血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件

血小板免疫和血小板输注无效GianPaoloVisentin教授 纽约州立大学布法罗分校血小板免疫和血小板输注无效GianPaoloVisent血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件人类血小板人类血小板血小板浓缩液血小板浓缩液血小板血小板血小板与炎症出现炎症反应后，储存的血小板活化，激活免疫和非免疫细胞，传递炎症信息，进步活化血小板。血小板与炎症出现炎症反应后，储存的血小板活化，激活免疫和非免血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATPHLA和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效

HLA和HPA粒细胞抗体---TRALIHNA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATPHLA和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效

HLA和HPA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITPDTIP的病原学机制免疫复合体药物和PF4反应，与肝素形成免疫复合体，引发一系列免疫反应，结合Fc受体激活血小板。DTIP的病原学机制免疫复合体药物和PF4反应，与肝素形成免肝素诱发的血小板减少症（HIT)HIT伴有或不伴有血栓，发病率和死亡率都很高抗体相关的HIT与肝素和PF4复合体相关抗体相关的HIT在肝素存在的情况下可以诱导血小板活化肝素诱发的血小板减少症（HIT)HIT伴有或不伴有血栓，发病HIT病原学机制HIT病原学机制肝素依赖抗体的检测聚合血小板14C-胺释放试验（SRA)肝素介导血小板凝集反应肝素/PF4ELISA流式细胞检测肝素依赖抗体的检测聚合血小板DITP试验药物加样，孵育洗板，除去未结合和Ig与抗-人Ig，孵育阳性=血小板结合药物Ig>无结合血小板血清DITP试验药物加样，孵育洗板，除去未结合和Ig与抗-人Ig血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATPHLA和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效

HLA和HPA粒细胞抗体---TRALIHNA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP血小板同种抗原（HPA）血小板膜糖蛋白具有多态性蛋白的构象改变，对功能没有影响，但是在血小板输注和怀孕时，这些改变可能成为抗体的结合点同种免疫反应有时很严重血小板同种抗原（HPA）血小板膜糖蛋白具有多态性血小板表面GP糖蛋白的多态性血小板表面GP糖蛋白的多态性HPA相关的免疫性血小板减少HPA相关的免疫性血小板减少HPA系统HPA系统HPA系统HPA系统HPA系统HPA系统HPA等位基因频率HPA等位基因频率人类GPIII基因早期变异人类GPIII基因早期变异血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATPHLA和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效

HLA和HPA粒细胞抗体---TRALIHNA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP严重的NATP严重的NATPNATP的病因学NATP的病因学HPA基因多态性频率表HPA基因多态性频率表CD36（GPIV)糖蛋白88KD在单核细胞，血管内皮细胞，有核红细胞，脂肪细胞和血小板上有表达受体:I&IV型胶原，疟疾感染红细胞，血小板反应素，氧化LDL，长链脂肪酸同种抗原NaKa-1989CD36（GPIV)糖蛋白88KDCD36缺乏血小板：亚洲人：3-11%美国-非洲人：2.5%沙哈拉非洲人：7.8%高加索人种：0.06%第一类：血小板和单核细胞缺失，导致输血或怀孕产生抗CD36的反应第二类：仅仅是血小板缺失CD36缺乏血小板：CD36基因32kb,15外显子染色体：7q11.12日本:CD36缺失出现4个变异

T478C在外显子4上的变异最常见

Pro90Ser,81Kb阻止变异非洲:CD36缺失出现7个变异

T1264G在外显子10变异最常见终止密码子CD36基因32kb,15外显子NATP的诊断NATP的诊断常用诊断NATP的方法比较单克隆ACE28/32免疫荧光21/32（主要是流式细胞技术）GTI或其它公司ELISA14/32全部基因型12部分基因型5很多实验室联合应用多种方法常用诊断NATP的方法比较单克隆ACE血小板抗体ELISA检测血小板抗体ELISA检测流式细胞仪（免疫荧光）流式细胞仪（免疫荧光）流式细胞仪的应用流体学原理流式细胞仪的应用流体学原理FC放散光路FC放散光路FC分离细胞群FC分离细胞群荧光柱状图荧光柱状图血小板多态性Luminex100/200磁珠法检测血小板多态性Luminex100/200磁珠法检测Luminex检测血清和磁珠孵育洗涤抗-人IgG孵育调整体积收集数据分析数据Luminex检测血清和磁珠孵育商品化的血小板抗体检测试剂GTI:PAK-PlusTM,PAK-AutoTM,PAK-LX,MACE-1TM,PF4-enhancedIMMUCOR:•Capture-PTM,MCPTM,Capture-PReadyScreenTMSTAGO:•HITTMDiaMed:•ID-HATBiotest:•Thrombomatch•HPA-1aTyping•HPA-1aTyping商品化的血小板抗体检测试剂GTI:血小板抗原基因型检测PCR-SSP血小板抗原基因型检测PCR-SSPReal-timePCR检测基因型Real-timePCR检测基因型血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATPHLA和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效

