生化检验1.领域和性质

2、研究组织，和体液的组成和进行着的生物化学过程，以及疾病和药物对用以帮助。“生化”（2）（3）（1）发射光谱法：火焰光度计（K+、Na+、Cl）PCR一、在医疗工作及与治疗中的作用2、、、治疗、预后判3（1）：血Glu成人70-105CSF成人60-80儿童60-100儿童40-（3）：HDL－CCu女＞（4）妊娠：TPALBFeFeTG50%AST（GOT）↑20%ALT10BiLPGlu15%高BuNUANH3UREA×0.46＝BuN高脂肪 、BuN、BiL、ALT、AST↑1倍以上ATP↑4倍以上抽烟：COHbTG喝酒：UA、乳酸、肾上腺素↑、Glu、胰岛素↑季节：T3夏<20VitD3夏＞冬期chotFeP↓峰值低值Fe14:00-18:002:00-4:0050-K+14:00-16:0023:00-1:005-P14:00-16:0020:00-12:0030-Hb6:00-18:0022:00-24:008-2、进餐及治疗的时间安排3、采血的和止血带的使用：12%TP、cholLDL-C、针尖在V“显性溶血”RBC“隐性溶血”WBCpltKGluLDH6、惯用单位与SI第二章生化的自动化P129概（2）三查三（透析）CarryOver511、的准±2SD1/4（上限－下限8、过1、消除过差的方法作、阳性标本对照及纠正试剂是否已变可以是质控溶液或第三阶段：常规条件下未知的变异（RCVK）室内质控第四阶段：标本结果的统计分析第五阶段：间质量评价）用质控材料（最好用两种或三种浓度日常检验标本一起进定，将质控与结）1、Levy-Jenning“12S”规则：有一个质控结果超过S“13S”规则：有一个质控结果超过X“22SX“41S”规则：一种浓度测定值连续次＞X+1SDX-1SD或两种浓度测1S“2质控材料复溶或混合不均匀及有无蒸发使用校正的量具CO2PH（2）（3）（4）定期做室间质控（2月、3月变异指数法（VI法）VI（%）＝VIS＝VI/CCV×100CCVISDeg：用酶法测Glu，用标准连续测25次98.096.099.092.091.096.595.596.0（一）P22（SE（REa、SE大，RE小，准确度差，精度好b、REc、SE大，REd、SE小，RE小，准确度好，精度好egNan=40136153L－J质控图，VIS、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、X＝141.7SD＝7.3VI（%）＝X-X/XVI甲＝136-141.7/141.7＝4.0%VI乙＝153-141.7/141.7＝8.0%VIS＝VI/CCV×100CCV＝1.6%VIS甲＝250VIS对的和治疗作出决（1）GluOGTT口服糖耐量,,BuN(Crea

鉴别：AMI肝功能测定组合，急腹症，AMY淀粉提供信cholTGHDL－CLDLC（Mg/dL）＝TC总胆固醇－HDLCTG/5（HDL－C35-65Mg/dLLDL-C<130Mg/dLTC200-250Mg/dL>250mg/dL肝功：ALT、AST、T-BiLD-BiLA/Gα-GTCPK（CK自己的正常参考范100（1）X要有一定质量保证每次测定的SD两次化验的差异结果如果＜3SD这种差异就无临床意义准确度、精度、SE、RE关系第六章生化室中计算机的应用LIShostconterHISLIS输资料，eg：、、、种族、出生日期、病史调用的资料（有分级HIS包括：断病情（自述的病史资料、号调用的资室：输资料、病情（自述和医生检查结果）,治疗情况、处理方法、方式,用药情况,查找化验资料,每日检查情况,用药情况,调用资料,查结果,通过电药房：根据医嘱药物,输内容,与医生直通科（用分级调用本科内所有资（二）用SDI酶的分析、TDM的应用及监测，各种组合结果的LDH、AST、CKI酶，α－HBDeg：凝血酶原，凝血因子（X、ⅫI、Ⅶ）纤溶酶原，前激肽酶Fe蛋白，动员有关eg：唾液和胰淀粉酶，胰脂肪酶，胃蛋白酶，胰蛋白酶和酸性磷酸酶等。