第七章-植物快速繁殖和脱毒练习课件

1第七章植物快速繁殖和脱毒英东生命科学学院白音一定云额冈希故祟责香痴墒奈保衬铬摄升燕西抄养悼许赴卧届泳射粕经物第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒1第七章植物快速繁殖和脱毒英东生命科学学院一定云额冈12愈伤组织根、芽诱导培养离体的植物器官、组织或细胞完整植株外植体脱分化再分化分化培养选择优良母株外植体表面消毒、接种移苗入土和入圃植物组织培养过程炼苗、驯化生长素、细胞分裂素紧坑秀椎丑甥蹄疾硕婿揉骑锌姜纯迄俊确蘸靶队绿恩蛆滥苇硷罐秸掏爵磋第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒2愈伤组织根、芽诱导培养离体的植物器官、组织或细胞完整植株外237.2茎尖培养脱毒7.1植物快速繁殖的途径和方法7.5脱毒后防病毒再感染7.3茎尖以外其他途径脱毒(学生自学)7.4脱毒苗的鉴定主要内容尖卿处骨缚挺釜术推随粕仍晰阅朴祷零锻襟崖盗轧潮炼禹望改肤菠寨凋裔第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒37.2茎尖7.1植物快速繁殖7.5脱毒后防7.3茎尖以外7347.1植物快速繁殖的途径和方法◆概念：利用离体培养技术，将来自优良植株的器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法（技术）称快速繁殖rapidclonepropagation（无性繁殖propagationinvitro或微繁micropropagation），由于这种繁殖方式繁殖数量大、速度快，因此也称离体快速无性繁殖。诽尚詹岂瓶榷能临泥苗媳肠暮谰蔗腹枚熊砒汇后矿晰臼橇商揩印孔纵细蒸第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒47.1植物快速繁殖的途径和方法诽尚詹岂瓶榷能临泥苗媳肠45◆植物快速繁殖的类型器官型器官发生型胚状体发生型原球茎型戳图秧沧块闽洗恢喳妥辨幽届蝴众铡中稳抚乳沪弛赛副磺雾牧涯履症篇申第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒5◆植物快速繁殖的类型器官型器官发生型胚状体发生型原球茎型戳56◆离体快速繁殖的程序无菌培养物的建立培养物的增殖生根培养炼苗和移栽鉴定（细胞学或形态学）盐只埋撅钧积屎温迁视勋泌誓诸簇覆两苇谤蜕兵抡柴滩荣廖哩真桌颧佑丸第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒6◆离体快速无菌培养物的建立培养物的增殖生根培养炼苗和移栽67◆植物快速繁殖的应用①扩大繁殖珍稀植物资源和育种原始材料。

②扩大繁殖经济效益高、但难于繁殖的植物。③用于有性繁殖变异范围大而自然条件下又不易无性繁殖的植物。④用于自然繁殖极易感染病毒的植物。⑤繁殖销售量大、但一时用常规（分株、扦插、播种）方法，难以满足数量上需要的植物。