HLA和HPA粒细胞抗体---TRALIHNA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP血小板输注无效诊断血小板输注无效诊断血小板配型HLA-A\B相合提供无相关HLA-抗体的血小板如果无相合的血小板，可以提供血清学配型阴性的血小板输注HLA-C是否相合，影响不大一些HLA-B抗云不相合（HLA-B45,44)在血小板上表达弱，可以不予考虑如果血清学配型的血小板输注无效，应寻找HLA相合的供者ABO血型在血小板上表达，ABO同型输注十分重要血小板配型HLA-A\B相合血小板形态血小板形态血小板同种抗体HLA的分子结构导致抗体产生不同同种免疫反应有不可预知性由于HLA抗原的多态性（CREGs),同一种HLA分子可以产生多种抗体，血小板同种抗体HLA的分子结构导致抗体产生不同HLA抗体检测方法补体依赖固相检测

CDC-ELISA-流式PRAAHG-CDC-Luminex检测

-敏感度低-敏感度高-补体依赖的抗体-补体依赖、不依赖抗体均可HLA抗体检测方法补体依赖HLA抗体检测方法比较

敏感度通量自动化费用/样本配置设备AHG-CDC低低不低显微镜ELISA中-低高是12美金读板机Flow-PRA高中-高是？30美金细胞计数仪（3色）Luminex高高是10美金LuminexHLA抗体检测方法比较

敏感度通量自动化费用/样本配置设备A相对敏感度的比较Flow>ELISA>AHG-AugmentedCDC>CDCFlow>ELISA>AHG-AugmentedCDC>CDC相对敏感度的比较Flow>ELISA>AHG-Aug流式细胞仪检测敏感不需要补体IgG特异性HLA抗原特异性流式细胞仪检测敏感流式-PRA32种不同的磁珠包被HLA-I和II类抗原判断主观HLA特异性需进一步检测流式-PRA32种不同的磁珠包被HLA-I和II类抗原什么是PRA？群体反应性抗体检测抗体检测是通过HLA特异性细胞完成器官移植，用来判断抗HLA的程度抗原的范围不确定，一般是常见的抗原什么是PRA？群体反应性抗体检测流式方法检测PRA流式方法检测PRA流式方法检测PRA流式方法检测PRA输血后HLA-I抗体的表达输血后HLA-I抗体的表达Luminex方法检测HLA抗体高通量多元化检测敏感、准确，可以判定HLA抗体的特异性反应易观察Luminex方法检测HLA抗体高通量双色，100个磁珠判定准确结果双色，100个磁珠判定准确结果Luminex方法的抗体检测实验13种不同的Luminex磁珠分别代表HLA-I,II抗原每个磁珠包被6种HLA-I细胞和8种HLA-II细胞Luminex方法的抗体检测实验13种不同的Luminex磁Luminex检测系统Luminex检测系统Luminex抗体检测Luminex抗体检测REALREAL血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATPHLA和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效