组织专一性酶：OCT、SDH、ADH主要存在于肝。其活性能较特异地反cell的病变。 C=0＋NADH＋H+LDHCH－OH＋NAD+ （CH2）2＋HC－NH2ALT（CH2）2＋C＝0 α-酮戊二酸丙氨酸谷氨酸对 酚磷酸盐对 66ATP磷酸键断裂。二、酶名（1）1为氧化还原酶类CH－OH受体：NADCH－OHCH－OH（二）肝或网状内皮系统对酶的清除：（一）1umol的基质发生转化所需要的酶量。（U/L）酶单位＝A样品/A标准×C标准×Vt/Vs×1/t×1000酶＝A样品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000消光系数比色杯厚度LDH2五、疾病时酶改变的机制：肾衰→尿少→血淀粉酶↑ASTAST谷草转氨酶（GOT）一、AST其中以心肌cell含量最丰富。（M－ASTAST很少，只有上述组织发生病变 （CH2）2＋CH2 AST（CH2）2＋CH2 HC-NH237℃HC－NH2 酮戊二酸天门冬氨 酸 2.4－二肼 与标准浓度酸生成的苯腙比色（505nm）溶血标本不能用于AST测定，因为RBC中AST是10倍M－AST、C－AST理化性质，Ag性均不同，由不同控制，但催化相I酶草酰乙酸是AST

所以肝疾病AST、ALT同时，使酸消耗，AST测定结果减低LDH酸↑α-酮戊二酸＋天门冬aaAST草酰乙酸＋谷原理：L－天门冬aa.＋α-AST草酰乙酸＋NADH＋HMDHL－苹果酸＋NAD+吸光度下降值，计算AST参考值：男＜40u/L37℃女＜35u/L37℃（1）采血后立即分离，避血溶血（2），室温4-8h，2-6℃7d-20℃8月不不能用草酸盐抗凝剂，因为可抑制ASTα-酮戊二酸＋NADH＋H+＋NH3GLDH消耗NADH＋H+酸＋NADH＋HLDH乳酸＋HAD+消耗NDAH＋H+，使结果偏高确反映ASTMDH、LDH共同作为指示酶AST在心肌中含量最多，所以在急性心梗时6-12h↑，48h达，3-5d恢复常急性肝炎，手术后，药物，AST明显↑Ca、慢性肝病，心肌炎，AST中度临床早期ASTI<黄>酶测定时心梗的意义心肌C、肝C出现实质性损害 心梗M－AST↑所以M－AST越↑，心梗并发心衰的、率越↑，尤其推测率方面意义更大。乳酸脱氢酶的测定：原理PH ILDH1－LDH5一、LDHLDH。主要催化以下反应：L－乳酸＋NAD＋酸＋NADH＋H+PH碱正反应（L－P）PH中性逆反应（P－L）原理：L－乳酸＋NAD＋ 酸＋2.4－二肼→酸－2.4－二加 棕红标本严禁溶血因为RBC内LDH是内的100倍 ：＜实验＞原理：L－乳酸＋NAD＋PH8.8- 酸2-3倍丙酸酸＋NADH＋H+NAD+，只是L－PNADH＋H+3％，样品少3倍，利于测定。底物L－乳酸与逆反应底物酸稳定L－乳酸对LDH的抑制低于酸对LDH的抑NAD+不稳定，产生对LDH有抑制作用的物质。在碱性液中比在酸性液Tris缓冲液中比在磷酸NADH＋H+LDHNADH＋H+质量，NADH＋H+Tris缓冲液，分别在260nm340nm测吸光度，应＜2.3，若＞2.3260nm处有吸NAD+、腺苷。α－酮丁酸，羟基酸、乙醛酸可代替酸作底物