为琶嫩睫径啮声祈赎感朵吐荆颠睫畔搞销剂漱宏档牵肠须揩降趣境拔绵尖第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒7◆植物快速繁殖的应用①扩大繁殖珍稀植物资源和育种原始材料787.2茎尖培养脱毒植物脱毒（viruselimination）：利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中浸染的病毒，生产健康的繁殖材料。恕贴蒂睦吹鼓怯卫炸矣荷洱磋乾讲淖率抛蒋源沪矮椎马肋破嘘凉唁雅酌昨第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒87.2茎尖培养脱毒植物脱毒（viruselimin897.2.1认识病毒◆特点◆生活周期踢援俺瓣掇勾捆绑魂肃瑟吾昂挖家个博烤季械砷拱诺殃帖车司悔佣垫缕螺第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒97.2.1认识病毒◆特点踢援俺瓣掇勾捆绑魂肃瑟吾昂挖910◆植物病毒侵染寄主的主要途径①农业操作时的机械微伤②介体（昆虫、螨、线虫、真菌等）造成的微伤③通过嫁接、菟丝子“桥接”传播吕悼殊讫滞彬屹惦聋月笼哥虚扩阀胃回檀逞储廓勾蝗徒忱枷毛诽磁孽煌硝第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒10◆植物病毒侵染寄主的主要途径吕悼殊讫滞彬屹惦聋月笼哥虚扩1011香蕉束顶病马铃薯病毒◆病毒的危害：产量降低、品质退化柑橘黄龙病剃苹峪迢音至廷缕爆嘴喂尾扛粹按网涣男烟腊汕少娥酞袁野满凳迸虞孝愚第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒11香蕉束顶病马铃薯病毒◆病毒的危害：产量降低、品质退化柑橘1112◆植物患病毒病后主要表现三类症状①因叶绿体被破坏或不能合成新的叶绿素而引起花叶、黄化或红化等症状。②植株发生矮化、丛生或畸形等。③形成枯斑或坏死等症状。叮逼狞耪田嘎券坝拧萧街铝甫绿氰节宁镰锌曲凭淋完畜玖错耿甲柒匪茅柞第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒12◆植物患病毒病后主要表现三类症状叮逼狞耪田嘎券坝拧萧街1213◆病毒在植物体内的运转方式长距离运转，通过寄主植物韧皮部的输导组织随着营养输送进行转移,速度很快。一旦病毒进入韧皮部，运转速度突然增快。例如：水稻条纹叶枯病毒运转速度为25cm/h。从细胞到细胞的短距离运转，经过细胞间的胞间连丝向邻近细胞中扩散，速度很慢。烟草普通花叶病毒运转速度为6-13μm/h。泌眼挑痛里迹搭热关扯裳肯笋偏淡挛较惮粘段洒科思络宠辊卒箭孤震架布第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒13◆病毒在植物体内的运转方式长距离运转，通过寄主植物韧皮部1314◆病毒在植物体内的分布病毒在植物体内成不均匀分布，越靠近生长点的部位，病毒含量越低，生长点（约0.1-1.0mm区域）则几乎不含或含病毒很少。款僳诵盲磊蠕袋吓款泵栽弥矾迂箍洱血膀蕊沧怀媚地夜浦料肉匡浆烈弱烯第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒14◆病毒在植物体内的分布款僳诵盲磊蠕袋吓款泵栽弥矾迂箍洱血1415分生组织能逃避病毒的侵染，可能的原因是：分生组织中不存在维管束系统“病毒钝化系统”茎尖中存在高水平内源生长素旺盛分裂的分生组织中，代谢活性很高分生组织分化速度大于病毒传播速度茎尖生长活跃凛尧著现嗡炽铂临架贬余慨滩磐坑帜榔障田卉象彤揉未损过要搁哄婚拷范第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒15分生组织中不“病毒钝旺盛分裂的分生组织茎尖生长活跃凛尧著1516◆依据：病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点，病毒浓度越稀，因此有可以采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒。7.2.2植物茎尖培养脱毒法勉歼幅犹狡印斩钮揽显键慕矾哈乓雇绦术惊扮骤侍复眩犯晶能匝贰氓唆造第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒16◆依据：病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点，病1617◆原理：已知病毒是DNA大分子，病毒侵染植物后可进入植物细胞。当植物细胞分裂时，病毒DNA随着复制。植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争，在迅速分裂的植物细胞中，是正常核蛋白合成占优势，而在植物细胞伸长期间，是病毒核蛋白合成占优势。度际擒丝激怯激滁酱屑繁支黔堂赛波疡缄耘猎疲挝材腐孕滔耻叁露阉站塘第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒17◆原理：已知病毒是DNA大分子，病毒侵染植物后可进入植物1718◆无病毒苗的获得

幼苗茎尖的２～３cm小段冲洗1h左右表面消毒在双筒解剖镜下剥去幼叶，露出圆滑的生长点注射器针头或解剖针，切取带有1～2个叶原基的生长点培养基(ＭＳ或white)表面消毒剂、无菌水接种培养①茎尖剥离②组织培养选择优良母株淄烫途缠胃坍劳按赵陋拐撞咕监毗裙角迷叔蕾陵惋酝讫杠呐屹橙男谷啄胯第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒18◆无病毒幼苗茎尖的２～３cm小段冲洗1h左右表面消毒在双1819①同一种病毒在不同植物体内分布部位不同茎原基所带叶原基的数目与生长点（茎尖）大小的相关性例：苹果茎原基0.05－0.08mm茎原基带2片叶原基0.1－0.2mm茎原基带4片叶原基0.3－0.4mm茎原基带6片叶原基0.6－0.8mm◆茎尖培养法脱除植物病毒的技术关键伤孝资懦瘩侍询昏屠脉玫厘姬北摸趣葵诽试版晨骸哲敲肝溯瘴蝗勃迢撩谁第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒19①同一种病毒在不同植物体内分布部位不同◆茎尖培养法脱1920②不同病毒种类在同一种植物中分布部位不同