HLA和HPA粒细胞抗体---TRALIHNA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP输血相关急性肺损伤TRALI定义：急性肺损伤（ALI)发生在输血后6h以内，并且以前无急性肺损伤病史，无其它相关的急性肺损伤的危险因素。可能TRALI：ALI发生在输血后6h以内，以前无急性肺损伤病史，存在一个以上相关的急性肺损伤的危险因素ALI定义：SpO2<90%orPa02/Fi02<300mmHg血氧偏低X线有渗出性病变输血相关急性肺损伤TRALI定义：输血相关急性肺损伤急性肺损伤的危险因素直接肺损伤间接肺损伤呼吸脓毒症肺休克吸入性中毒外伤肺挫伤烧伤溺水急性胰腺炎心肺搭桥药物中毒输血相关急性肺损伤急性肺损伤的危险因素不同血液制品TRALI的发生率不同血液制品TRALI的发生率TRALITRALI反应模式图反应模式图人粒细胞抗原系统（HNA）人粒细胞抗原系统（HNA）人粒细胞抗原系统（HNA）人粒细胞抗原系统（HNA）粒细胞特异性抗体的临床应用非溶血性发热反应TRALI新生儿粒细胞减少症自身免疫性粒细胞减少症骨髓移植后持续性粒细胞减少粒细胞特异性抗体的临床应用非溶血性发热反应下一步下一步HLA\HPA供者库的建立HLA\HPA供者库的建立血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效GianPaoloVisentin教授 纽约州立大学布法罗分校血小板免疫和血小板输注无效GianPaoloVisent血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件血小板免疫和血小板输注无效-Gian-Paolo-Visentin课件人类血小板人类血小板血小板浓缩液血小板浓缩液血小板血小板血小板与炎症出现炎症反应后，储存的血小板活化，激活免疫和非免疫细胞，传递炎症信息，进步活化血小板。血小板与炎症出现炎症反应后，储存的血小板活化，激活免疫和非免血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATPHLA和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效

HLA和HPA粒细胞抗体---TRALIHNA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATPHLA和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效

HLA和HPA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITPDTIP的病原学机制免疫复合体药物和PF4反应，与肝素形成免疫复合体，引发一系列免疫反应，结合Fc受体激活血小板。DTIP的病原学机制免疫复合体药物和PF4反应，与肝素形成免肝素诱发的血小板减少症（HIT)HIT伴有或不伴有血栓，发病率和死亡率都很高抗体相关的HIT与肝素和PF4复合体相关抗体相关的HIT在肝素存在的情况下可以诱导血小板活化肝素诱发的血小板减少症（HIT)HIT伴有或不伴有血栓，发病HIT病原学机制HIT病原学机制肝素依赖抗体的检测聚合血小板14C-胺释放试验（SRA)肝素介导血小板凝集反应肝素/PF4ELISA流式细胞检测肝素依赖抗体的检测聚合血小板DITP试验药物加样，孵育洗板，除去未结合和Ig与抗-人Ig，孵育阳性=血小板结合药物Ig>无结合血小板血清DITP试验药物加样，孵育洗板，除去未结合和Ig与抗-人Ig血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATPHLA和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效

HLA和HPA粒细胞抗体---TRALIHNA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP血小板同种抗原（HPA）血小板膜糖蛋白具有多态性蛋白的构象改变，对功能没有影响，但是在血小板输注和怀孕时，这些改变可能成为抗体的结合点同种免疫反应有时很严重血小板同种抗原（HPA）血小板膜糖蛋白具有多态性血小板表面GP糖蛋白的多态性血小板表面GP糖蛋白的多态性HPA相关的免疫性血小板减少HPA相关的免疫性血小板减少HPA系统HPA系统HPA系统HPA系统HPA系统HPA系统HPA等位基因频率HPA等位基因频率人类GPIII基因早期变异人类GPIII基因早期变异血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATPHLA和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效

HLA和HPA粒细胞抗体---TRALIHNA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP严重的NATP严重的NATPNATP的病因学NATP的病因学HPA基因多态性频率表HPA基因多态性频率表CD36（GPIV)糖蛋白88KD在单核细胞，血管内皮细胞，有核红细胞，脂肪细胞和血小板上有表达受体:I&IV型胶原，疟疾感染红细胞，血小板反应素，氧化LDL，长链脂肪酸同种抗原NaKa-1989CD36（GPIV)糖蛋白88KDCD36缺乏血小板：亚洲人：3-11%美国-非洲人：2.5%沙哈拉非洲人：7.8%高加索人种：0.06%第一类：血小板和单核细胞缺失，导致输血或怀孕产生抗CD36的反应第二类：仅仅是血小板缺失CD36缺乏血小板：CD36基因32kb,15外显子染色体：7q11.12日本:CD36缺失出现4个变异