心梗：12-24h，LDH↑，48-72h达，1-2W后恢复正LDH活性物质，如尿素，PHLDH尿毒症患者LDHLDHLDHI酶：<实验LDH有两个亚单体：M（肌肉）H（心，组成的四聚体。 心肌CellRBCWBC HHHM HHMM肺、脾、胰、甲状腺、L H亚基酸性aaLDH1 NADH＋H+＋氧化型PMS 还原型PMS 甲？兰临床意义：P24715- LDH1＞＞LDH2 ∵心肌C内LDH1大量入肺梗塞 早期 LDH1LDH2α－LDH无LDH，HBD也检测不到碱α－酮丁酸＋2.4肼-----棕色490nm 颜色越深,说明HBD活性越低。 肝脏疾病 正常人急性心梗 （CK－CK主要在胞桨和线粒体。骨骼肌↑↑、心肌、脑、、、、肝、RBC中肌酸 Mg２＋、ADPCKCKMn２＋、Ca２＋、Cu２＋、Zn２＋抑制CK同工酶三种：CKBB、CKBB、CKMM 磷酸肌 H３ 颜色越深，CK 肌酸 颜色越深，CK活性越高。 肌酸 α-荼酚和双乙酚对胍基化合物都可产生红色反应，如：肌酐，胍乙酸，精aa。尿毒症的肌酐 影响CK比色。肌酸 ADP＋磷酸烯醇式酸---------盐 乳酸340nmNADH＋H＋下降有内源性酸影响，做空白。 340nm监测吸光度↑，CK↑参考值：男38-174 女26- ∴GRCKNADPH＋H＋，而ZGSHGSSG。NAC（乙酰半胱氨酸）ZGSHCK↓（AK RBC内无CK，严重溶血，使AK（AP5AAP5A对肌肉，RBCAK抑制作用大。AP5AAKCK4h，4℃12h酶即可失活，硫基被氧化。急性心梗， CK↑，12-24h达，升高幅度大，2-4d恢复正常CK测定应用于肌肉CKI 0|原理：PH8.6I酶同时向阴极泳动，CKMMCKMB，CKBB几乎原地不动。（二）免疫抑CKB亚单位结果CKMB，CKMMI酶，以CKMBNaK+Cl－、Ca2＋、Mg2＋、P、Fe、Zn、Cu等浓度相对恒定。钾：血K98％位于cell内。RBC内K104mmol/L，内K3.5-内KRBC∴钾是cellNa140mmol/L，cell内Na12mmol/L 44％在cell外液，46％在骨骼中，10％在cell内液。可交换Na cell内外液的Na Na45％1％内标法：用锂（铯）K、Na内标法：Li671nm （ISE：＜ Na电 玻璃 K电 需更 PH值的稀释液进入稀释再钾电极

按血浆水概念，直接电位法测得结果比火焰法高7-9急性肾功能衰竭∵尿少→排KK↑肾cell大量破坏→cellK大量入血。急性酸或缺氧∵酸，cell内K大量移至cell外钾摄入不足，eg严重，腹泻，胃肠减压K过多，cell外K大量移入cell血KK液体，使cellK↓。2）急性碱，cell外K移至cell内。胰岛素治疗，将葡萄糖合成糖元，cell外K移入cell内，使血严重，腹泻，胃肠造瘘大量应用排Na大面积烧伤，广泛性炎症。∵血浆外渗，血Na注：所测Na含量与机体总Na量并不成比例机体Na↓，通过垂体后叶H调节，使肾小管对水重吸收↓，Na可N。单位：100mL在37℃与基质作用15min，产生1umol酸为1单C样＝A样/A标×C标×V标/V2．钙的测定Ca2+1％。