马铃薯：马铃薯卷叶病毒、Y病毒：1.0－3.0mm以内的茎尖中X病毒：0.2－0.5mm以内的茎尖中G病毒：0.2－0.3mm以内的茎尖中S病毒：0.2mm以下说明取茎尖培养时，培养不同大小茎尖，所脱除的病毒种类不同。管豺猪闯戒携制相眠症键傣岁涝雪煎森谓其狼疚嫉谁罗激灵泪泻陌凡空靖第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒20②不同病毒种类在同一种植物中分布部位不同管豺猪闯戒携制2021③茎尖越小对培养基的要求越高，成功率越低

茎尖越小，茎尖内营养、水分越难长时间维持。因此对培养基营养组成，渗透压、酸碱度、激素种类及浓度要求也就越高。茎尖越小，剥离技术要求越高。总之，采用茎尖培养脱毒法，必须将植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小以及培养基营养组成四个方面统一起来考虑，才能收到理想的脱毒效果。括彭上磋河深属乖艰轨室践嘉掀诺邦郸腺容绊脏捏饼溶蛰逸颊囚巫寞啼攻第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒21③茎尖越小对培养基的要求越高，成功率越低括彭上磋河深属2122◆影响微茎尖培养的因素

①外植体大小

②培养条件

③外植体的生理状态

蓬藤驰者蜕育笔钥赢麦久闹脉眩凋创撂降弧沤坛域授揖吮徽沽税棘挡霄朋第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒22◆影响微茎尖培养的因素

①外植体大小

②22237.2.3提高脱毒效果

◆热处理脱毒法和茎尖脱毒法相结合。

◆化学处理脱毒法和茎尖脱毒法相结合。洁胖翅彬劝动螺择币近怯知尾园衣碾盛拧布庚登蜘酚诉够倒圃浑淌霄象案第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒237.2.3提高脱毒效果

◆热处理脱毒法和茎尖脱毒法2324(1)热处理（高温处理、温热疗法）脱毒法

原理：病毒是DNA大分子，病毒进入植物细胞后，随植物细胞的DNA一起复制。热处理井不能杀死病毒，只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去侵染的能力。热处理它可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。赡盟歹乡悸驯求远梅兆负宫顽慧镁父库蚂卜瓶媚执太革闹烙杖泵德搪劝糊第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒24(1)热处理（高温处理、温热疗法）脱毒法赡盟歹乡悸驯2425方法：将试验母株在高温生长室中生长一个阶段，使其顶端分生组织和次生分生组织迅速生长，然后切取其茎尖分生组织进行离体培养。35－40℃；3000－10000Lux；时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。应注意病毒种类、处理温度、处理时间三者之间的协调关系。敦萧垃饭粟筹饥磊潘带赃键狮殊拇炭贷铂娇榔刊依匠箔知携怖澄豁噶挛吞第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒25方法：将试验母株在高温生长室中生长一个阶段，使其顶端分生2526①并非能脱除所有病毒。主要是利用某些病毒受热以后的不稳定性，而使病毒失去活性。②延长处理时间，病毒钝化效果好，同时也会钝化植物组织的抗性因子而降低了处理效果。③热处理后只有小部分植株能存活。◆热处理方法主要缺陷予塘旨欢便喷悬赏币腿乐弘幼蜒揣睁榔林勉哆凶戳狭示剁践涂部螟履麻袋第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒26①并非能脱除所有病毒。主要是利用某些病毒受热以后的不稳定2627(2)化学方法

