±0.32正常期抗免疫状态1.52±0.42＊＊

排斥期抗免疫状态2.54±0.38＊感染期抗免疫状态1.04±0.16＊＊＊

注:与术前比较＊

P>0.05,＊＊

P<0.01,＊＊＊

P<0.001T淋巴细胞表型的检测结果显示术后CD4+/CD8+的比值迅速大幅降低并处于低水平者，一般在1.2～1.4多不发生急性排斥反应；而CD4+/CD8+比值下降不明显或不下降反而升高者，尤其比值大于1.6时多数有发生急性排斥可能或已经处于急性排斥状态，与术前比值比较P值无显著性差异，说明快接近正常免疫状态，结合临床开始冲击治疗，87%受者有效，在比值大于1.8时均为急性排斥者，冲击治疗100%有效果，但逆转率只占75%；当CD4+/CD8+比值处于极低水平，尤其是当比值出现倒置小于1时，说明此时极易出现感染或已处于感染之中。T淋巴细胞表型的检测

CD4+T细胞根据分泌细胞的因子不同可分TH1/TH2/TH3细胞，同样CD8+T细胞也可根据分泌细胞的因子不同可分为TC1/TC2细胞，在移植免疫中CD4+TH、CD8+TC都是主要的效应细胞。T淋巴细胞表型的检测CD40L是分子量为35～39KD的膜糖蛋白，活化CD4细胞上高表达。CD40/CD40L作为共刺激性分子对在B细胞或T细胞活化的早期起重要作用。术后大量移植抗原先进入受者脾脏内，CD+4T细胞被激活而迁入移植物中发挥免疫调节作用，高表达CD40L。随着术后创伤修复和免疫抑制剂的应用，CD40L表达逐渐减少。患者感染后CD40L+细胞显著升高(33.7%)，与细菌抗原激活Th1细胞表达大量CD40L参与巨噬细胞活化等抗炎作用有关。T淋巴细胞表型的检测研究也证实CD40L+细胞水平在AR组与ATN组间有明显差别，比SCr变化提前2～5天出现，敏感性90.9%，特异性83.3%；CD25+细胞是AR时移植肾内主要的效应细胞，CD25在移植物中表达不断增强，提示AR中激活的T细胞数在不断增加，AR时肾组织中CD25+细胞占94%，增殖细胞占83%；无AR的肾组织中未检出CD25+细胞和增殖细胞，研究证实，AR时CD25+细胞水平比SCr早1～3天发生变化。T淋巴细胞表型的检测CD69属于植物血凝素家族是T细胞活化早期的重要标志物。Posselt等利用流式细胞术检测受者外周血中T细胞表面CD69的表达情况，结果显示所有排斥患者CD3+及CD8+T细胞CD69的表达均明显增加。应用受试者工作特征曲线界定临界值为7.4%，此时诊断AR的敏感性为86%，特异性为85%，以上数据表明CD69可作为预测排斥的早期指标。CD30的表达也是T细胞活化的标志之一，与患者的免疫状态有着密不可分的联系。而可溶性CD30分子(soluableCD30,sCD30)的水平因直接反应着CD30的表达量，从而成为了一种新的免疫状态监测指标。Sengul等通过研究发现以术前及术后15d受者血浆中的表达水平为依据，sCD30可作为一独立危险因素准确预测AR的发生，且不受其他因素(如免疫治疗方案、HLA匹配程度等)的影响。T淋巴细胞表型的检测CD103特异性表达于细胞毒性T细胞表面，介导黏膜内淋巴细胞的归巢效应，引起肾小管周围炎，而肾小管周围淋巴细胞浸润正是AR的标志性表现。Ding等以实时定量PCR方法对79例肾移植患者尿液中的CD103表达水平进行检测分析其与AR之间的相关性。结果发现，与CAN组及肾功能正常组相比，AR组患者尿液中的CD103mRNA明显升高。以受试者工作特征曲线界定8.16为阈值，此时预测排斥的特异性为75.5%，敏感性为59.4%。IshidaH等报道肾移植术后发生急性排斥的患者外周淋巴细胞高表达CD15S抗原，抗排斥治疗成功后此抗原表达降至低水平，而非排斥患者弱表达此抗原。提示监测肾移植患者的CD15S抗原表达可诊断急性排斥反应，并可预测抗排斥治疗的效果。T淋巴细胞表型的检测CD4+CD29+和CD4+CD45RA+T细胞二者均是免疫调节细胞，前者是辅助细胞诱导亚群，后者是抑制细胞诱导亚群。Bas等的研究结果表明在移植后3至6个月CD4+CD29+T细胞明显下降，并与低反应状态的形成呈平行关系，这些改变预示受者的长期效果较好。在移植肾失功原因的鉴别诊断中，区别排斥和CsA中毒较困难。有研究结果显示在急排和CMV感染的肾移植受者中CD4+CD45RA+T细胞数目明显下降，而CD4+CD45RO+T细胞数目明显升高，但在CsA中毒的受者中无任何变化，因此这个指标虽然不能区别是急排还是CMV感染，但能鉴别CsA中毒。

细胞因子基因的检测

器官移植后，供、受者之间HLA的差异将导致异体抗原被识别与呈递，免疫细胞活化并释放大量细胞因子。因细胞因子的释放是免疫系统启动的特征性阶段，故可作为免疫状态监测的参考指标。细胞因子基因的检测

Amirzargar等通过对肾移植受者血浆中白细胞介素(interleukin,IL)-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的连续性监测发现，AR组IL-2及IFN-γ水平从术后1周开始逐渐升高，排斥前达到最大值。IL-4及IL-10水平较术前无明显变化。在未排斥组，IL-4与IL-10产量明显增加，IL-2及IFN-γ则维持在较低水平。Panigrahi等研究发现，血浆中可溶性白细胞介素-2受体(soluableinterleukin-2receptor,sIL-2R)的水平也与免疫状态有关。肾功能稳定或非免疫源性失功(如环孢素A毒性等)的患者在移植术后sIL-2R水平进行性下降，而排斥患者却逐渐升高。因此，sIL-2R的表达量不仅可以辅助预测AR的发生，并可用来鉴别移植物失功的原因。趋化因子基因的检测Dalton等对受者外周血单个核细胞中多种趋化因子的基因表达进行了定量研究，分析了其动态变化规律及与排异反应发生的时间关系。结果显示所有排斥患者CCR1及CXCL10水平在排异发生前48～72h即明显升高，可预测排斥反应的发生。经激素冲击治疗后，激素敏感组患者CCR1、CXCL10表达回落至基线水平。而CCL3、CCL4、CCL5与机体免疫状态的相关性较差，无法作为评价指标。Tatapudi等报告尿液中interferon-inducibleprotein-10（IP–10）及CXCR3mRNA的定量检测也有助于诊断排异反应。在入组的82例患者中24例AR患者尿IP-10mRNA水平与活检证实的19例其他发现、15例CAN、25例肾功能稳定者相比明显升高。其预测AR的敏感性与特异性分别为100%和78%。CXCR3表达在AR组亦明显升高。Tatapudi更进一步提出CXCR3及IP-10仅仅反应了细胞的募集阶段，如果联合检测靶细胞杀伤的标志分子PFP及GraB将进一步提高AR诊断的准确性。结语与展望

免疫状态评估的最终目的是为了合理应用免疫抑制剂，即在最大程度抑制排斥反应发生的基础上，尽量减少免疫抑制剂的摄入，降低严重感染及其他副作用的发生率，达到个体化治疗。虽然国内外学者已进行