小肠上段吸收。PH↓VitDCa的吸收。40-50%Ca被吸收入血。∴PH↑，Ca2＋；PH↓Ca2＋↑，但总Ca不变2KMnO4＋3H2SO4＋草酸盐→K2SO4＋2MnSO4Ca2+Ca参考值：成人2.1-2.5mmol/L（8.4-10mg/dL） 原理：邻甲酚酞络合酮是一种酸碱指示剂，也是金属络合酸中性无色碱 紫Ca2+＋邻甲酚酞络合酮PH11.0 575nm比色加入8－羟基喹啉消除Mg2+干扰。∵Mg2+也可与邻甲酚酞络合酮反应。 儿童：2.25-2.67mmol/L(9-11Mg/dL)（玫瑰红色）（紫兰色660nm处 溶血和胆红素无干扰，Hb20g/L，BiL20Mg/L可无影响，脂血可产生正干扰，要加空白。甲方接受EDTA治疗，不能用此法测定。Ca及VitD摄入不足，吸收不良，egCa 此时离子钙N或 a↑（1） Ca骨肿瘤egCO2张力的疾病，eg：肺气肿，慢性肺功能衰竭。CaCa2+Ca2+在膜内，外两面分布不均。将产生跨膜参考值：成人1.13-1.3mmol/L（4.5-5.2Mg/dL）儿童1.18-1.35mmol/L 30U/mL，可使[Ca2+]3-5％。Ca2+PH改变而波动。PH[Ca2+]↑PH↑[Ca2+]∴总Ca不变，临亦可出现现象4．无机磷的测定400-800gP70-80 70％±Ca.P代谢调节主要是甲状旁腺素（PTH，降钙素，VitD 二、方法学介绍：测定无机P＜实验 660nm比P0.97-1.61mmol/L（3-5Mg/dL）1.29-1.94mmol/L（4-6Mg/dL）标本避免溶血，∵溶血，RBC内有机P进入，经磷酸酶水解，生成无20％为宜。酸H2PO-4:HPO42-=1：1碱H2PO-4:HPO42-=1：9 尿液 PMg/dLmmolMeg340nm处测吸光度，与同样处理标本比较，可测得P含量。溶血标本不能用于测于测底

水溶性标准和标准反应不一致，建议采用标准较理想PH↓至1.0 生理性变化：糖代谢旺盛，中P →cell内参与代谢 血P↓妊娠，血P↓P↑：①甲状旁腺功能减退PTHP③肾功不全，肾排P，血②组织利用糖↑eg

∵妨碍VitD和P的吸收，血cell内、外均有分布，cell内含量为cellcl-是cell血浆中以NaCl形式存在，RBC内以KCLHg(NO3)2滴定Hg（NO3）2HNO3和蒸馏水防止HgO沉淀。标本取出后，立即将和RBC分离，放置过久，血中CO2溢变碱为维持血酸碱平衡，cl-cell内→ 难点在于终点的判定血中有高pnoBiL，加2滴HNO3 2＝二苯卡巴腙用乙醇溶解，HNO3避免乙醇沉淀蛋白质，影响原理：2Cl-＋Hg(SCN)2→ →Fe（SCN）3紫红色络合物试剂性、腐蚀扰，BiL22Mg/dL,TG600Mg/dL可血Cl↑（1）急、慢性肾小球肾炎导致衰竭及和输尿管梗阻，导致肾

Cl↓（1）未测定：Ca2AG指未测定阴、阳离子之差，∵血浆中阴、阳离子数相等。 AG↑ 酯（1）评价冠心病的（1（2）（CH游离 脂型 游离chol＋脂肪，，肝是合成，chol的重要，肾上腺、脾、心、肾、、动脉壁也能合成少chol。Chol经胆汁，从粪便排出体外，是合成胆汁酸，肾上腺皮质H，性H，VitD等生理 cell膜的主要成份。L-B反 醋酸酐＋H2SO4＋chol→呈色 此反应比L-B反应敏感7倍L-BH2SO4浓度及外来水份影响，同时与反应时间、温度、光线都有密切关chol测定：每一步受？影响，可去除？三步法＋皂苷或毛地黄皂苷醇化后反应（四步法chol。不需要样本的，无chol分离，纯化步骤。磺柳酸：提高重复性，使试剂粘稠度降低。Pro、Hb、BiL、Vit对呈色干扰chol测定之间，进入有机相的萃取。pro、aa不能排除游离和脂化chol、BiL皂化：将胆固醇酯水解成游离chol和脂肪酸。精密度：准确度都很好，是目前测定chol本法除去游离和脂化cholproaaBiLchol纯化，消除非特异性产色成份干扰。更精密、准确是除酶法外，精密度2.68-5.89mmol/L