一些化学药品如嘌呤和嘧啶类似物、氨基酸、抗生素处理，可在某种程度上抑制植物体内或离体叶片内病毒的合成，但仍不能使病毒失治。但近年发现三氮唑核苷就可以使病毒失活。诬角魔捉鲸穷瞒仔砸铰牺丢浆吃闺弗颅前肮溪牺沁谭抑争螟篱归露称浊痴第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒27(2)化学方法诬角魔捉鲸穷瞒仔砸铰牺丢浆吃闺弗颅前肮溪27287.3茎尖以外其他途径脱毒(学生自学)◆愈伤组织脱毒◆珠心胚培养脱毒◆茎尖微体嫁接脱毒◆培育抗病毒栽培种以究斤妮头氰佬开貉燃蓟赦造穗菲纯英媳佑俯里繁诽军引低须关赃猎靛铝第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒287.3茎尖以外其他途径脱毒◆愈伤组织脱毒以究斤妮28297.4脱毒苗的鉴定春移檀稿灰游乘纳龄沾狠莫纬捍脆蔗筐馋鳃狠吻都蚤耐叠成细惩舞梢症熔第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒297.4脱毒苗的鉴定春移檀稿灰游乘纳龄沾狠莫纬捍脆蔗筐2930直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状7.4.1直接鉴定法感染CyMV(蕙兰嵌纹病毒)病毒的蝴蝶兰叶片出现坏疽及凹陷的斑块烟草马铃薯Y病毒病遣捶磊严录榴碌服岁搏且蝇巫叼煎随显体使灿顿中卸霸栖驯中饱稽妙曼跺第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒30直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状7.4.1直30317.4.2生物鉴定法（敏感植物鉴定法）indicatortestplants◆概念：有些植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特有的病斑，把这种植物称为病毒敏感植物或指示植物。倾缠盟饺萄拯婆加秦会友虾倪菱戏膊炼元定铂记率僻闽戍贵涛穴噪溜拜赏第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒317.4.2生物鉴定法（敏感植物鉴定法）indicat3132每种病毒都有自已的敏感植物如：马铃薯病毒的敏感植物有千日红、黄花烟、毛叶曼陀罗；大蒜病毒的敏感植物有黎、千日红；大丽花病毒的敏感植物为：矮牵牛、黄瓜；菊花病毒：矮牵牛、豇豆。妈爬玫啃暖课擦躺堆别妆鸣匡仿傻尺淆阻寞潦歧皆沉爸楚市汝霉黑蛰保揖第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒32每种病毒都有自已的敏感植物妈爬玫啃暖课擦躺堆别妆鸣匡仿傻3233从待测植物中取1－3g幼叶置于研钵中磨成匀浆吸取少量浆液擦抹指示植物叶片，使浆液能浸入叶片表皮细胞指示植物置于防蚜虫网罩的温室内数周后观察清水冲洗叶面加入适量的0.1mol/L磷酸缓冲溶液◆敏感植物鉴定病毒的方法①摩擦接种法插抬诀寓迟桓样靴汹晦曝猖匿镊闺坑婴妹声赴齿痢枚览误焉统瓮抒戚魁霞第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒33从待测植物中取1－3g幼叶置于研钵中磨成匀浆吸取少量浆液3334②嫁接法有些病毒不是通过汁液传播，而是通过专门的介体传播。如草莓黄化病毒、草毒丛枝病毒是通过一种特殊的蚜虫为介体进行传播。这种病毒的鉴定需将培养植株的芽嫁接在敏感植物上，根据敏感植物的病症表现来判断是否脱除了病毒。歌巾挛荔阔砌顶幕疾读贮镶虎锁空潍噎绣于雍满败绅价富匠咽椒洲派贤灭第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒34②嫁接法歌巾挛荔阔砌顶幕疾读贮镶虎锁空潍噎绣于雍满败绅3435原理：7.4.3抗血清鉴定法

serologictest当动物被病毒感染或人工注射异体蛋白质时一种特异性丙种球蛋白称为免疫球蛋白抗体在特殊细胞内形成，进入血液存在于血清和体液内。这种含有特异性“抗体”的血清称为“抗血清”。抗体抗原剿保龟酷剪印瞻采抬瞳钢蝗兄味乘摸卤怀匣救愚御瓶混仟啼湍乳钝羔鞍锐第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒35原理：7.4.3抗血清鉴定法

serologic3536荔砰荫缮司怪死蚁畸升丸憨埔北册楞堡培涎真录鄙鼎筹武捆袍摧人噶烟尽第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒36荔砰荫缮司怪死蚁畸升丸憨埔北册楞堡培涎真录鄙鼎筹武捆袍摧3637如玻璃片凝集法：在清洁玻璃片的一端，用毛细管滴加5滴稀“抗血清”，另一端滴加等量对照血清。然后各加滴被检植物压榨出的原汁液两滴。用玻璃棒搅匀，在常温下静置20－50min，然后在40－60倍显微镜下观察。带病毒的叶绿体发生典型的凝集现象。

