自身抗体的检测

关于自身抗体的检测第1页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗核抗体（ANA）的检测与临床应用

抗核抗体的定义传统定义：针对细胞核成分抗原总称。广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解不再局限于核成份，而是指核质和核蛋白的总称。第2页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六ANA测定原理和方法：间接免疫荧光法（IIF):现多以Hep-2细胞（人喉癌上皮细胞）为底物（Ag)，其以核质丰富而极大地提高了ANA检测的阳性率和滴度。是系统性红斑狼疮（SLE）的标准筛选试验。我们实验室采用欧蒙荧光检测系统，将1:100作为血清起始稀释度，所以如果是低滴度的1:100阳性，只能视为一个临界可疑值，临床意义不大。ANA作为自身免疫性结缔组织病的筛选试验必须强调高滴度。第3页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六ANA的靶抗原分布

整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。第4页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六ANA检测的临床意义

ANA可见于多种自身免疫性疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织疾病的诊断，病情判断和疗效观察的指标第5页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六已证实ANA对很多自身免疫性疾病有诊断价值。ANA的靶抗原为细胞核内的不同生化成份，包括核酸、细胞核蛋白和核糖体蛋白。在不同疾病中，特别是风湿性疾病，其抗体谱有一定的特意性。在炎症性风湿病中ANA阳性率在20%-100%之间，其中类风湿性关节炎中ANA阳性率最低，为20%-40%。所以，检测ANA对于不同类型风湿病意义重大。第6页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六⑴SLE活动性：占95%-100%，非活动性：占80%-100%。（2）药物诱导的SLE：占100%。（3）混合性结缔组织疾病：占100%。（4）其它风湿性疾病：占20%-50%

（5）进行性系统硬化症：占85%-95%。（6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。（7）干燥综合征：占70%-80%。（8）慢性活动性肝炎：占30%-40%。（9）溃疡性结肠炎：占26%。常见疾病第7页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六其它还可见于：非结缔组织疾病中也可出现阳性；正常人（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为IgM型；高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病。第8页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六ANA（＋）的原因风湿性疾病SLE多发性肌炎干燥综合征硬皮病血管炎RA正常的健康人女性＞男性，出现率随年龄而增加风湿性疾病患者亲属？孕妇药物诱导慢性肝脏疾病慢性肺部疾病慢性感染血液系统异常恶性肿瘤第9页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六SLE患者使用IIF法测定ANA阴性的一些解释

技术方面临床方面经皮质激素或免疫抑制剂治疗。终末期肾病。隐蔽ANA：与循环中免疫复合物结合，沉积于组织。由于大量蛋白尿而从肾脏丢失。第10页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六ANA的荧光染色型别细胞核：核均质型（DNA、组蛋白和核小体等）核颗粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和Ⅱ型周期蛋白）核膜型（板层素、gp120等）核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纤维蛋白等）核浆点型（着丝点、核多点及核少点型）细胞浆：胞浆颗粒型（线粒体、Jo-1、核糖体等）胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心体等根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：第11页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六ANA筛查的方法间接免疫荧光法（IIF）基质组合为：HEP-2细胞+灵长类肝（猴）

第12页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六核颗粒型：核粗颗粒型第13页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗核抗体染色类型核仁型（nucleolar）第14页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六均质性（homogeneous）第15页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六ANA的荧光类型ANA试验的结果中一般会报告其分型，这些分型可能与某一特定的抗原反应活性相关。分型

相关疾病

核仁型硬皮病着丝点型CREST综合征周边型SLE斑点型/弥散型混合性结缔组织病（MCTD）第16页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗双链DNA抗体（ds-DNA）

的检测与临床应用

第17页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六检测：测定抗ds-DNA以血鞭毛虫属的绿萤短膜虫为靶抗原基质，可联合使用HEp-2细胞及灵长类肝组织检测。

自身抗原：位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。第18页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗dsDNA抗体荧光模式：绿蝇短膜虫：动基体均质的或边缘亮度增强的荧光。Hep-2细胞：细胞核的均质型荧光。第19页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六临床应用抗双链DNA抗体（ds-DNA）是系统性红斑狼疮的特异性抗体，其阳性率因检测方法而异，在40-90%。但抗ds-DNA阴性并不能排除患有SLE的可能性。抗ds-DNA抗体具有预测价值，85%的出现抗ds-DNA抗体的健康人在五年内发展为SLE。已证实抗ds-DNA抗体参与SLE的病理过程，在疾病形成过程中，抗ds-DNA和其抗体形成的免疫复合物沉积在皮下毛细血管、肾和其他器官内，激活补体系统，从而导致组织损伤。

第20页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗体水平与疾病活动度相关，随着疾病活动的控制，抗ds-DNA抗体滴度可以下降或消失。