100-chol测定标准必须。一般用参考作标准使反应同步中chol与chol（溶解于醇类，水溶液cholCEH，测游离chol化学法测量总chol毛地黄皂苷沉淀游离chol化学法测沉淀中游离chol生理变化：高蛋白，高脂饮食影响，脑力劳动者病理性：↑（1）甲状腺功能↓AA胆总管堵塞chol↑chol醋（CE）/chol↓（1） ∵RBC合成（TG一、TG合成部位和概况TG又称三酸甘酸酯，中性脂类，TG占总脂类TG在乳糜微粒，前脂蛋白（VLDL）TGCE与chol的合成萃取溶剂：甲醇，乙醇，氯仿，异丙醇，，乙烷。TG分离。BiL，游离第三步：甘油＋高碘酸→＋甲酸＋碘酸 ＋盐酸苯肼－高铁氧化钾→红色二苯基甲 较少＋三氮唑→紫色，三氮唑复合物甘油＋高碘酸→＋甲酸＋碘＋乙酰＋NH3 黄色，420nm比色。参考值：男0.57- 女0.43-＞2.26mmol/L乙丙醇先与混合，抽提，再加入AL2O3吸附饮食对TG有影响，脂餐，碳水化合 chol是饮食影响 ADP340nm吸光度500nmTG成正比 。林为试剂II，其余为试剂I，＋试剂 孵育 TG和磷酸甘油氧化酶催化下生成H2O2，但因体系中无4-氨基安替比林，原反 TG↑：是A粥样硬化发生的重要因一。80％心梗有TG↑血液凝固性↑，发性高脂症，A硬化症、肥胖、阻塞性黄疸、长期饥饿、高脂饮食。TG假性↑对A脂蛋白测定脂蛋白组成，脂蛋白颗粒携带？与甘油三脂，Apo关系（VLDL（3） 密度↑颗粒 正常情况下，CM很少，呈（一。冷却试验，CM全部飘浮在试管上部，是内源性TG的转运形式，以VLDL形式入血正常情况下，肝合成的VLDLVLDLVLDL内TG所含脂肪酸主要来自血脉游离脂肪酸（来自脂肪动员）TGCMCM。电泳时，相当前VLDL13-25cholCMCMVLDLTG及cholTG（三）低密度脂蛋白：LDL含chol最多功能：转运肝合成的内源性cholVLDLApo交换后的降解产生临床发现，ALDL成正相关。临床LDL 颗粒最小的脂蛋白。电泳，位于脂蛋白位置上功能：转源内源性chol总chol25％来自HDL－CHDLchol消除，防止AHDL为“好胆固醇”二、HDL－C测定：＜实验＞P71因为所有脂蛋白中都含有chol 所以要从其它颗粒中分离出HDL，再测其chol。实际是测定chol量而间接测HDLLDL和VLDL中APOBaa。可以和多价阴离子在二价阳离子HDL 上 CE+HH2OCEHchol+脂肪酸 醌亚胺（2）沉淀后，必须及时分离，4h内完成chol测定。否则结果偏PH敏感所以＜30度恒温HDLA粥样硬化HDLTG、chol、PLApoHDL－C/总chol可更好心、脑A硬化度肝病，急性应激反应（手术，心梗），慢性贫血，当TG＜4.52mmol/LN：CM（-、脂蛋白67％、前脂蛋白0-28％、脂蛋白20-30％ ⅠCM↑TG↑↑↑chol↑ⅡaLDL↑chol↑↑ⅡbLDL、VLDLTGIDL↑VLDL↑VLDLCM↑ApoA、B、C、D、E五种亚类亚类灵敏度高，不同ApoVLDL难以进入凝胶，而使在琼脂糖浓度1.5-2％时，只有LDL的ApoB被检出，所以该法测ApoB可用于测定HDLApoA1、ApoA2，所以VLDLApoAApoA快速、灵敏、抗用量少。多用于Apo的测定ApoApoAb125I标记抗原，作为示踪物。