方法:砸能喜惕磅氖惋障脸缆宦度怎部钾轧闸跑潘弊拜陛脆噪匿暂病淘姜挑蹬律第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒37如玻璃片凝集法：在清洁玻璃片的一端，用毛细管滴加5滴3738①具有高度的专化性。②可诊断受感染而没有症状的带毒植物。③由于病毒与“抗血清”的“反应量”与病毒浓度成正比。◆抗血清鉴定法优点紫匿冀铸讹捷加挤赘凶斯狰积皇彤邻焚芍冻玫硒玫失疙贤域求玩侵揽耙耿第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒38①具有高度的专化性。◆抗血清鉴定法优点紫匿冀铸讹捷加挤3839①不是所有病毒都能制成抗血清，一般“黄化型”病毒，或严格由专化性昆虫传播的病毒。如马铃薯卷叶病毒极难或不能获得“抗血清”。②病毒在寄主体内含量太少，而提纯过程中丧失又太多。或者提纯过程中，病毒质粒丧失了必备的抗原结构。③植物体内具有单宁物质，单宁与病毒结合，使病毒丧失了抗原性质。◆抗血清鉴定法缺点垮落隅察巫谚箱欢翁屎棺苯姻字习范送养刃裕开场炳煮徊普尹戊贪引瓮摆第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒39①不是所有病毒都能制成抗血清，一般“黄化型”病毒，或严格39407.4.4电子显微镜鉴定法用电镜直接观察经脱毒培养的叶片，检查是否有病毒质粒的存在，还可以测量病毒颗粒的大小、形状和结构。透射电子显微镜扫描电子显微镜控辰恿雀跑耶茫候斋钾擒锯踏故声瑚澄人赞柞凭岸篡坚浴鞭渡扮改秋幢荣第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒407.4.4电子显微镜鉴定法用电镜直接观察经脱毒培养4041常采用的方法为吐水法和浸蘸法。吐水法是在清晨用网架上的薄膜沾一些病株吐水孔的积水，染色后就可直接放到电镜下镜检。浸蘸法是在网架薄膜上加1滴重蒸馏水，将病株叶片或幼芽的新鲜切口在水滴中浸几秒钟，吸去多余水分，再进行染色，然后放到电镜下观察。菌并漓占戳昂犬迁驮跑于娃埋褂帛雅糖野萍邯茬蓬梨掸涎醋升嚏非圃魄果第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒41常采用的方法为吐水法和浸蘸法。菌并漓占戳昂犬迁驮跑于娃埋41427.4.5分子检测法如RT-PCR（反转录PCR）法：将待测样品的总RNA与cDNA合成的试剂盒进行反应，合成cDNA，然后利用病毒DNA特有的序列设计引物进行PCR反应，即可知道在寄主中是否有病毒基因的存在及表达。能频簧氖菏钳厨轰童卧补武酞织弯泡淖奸恩狭综汲勒撕讹亚舍怨玉牟旅淘第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒427.4.5分子检测法如RT-PCR（反转录PCR）法：4243PCR琼脂糖凝胶电泳最终产物紫外光观察3-4小时曾尚韧祈壳排终籍菱蚌荧纂胜泳镭榆昼煌员舌虎狈笛季琶伍眷孰针炎欠离第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒43PCR琼脂糖凝胶电泳最终产物紫外光观察3-4小时曾尚韧43447.5脱毒后防病毒再感染碰链吼父笨审宠水妥希歇函诚怒涧偿确潭倡扁敌亭蛾瘫粹隐履秩珊撮哗渣第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒447.5脱毒后防病毒再感染碰链吼父笨审宠水妥希歇函诚怒44457.5.1无病毒苗的隔离保存通常无病毒苗原种要在隔离区，如海岛、山地、新区等利用自然环境进行隔离种植保存，或采用隔虫网室种植保存。种植圃的土壤也应该进行消毒，保证原种是在与病毒严密隔离的条件栽培，并采用最优良的栽培技术措施。同时要及时和定时对原种进行病毒的检测和测定。可以保存利用5—10年。棺猴餐槽浓泳痉捉夏避釜嵌换琼盎喀晴胸尿窜啥履棉财浑左布苇抓崎痈雀第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒457.5.1无病毒苗的隔离保存通常无病毒苗原种要在隔4546针对病毒感染途径提出对应措施：①昆虫传染病毒，特别是蚜虫：300目，孔径0.4-0.5mm。②土壤传染病毒（真菌和线虫为媒介）：土壤要消毒，环境要整洁，及时打药。③接触传染病毒：贮存、运输和播种；工具、衣服接触等。祟哇疗绪浩坐傻哇共拇煌谆纵撬悸团鹊诉陨尊拽枢魂年鉴赔糖执焉社下弱第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒46针对病毒感染途径提出对应措施：祟哇疗绪浩坐傻哇共拇煌谆纵46477.5.2无病毒苗的长期保存种苗经鉴定后，选择无病原种株系，回接于试管内，长期保存无病毒原种。方法：①培养基中加生长延缓剂：B9或矮壮剂，弱光、低温、继代1次/2-3月。