第21页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六

ANA谱3检测及临床应用第22页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗RNP/Sm抗体荧光模式：Hep-2片：细胞核粗颗粒，核仁阴性。肝组织切片：同上。荧光法不能区分抗RNP和抗体Sm。第23页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗RNP/Sm抗体自身抗原：抗原RNP和Sm属于一组小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多种蛋白质组成，RNA中尿苷（U-RNA）含量较高。临床意义：高滴度的抗RNP抗体为混合结缔组织病（MCTD）的特征，发生率为95~100%。也可出现于SLE，但总是与抗Sm抗体同时出现。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性，发生率为20~40%。第24页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗SSA／SSB抗体荧光模式Hep-2片：细胞核呈细颗粒荧光，核仁不发光。肝组织片：细颗粒荧光。第25页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗SSA／SSB抗体自身抗原：SSA抗原是一个小核糖核蛋白，由一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD的磷酸化蛋白。临床意义；最常见于干燥综合征（SS）,也见于SLE、原发性胆汁性肝硬化（PBC），偶见于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发生率几乎为100%。第26页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六核仁阳性(Nucleolar)核仁荧光增强，核浆均质型---Scl-70抗体。核仁均质型---PM-Scl及其他抗原抗体。核仁细颗粒型---原纤维蛋白抗体。核仁粗颗粒型---RNA多聚酶-1抗体。第27页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗Scl-70抗体荧光模式：Hep-2片：细胞核几乎均质的荧光，核仁荧光加强而且也为均质型，胞浆无荧光。肝组织片；细胞核颗粒或均质型荧光，常见到细胞核荧光。第28页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗Scl-70抗体自身抗原：为DNA拓扑异构酶1，分子量为100KD。在DNA双链的复制和转录中起作用。临床意义：25~70%的系统性硬化症（PSS）弥漫型患者阳性，局限型硬皮病患者阴性。第29页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六细胞浆阳性胞浆均质型---抗核糖体抗体细颗粒---抗Jo-1抗体

胞浆颗粒型粗颗粒---AMA抗体滴状点状---溶酶体抗体核周颗粒--高尔基体抗体胞浆纤维型细纤维---波形蛋白抗体环状纤维---原肌球蛋白抗体针状纤维---肌动蛋白抗体第30页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗核糖体抗体荧光模式：Hep-2：胞浆细颗粒到均质状、非常致密的荧光。肝组织片：岛状荧光。临床意义：SLE的特异性抗体，与精神症状有关。第31页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗Jo-1抗体荧光模式：Hep-2：胞浆颗粒到细块状荧光。肝组织片：胞浆中弱荧光。自身抗原：组氨酰tRNA合成酶。临床意义：见于PM，发生率25~35%。第32页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗线粒体抗体荧光模式：Hep-2：胞浆内粗的颗粒型荧光。大鼠肾组织切片：肾小管明显荧光，肾小球荧光较弱。第33页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗线粒体抗体自身抗原：位于真核细胞线粒体膜的内面。线粒体自身抗原为2-氧酸脱氢酶复合体的亚单位，为一组自身抗原，其中与PBC有关的包括：（1）丙酮酸脱氢酶复合体（PDC）（2）支链2-氧酸脱氢酶复合体（BCOADC）（3）a-酮戊二酸脱氢酶复合体（OGDC）第34页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗线粒体抗体临床意义：AMA-M2对PBC具有诊断意义。AMA亚型与疾病的相关性：AMA-1：梅毒、干燥综合征AMA-2：PBCAMA-3：药物性红斑狼疮AMA-4：PBC与AIH重叠AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性贫血AMA-6：异烟肼引起的药物性肝炎AMA-7：AIHAMA-8：AIH、闭塞性血栓性血管炎AMA-9：药物性肝炎AMA-10：SLE第35页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六分裂期细胞阳性染色体阳性---染色体相关抗体，相关疾病？纺锤体纤维阳性---纺锤体纤维抗体，如燕麦细胞型支气管肺癌中间体阳性---中间体抗体，相关疾病？细胞两极阳性---中心粒抗体，相关疾病？着丝点阳性---抗着丝点抗体第36页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗着丝点抗体(ACA)荧光模式：Hep-2：细胞核细的、相同大小的颗粒荧光，分裂期颗粒荧光带状位于细胞中间。肝组织片：分布于细胞核的10~20个颗粒，荧光弱，易被忽略。第37页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗着丝点抗体自身抗原：着丝粒中的三种不同的蛋白质：着丝点蛋白A、B、C，主要抗原为着丝点蛋白B。临床意义：对进行性系统性硬化症亚型（CREST综合征）有诊断意义。阳性率80~95%。还可见于PBC、SS等。第38页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六器官/组织特异性自身抗体抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）抗平滑肌抗体抗角蛋白抗体抗肝肾微粒体抗体抗肝细胞膜抗原抗体抗可溶性肝抗原抗体抗肝特异性蛋白抗体第39页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）cANCA荧光模式：猴肝：肝血窦区粒细胞强荧光，而肝细胞阴性。甲醛固定的中性粒细胞：胞浆内粗大到细的荧光颗粒。第40页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）自身抗原：为丝氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。该靶抗原为可溶性蛋白，存在于正常中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中。临床意义：cANCA可见于多种系统性血管炎。主要见于Wengener’s肉芽肿，约占ANCA阳性率的80~95%。cANCA被认为是活动性Wengener’s肉芽肿和微多动脉炎的特异和敏感的标志性抗体。还见于Churg-Strauss综合征。第41页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）pANCA荧光模式：乙醇固定的中性粒细胞：细胞核周围平滑的带状荧光，细胞核阴性。猴肝：肝血窦区粒细胞强荧光，而肝细胞阴性。第42页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）自身抗原：主要抗原为髓过氧化物酶（MPO），其他抗原还有白细胞弹性蛋白酶，组织蛋白酶G、溶菌酶及乳铁蛋白等。临床意义：见于多种系统性血管炎。可见于Wengener’s肉芽肿、微多动脉炎、Churg-Strauss综合征、炎性肠病、自免肝、系统性风湿病（RA、SLE、SS、PM/DM）。第43页，共50页，2022年，5月20日，3点12分，星期六抗平滑肌抗体（SMA）荧光模式：大鼠胃组织，呈现肌膜、黏膜肌层和肌膜腺体间收缩纤维的明显细胞浆荧光。大鼠肾组织，肾小管细胞内原纤维、肾小球