临床基因扩增实验室质量管理体系的建立

临床基因扩增实验室

质量管理体系的建立第1页，共32页。From福建省临床基因扩增检验实验室规范化培训暨技术人员培训班卫生部临床检验中心李金明第2页，共32页。ContentsPCR技术介绍；质量管理体系的建立；质量保证；质控规则；第3页，共32页。PCR技术高温TargetSequenceTargetSequence较低温度Primer1Primer2TargetSequence最适温度123第4页，共32页。实时荧光定量PCR模板起始浓度越高，荧光信号强度达到域值所需的循环数越少，即Ct值越小。荧光值未知浓度样本循环数n循环数n荧光值已知浓度系列标准品模板起始浓度的常用对数与Ct值呈负线性关系。log起始浓度Ct值标准曲线第5页，共32页。无基因无核酸的重要性严格分区（一区→二区→三区）；开窗通风；用次氯酸钠擦洗地面和台面，甚至墙面；增长紫外照射的时间；用75%乙醇空中喷雾；实验前的处理程序和实验后的处理程序；第6页，共32页。核酸污染的来源临床标本中存在的大量待测微生物科研中得到的质粒克隆以前分析研究的特定微生物大量存在于实验环境中的特定微生物以前扩增产物的残留污染。这也是PCR实验室最容易产生的，将造成假阳性的“污染”。Next第7页，共32页。质量体系文件的编写基本原则：最有效+符合实际；三大特性：①法规性：一旦批准必须认真执行；②唯一性：一个检验活动只能有唯一的操作程序；③适用性：要符合实际，具有可操作性；SOP包含的内容：5W+1H；SOP呈现方式：图片+文字；第8页，共32页。PCR实验室的质量体系文件检测项目的性能验证；项目检测的SOP;仪器和设备的操作SOP；仪器和设备的维护SOP；

人员的技术档案；各种记录表格；第9页，共32页。表格记录第10页，共32页。第11页，共32页。第12页，共32页。第13页，共32页。仪器设备的维护校准SOP日维护周维护定期维护剂量单位校准厂家校准第14页，共32页。人员的技术档案记录一人一个档案；个人基本情况；培训证和上岗证；论文、著作、成果等；培训考核记录等；第15页，共32页。仪器设备的技术档案一台仪器一个档案；仪器的基本情况；仪器的使用说明书；仪器校准的记录；维修维护的记录等；Next第16页，共32页。室内质量控制由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度；旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本实验室常规工作中批内和批间样本检验的一致性，以确定测定工作的结果是否可靠、可否发出报告的一项工作；改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上，即对试剂准备、标本采集、核酸提取、测定方法和仪器操作写出并严格执行“标准操作程序（SOP）”。第17页，共32页。室内质量控制标本采集、运送和保存中的关键点:容器——密闭、一次性、无菌、无核酸酶及扩增抑制物；采集方法——人员训练有素、防污染、保存时间和温度；合格标本——容器完整、量够、时间符合要求、外观符合要求、要猜到病原体等；第18页，共32页。第49-51页第19页，共32页。第20页，共32页。第21页，共32页。为客观比较一个实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的办法，连续和客观地评价实验室的测定结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性，这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来决定在实时的测定结果的可接受性。室间质量评价第22页，共32页。第23页，共32页。第24页，共32页。室间质评的档案袋申请表；接收记录；保存记录；实验记录；结果上报表；结果汇报表；分析和改进内容；Next第25页，共32页。质控规则质控规则的功能：判断测定批的失控还是在控；失控处理：查出原因；采取措施；保证消除；不再出现；纳入标准；防止同样的问题出现第二次是质量管理的“精髓”。第26页，共32页。符号

定义12S

一个质控测定值超出±2s控制限。13S

一个质控测定值超出±3s控制限。22S

两个连续的质控测定值同时超出+2s或－2s控制限。R4S

同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的差值超出4s控制限。41S

四个连续的质控测定值同时超出+1s或－1s控制限。7T

七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化。10X

十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧。质控规则的符号及其定义第27页，共32页。“即刻法”和Levey-Jennings质控图法“即刻法”的实质是一种统计学方法，即Grubs异常值取舍法；只要有3个以上的数据即可决定是否有异常值的存在。Levey-Jennings质控图法：稳定条件下，20个室内质控结果不应有多于1个结果超过2SD限度；在1000个测定结果中超过3SD的结果不多于3个。质控方法第28页，共32页。“即刻法”在刚开始进行质控时，可以采用“即刻法”进行质控，当日常有效测定次数超过20次时，转入使用Levey-Jennings质控图结合Westgard多规则质控的方法进行质控。第29页，共32页。Levey-Jennings质控图第30页，共32页。Thankyou！Theend.第31页，共32页。内容梗概临床基因扩增实验室

质量管理体系的建立。卫生部临床检验中心李金明。模板起始浓度越高，荧光信号强度达到域值所需的循环数越少，即Ct值越小。无基因无核酸的重要性。实验前的处理程序和实验后的处理程序。这也是PCR实验室最容易产生的，将造成假阳性的“污染”。论文、著作、成果等。由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度。旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本实验室常规工作中批内和批间样本检验的一致性，以确定测定工作的结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上，即对试剂准备、标本采集、核酸提取、测定方法和仪器操作写出并严格执行“标准操作程序（SOP）”。容器——密闭、一次性、无菌、无核酸酶及扩增抑制物。采集方法——人员训练有素、防污染、保存时间和温度。合格标