T478C在外显子4上的变异最常见

Pro90Ser,81Kb阻止变异非洲:CD36缺失出现7个变异

T1264G在外显子10变异最常见终止密码子CD36基因32kb,15外显子NATP的诊断NATP的诊断常用诊断NATP的方法比较单克隆ACE28/32免疫荧光21/32（主要是流式细胞技术）GTI或其它公司ELISA14/32全部基因型12部分基因型5很多实验室联合应用多种方法常用诊断NATP的方法比较单克隆ACE血小板抗体ELISA检测血小板抗体ELISA检测流式细胞仪（免疫荧光）流式细胞仪（免疫荧光）流式细胞仪的应用流体学原理流式细胞仪的应用流体学原理FC放散光路FC放散光路FC分离细胞群FC分离细胞群荧光柱状图荧光柱状图血小板多态性Luminex100/200磁珠法检测血小板多态性Luminex100/200磁珠法检测Luminex检测血清和磁珠孵育洗涤抗-人IgG孵育调整体积收集数据分析数据Luminex检测血清和磁珠孵育商品化的血小板抗体检测试剂GTI:PAK-PlusTM,PAK-AutoTM,PAK-LX,MACE-1TM,PF4-enhancedIMMUCOR:•Capture-PTM,MCPTM,Capture-PReadyScreenTMSTAGO:•HITTMDiaMed:•ID-HATBiotest:•Thrombomatch•HPA-1aTyping•HPA-1aTyping商品化的血小板抗体检测试剂GTI:血小板抗原基因型检测PCR-SSP血小板抗原基因型检测PCR-SSPReal-timePCR检测基因型Real-timePCR检测基因型血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP自身免疫引起的血小板减少症-ITP,AITP新生儿同种免疫血小板减少症-NATPHLA和HPA输血后紫癜-PTP血小板输注无效

HLA和HPA粒细胞抗体---TRALIHNA血小板免疫失调药物诱发的血小板减少症-DITP血小板输注无效诊断血小板输注无效诊断血小板配型HLA-A\B相合提供无相关HLA-抗体的血小板如果无相合的血小板，可以提供血清学配型阴性的血小板输注HLA-C是否相合，影响不大一些HLA-B抗云不相合（HLA-B45,44)在血小板上表达弱，可以不予考虑如果血清学配型的血小板输注无效，应寻找HLA相合的供者ABO血型在血小板上表达，ABO同型输注十分重要血小板配型HLA-A\B相合血小板形态血小板形态血小板同种抗体HLA的分子结构导致抗体产生不同同种免疫反应有不可预知性由于HLA抗原的多态性（CREGs),同一种HLA分子可以产生多种抗体，血小板同种抗体HLA的分子结构导致抗体产生不同HLA抗体检测方法补体依赖固相检测

CDC-ELISA-流式PRAAHG-CDC-Luminex检测

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敏感度通量自动化费用/样本配置设备AHG-CDC低低不低显微镜ELISA中-低高是12美金读板机Flow-PRA高中-高是？30美金细胞计数仪（3色）Luminex高高是10美金LuminexHLA抗体检测方法比较

敏感度通量自动化费用/样本配置设备A相对敏感度的比较Flow>ELISA>AHG-AugmentedCDC>CDCFlow>ELISA>AHG-AugmentedCDC>CDC相对敏感度的比较Flow>ELISA>AHG-Aug流式细胞仪检测敏感不需要补体IgG特异性HLA抗原特异性流式细胞仪检测敏感流式-PRA32种不同的磁珠包被HLA-I和II类抗原判断主观HLA特异性需进一步检测流式-PRA32种不同的磁珠包被HLA-I和II类抗原什么是PRA？群体反应性抗体检测抗体检测是通过HLA特异性细胞完成器官移植，用来判断抗HLA的程度抗原的范围不确定，一般是常见的抗原什么是PRA？群体反应性抗体检测流式方法检测PRA流式方法检测PRA流式方法检测PRA流式方法检测PRA输血后HLA-I抗体的表达输血后HLA-I抗体的表达Luminex方法检测HLA抗体高通量多元化检测敏感、准确，可以判定HLA抗体的特异性反应易观察Luminex方法检测HLA抗体高通量双色，100个磁珠判定准确结果双色，100个磁珠判定准确结果Luminex方法的抗体检测实验13种不同的Luminex磁珠分别代表HLA-I,II抗原每个磁珠包被6种HLA-I细胞和8种HLA-II细胞Luminex方法的抗体检测实验13种不同的