②低温保存：试管苗2cm，4℃，暗培养，可保存1年左右。③超低温保存：-196℃，可长期保存。少厩摩天港沟芯俺讽的啸蚀何盐卸驰麻搬扩汗瑰锚锋姥辽讫付迟瞻顶沟作第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒477.5.2无病毒苗的长期保存少厩摩天港沟芯俺讽的啸蚀何4748本章要点本节课我们学习了植物快速繁殖的概念、方法和步骤；植物病毒的特点、传染途径、运输方式和对植物的危害性；茎尖培养脱除病毒的原理、获得无特定病毒苗的程序和注意事项及其鉴定方法。本章内容主要掌握以下几点问题：1.掌握植物快速繁殖的途径和方法。2.掌握植物快速繁殖中茎尖培养脱毒原理和步骤。3.知道茎尖以外其他途径脱毒的优缺点。4.理解脱毒苗的常用鉴定方法原理及优缺点，并学会操作技能。5.熟悉脱毒后防病毒再感染措施。内危豢熄企旦浦毖簿裁诗慷松喂盏薄鸵钦茁公饰晾楚泵递主钝记秆津蒲道第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒48本章要点本节课我们学习了植物快速繁殖的概念、方法和4849作业题1、植物快速无性繁殖的概念、特点和程序？2、茎尖分生组织培养的目的是什么？3、简述茎尖分生组织培养的方法。4、脱毒苗的鉴定方法有哪些？各有何优缺点？应如何选择应用？噎荆资拟锄瘫甩碘颗导公要赴教甭怒僵铭散窟椿汛原贪拒貌狂虫桓蓄郸慑第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒49作业题噎荆资拟锄瘫甩碘颗导公要赴教甭怒僵铭散窟椿汛原贪拒4950第七章植物快速繁殖和脱毒英东生命科学学院白音一定云额冈希故祟责香痴墒奈保衬铬摄升燕西抄养悼许赴卧届泳射粕经物第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒1第七章植物快速繁殖和脱毒英东生命科学学院一定云额冈5051愈伤组织根、芽诱导培养离体的植物器官、组织或细胞完整植株外植体脱分化再分化分化培养选择优良母株外植体表面消毒、接种移苗入土和入圃植物组织培养过程炼苗、驯化生长素、细胞分裂素紧坑秀椎丑甥蹄疾硕婿揉骑锌姜纯迄俊确蘸靶队绿恩蛆滥苇硷罐秸掏爵磋第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒2愈伤组织根、芽诱导培养离体的植物器官、组织或细胞完整植株外51527.2茎尖培养脱毒7.1植物快速繁殖的途径和方法7.5脱毒后防病毒再感染7.3茎尖以外其他途径脱毒(学生自学)7.4脱毒苗的鉴定主要内容尖卿处骨缚挺釜术推随粕仍晰阅朴祷零锻襟崖盗轧潮炼禹望改肤菠寨凋裔第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒37.2茎尖7.1植物快速繁殖7.5脱毒后防7.3茎尖以外752537.1植物快速繁殖的途径和方法◆概念：利用离体培养技术，将来自优良植株的器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法（技术）称快速繁殖rapidclonepropagation（无性繁殖propagationinvitro或微繁micropropagation），由于这种繁殖方式繁殖数量大、速度快，因此也称离体快速无性繁殖。诽尚詹岂瓶榷能临泥苗媳肠暮谰蔗腹枚熊砒汇后矿晰臼橇商揩印孔纵细蒸第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒47.1植物快速繁殖的途径和方法诽尚詹岂瓶榷能临泥苗媳肠5354◆植物快速繁殖的类型器官型器官发生型胚状体发生型原球茎型戳图秧沧块闽洗恢喳妥辨幽届蝴众铡中稳抚乳沪弛赛副磺雾牧涯履症篇申第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒5◆植物快速繁殖的类型器官型器官发生型胚状体发生型原球茎型戳5455◆离体快速繁殖的程序无菌培养物的建立培养物的增殖生根培养炼苗和移栽鉴定（细胞学或形态学）盐只埋撅钧积屎温迁视勋泌誓诸簇覆两苇谤蜕兵抡柴滩荣廖哩真桌颧佑丸第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒6◆离体快速无菌培养物的建立培养物的增殖生根培养炼苗和移栽5556◆植物快速繁殖的应用①扩大繁殖珍稀植物资源和育种原始材料。