双AbAg+AbIC四、ApoA1、ApoB的测定原理：人中的ApoA1和ApoB与相应的Ab相遇，即特异性结合，形成不溶Ag含量成正比参考值：ApoA11.156±0.146g/LApoB ApoA1作为HDL的结构蛋 ApoB作为LDL的结构蛋白所以测ApoA1、ApoB也可反映HDLLDL虽然HDL、LDL可用cholchol只是脂蛋白颗粒的一种组成，ApoA1、ApoBHDL、LDLchol和其他冠心病优选测ApoB，比LDL－C、TG有意义HDL－C、ApoA1↓II乙醇性肝炎ApoA1↑Ag：1.Apo分布在几种脂蛋白中，这些脂蛋白颗粒大小，中同一ApoApo不稳定性。中免疫反应性Ab：1.由于Ag存在的问题，所获抗反应性不V、肝A肝通过肝V与体循环相沟通，通过胆道与腔V肝cell肝cell肝cell肝cell合成和胆汁酸帮助脂类的消化和吸收chol→ β肝脏严重损害，纤维蛋白原，凝血因子 是Vit转化，的重要VitA、D、E、K、 VitD第25位的许多H的灭活，排泄与肝有密切关系eg：肝病变，固酮灭活肝硬化腹水、水肿雌H灭活 AT（GPT2、血液蛋白质的测定O＝CO＝CC＝ONHNHR－CHCu2+R－CHCu2+CH-RO=CO=CC=ONHNHR-CH2R-CHCH-原理：含两个或两个以上肽键的aa.在碱性溶液中与二价铜离子（Cu2+）作用，可540nm蛋白质↑，呈色越深。是临床测定pro，最常用方法proCuSO4络合，与酚试剂形成有色化合物Lowry-kalckar公式：蛋白质浓度（mg/ml）=1.54A280-0.74A260酪aa.色aa.在280nm和240nm有吸收峰 核酸在280nm和260nm也有吸收 蛋白质解离-NH+4+的阴离子 ：考马斯亮蓝、丽春红S双缩脲100mg中等小快、简最常用方法1mg结合（考）1mg紫外分光10mg较严重大快、简 与同样处理的标准浓度比较pro颗粒↑，折光性↑总蛋白↑：脱水、慢染总蛋白↓：肾病综合症，，长期发烧、摄入不足，肠道吸收不好（1）重症肝病，门V，肝V短路，代谢受阻，血氨 肝纳氏试剂显色法：1、2NH32NH4++K2CO2→NH3↑+2K++2NH3+H2SO4棕黄色碘化双NH3+H2SO4注 11-12.4，提供碱性环境，便于NH3生成蓝色与同样处理标准液比 纳氏试剂10-60mg8dl全血酚一次氯酸盐46-139mg/dl全血酶法20-80mg/dl或血浆吸烟患者及吸烟环境所以吸烟影响血NH3 L-丙aa.+α-酮戊二 酸+2，4－二肼酸-2.4－二L－丙aa+α-酮戊二酸酸+L-谷aaP24215-酸340nm上一页|下一页一、CHE分类CHEIII来源神经细胞、骨髓RBC 分布神经末稍、RBC 生理功能破坏神经递质 底物特异性作用于乙酰胆碱或乙 －ββ－甲基胆碱二、CHE的测定:PH对氨基苯磺酸+重氮苯磺酸+中性:紫色酸、碱性：兰色主要临床意义：AFPCaCa协助肝Ca的分化程原理：磺溴酞钠（BSP）Vpro（pro）结合而运BSP进入肝血窦后被摄取，与胆红素有竞争作用，然后肝cellBSP排入胆汁，经胆道系统排出体外。BSP在酸性溶液中无色，在碱性溶液中呈红色A＝A580-（A560+A600）/2消除BiL和混浊的影响R＝Ct/Co×100%30min,45min正常值：BSP30min<10%注意事项肥胖45min的滞留试验正常值可增至＜87%所以BSP用量与体重有除Dubin-Johnsin综合症外，黄疸作此试验无临床意义Vcell结合，直接排R＝Ct/Co×100%肝cell排泄功能，胆道是否通畅。MAO主要存在于结缔组织中，血中MAOMAOCu 70－580％可以升高项目目的临床意义 反映肝实质（肝cell）损害的酶急性肝炎，性肝炎、坏死性肝炎．升高，慢性肝炎，肝硬化中度或轻度升高。A／G肝间质性损害，白蛋白合成能力↓，γ胆红素反