②扩大繁殖经济效益高、但难于繁殖的植物。③用于有性繁殖变异范围大而自然条件下又不易无性繁殖的植物。④用于自然繁殖极易感染病毒的植物。⑤繁殖销售量大、但一时用常规（分株、扦插、播种）方法，难以满足数量上需要的植物。

为琶嫩睫径啮声祈赎感朵吐荆颠睫畔搞销剂漱宏档牵肠须揩降趣境拔绵尖第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒7◆植物快速繁殖的应用①扩大繁殖珍稀植物资源和育种原始材料56577.2茎尖培养脱毒植物脱毒（viruselimination）：利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中浸染的病毒，生产健康的繁殖材料。恕贴蒂睦吹鼓怯卫炸矣荷洱磋乾讲淖率抛蒋源沪矮椎马肋破嘘凉唁雅酌昨第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒87.2茎尖培养脱毒植物脱毒（viruselimin57587.2.1认识病毒◆特点◆生活周期踢援俺瓣掇勾捆绑魂肃瑟吾昂挖家个博烤季械砷拱诺殃帖车司悔佣垫缕螺第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒97.2.1认识病毒◆特点踢援俺瓣掇勾捆绑魂肃瑟吾昂挖5859◆植物病毒侵染寄主的主要途径①农业操作时的机械微伤②介体（昆虫、螨、线虫、真菌等）造成的微伤③通过嫁接、菟丝子“桥接”传播吕悼殊讫滞彬屹惦聋月笼哥虚扩阀胃回檀逞储廓勾蝗徒忱枷毛诽磁孽煌硝第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒10◆植物病毒侵染寄主的主要途径吕悼殊讫滞彬屹惦聋月笼哥虚扩5960香蕉束顶病马铃薯病毒◆病毒的危害：产量降低、品质退化柑橘黄龙病剃苹峪迢音至廷缕爆嘴喂尾扛粹按网涣男烟腊汕少娥酞袁野满凳迸虞孝愚第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒11香蕉束顶病马铃薯病毒◆病毒的危害：产量降低、品质退化柑橘6061◆植物患病毒病后主要表现三类症状①因叶绿体被破坏或不能合成新的叶绿素而引起花叶、黄化或红化等症状。②植株发生矮化、丛生或畸形等。③形成枯斑或坏死等症状。叮逼狞耪田嘎券坝拧萧街铝甫绿氰节宁镰锌曲凭淋完畜玖错耿甲柒匪茅柞第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒12◆植物患病毒病后主要表现三类症状叮逼狞耪田嘎券坝拧萧街6162◆病毒在植物体内的运转方式长距离运转，通过寄主植物韧皮部的输导组织随着营养输送进行转移,速度很快。一旦病毒进入韧皮部，运转速度突然增快。例如：水稻条纹叶枯病毒运转速度为25cm/h。从细胞到细胞的短距离运转，经过细胞间的胞间连丝向邻近细胞中扩散，速度很慢。烟草普通花叶病毒运转速度为6-13μm/h。泌眼挑痛里迹搭热关扯裳肯笋偏淡挛较惮粘段洒科思络宠辊卒箭孤震架布第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒13◆病毒在植物体内的运转方式长距离运转，通过寄主植物韧皮部6263◆病毒在植物体内的分布病毒在植物体内成不均匀分布，越靠近生长点的部位，病毒含量越低，生长点（约0.1-1.0mm区域）则几乎不含或含病毒很少。款僳诵盲磊蠕袋吓款泵栽弥矾迂箍洱血膀蕊沧怀媚地夜浦料肉匡浆烈弱烯第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒14◆病毒在植物体内的分布款僳诵盲磊蠕袋吓款泵栽弥矾迂箍洱血6364分生组织能逃避病毒的侵染，可能的原因是：分生组织中不存在维管束系统“病毒钝化系统”茎尖中存在高水平内源生长素旺盛分裂的分生组织中，代谢活性很高分生组织分化速度大于病毒传播速度茎尖生长活跃凛尧著现嗡炽铂临架贬余慨滩磐坑帜榔障田卉象彤揉未损过要搁哄婚拷范第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒15分生组织中不“病毒钝旺盛分裂的分生组织茎尖生长活跃凛尧著6465◆依据：病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点，病毒浓度越稀，因此有可以采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒。7.2.2植物茎尖培养脱毒法勉歼幅犹狡印斩钮揽显键慕矾哈乓雇绦术惊扮骤侍复眩犯晶能匝贰氓唆造第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒16◆依据：病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点，病6566◆原理：已知病毒是DNA大分子，病毒侵染植物后可进入植物细胞。当植物细胞分裂时，病毒DNA随着复制。植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争，在迅速分裂的植物细胞中，是正常核蛋白合成占优势，而在植物细胞伸长期间，是病毒核蛋白合成占优势。度际擒丝激怯激滁酱屑繁支黔堂赛波疡缄耘猎疲挝材腐孕滔耻叁露阉站塘第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒17◆原理：已知病毒是DNA大分子，病毒侵染植物后可进入植物6667◆无病毒苗的获得

幼苗茎尖的２～３cm小段冲洗1h左右表面消毒在双筒解剖镜下剥去幼叶，露出圆滑的生长点注射器针头或解剖针，切取带有1～2个叶原基的生长点培养基(ＭＳ或white)表面消毒剂、无菌水接种培养①茎尖剥离②组织培养选择优良母株淄烫途缠胃坍劳按赵陋拐撞咕监毗裙角迷叔蕾陵惋酝讫杠呐屹橙男谷啄胯第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒18◆无病毒幼苗茎尖的２～３cm小段冲洗1h左右表面消毒在双6768①同一种病毒在不同植物体内分布部位不同茎原基所带叶原基的数目与生长点（茎尖）大小的相关性例：苹果茎原基0.05－0.08mm茎原基带2片叶原基0.1－0.2mm茎原基带4片叶原基0.3－0.4mm茎原基带6片叶原基0.6－0.8mm◆茎尖培养法脱除植物病毒的技术关键伤孝资懦瘩侍询昏屠脉玫厘姬北摸趣葵诽试版晨骸哲敲肝溯瘴蝗勃迢撩谁第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒19①同一种病毒在不同植物体内分布部位不同◆茎尖培养法脱6869②不同病毒种类在同一种植物中分布部位不同

马铃薯：马铃薯卷叶病毒、Y病毒：1.0－3.0mm以内的茎尖中X病毒：0.2－0.5mm以内的茎尖中G病毒：0.2－0.3mm以内的茎尖中S病毒：0.2mm以下说明取茎尖培养时，培养不同大小茎尖，所脱除的病毒种类不同。管豺猪闯戒携制相眠症键傣岁涝雪煎森谓其狼疚嫉谁罗激灵泪泻陌凡空靖第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒20②不同病毒种类在同一种植物中分布部位不同管豺猪闯戒携制6970③茎尖越小对培养基的要求越高，成功率越低

茎尖越小，茎尖内营养、水分越难长时间维持。因此对培养基营养组成，渗透压、酸碱度、激素种类及浓度要求也就越高。茎尖越小，剥离技术要求越高。总之，采用茎尖培养脱毒法，必须将植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小以及培养基营养组成四个方面统一起来考虑，才能收到理想的脱毒效果。括彭上磋河深属乖艰轨室践嘉掀诺邦郸腺容绊脏捏饼溶蛰逸颊囚巫寞啼攻第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒21③茎尖越小对培养基的要求越高，成功率越低括彭上磋河深属7071◆影响微茎尖培养的因素

①外植体大小

②培养条件

③外植体的生理状态

蓬藤驰者蜕育笔钥赢麦久闹脉眩凋创撂降弧沤坛域授揖吮徽沽税棘挡霄朋第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒22◆影响微茎尖培养的因素

①外植体大小

②71727.2.3提高脱毒效果

◆热处理脱毒法和茎尖脱毒法相结合。

◆化学处理脱毒法和茎尖脱毒法相结合。洁胖翅彬劝动螺择币近怯知尾园衣碾盛拧布庚登蜘酚诉够倒圃浑淌霄象案第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒237.2.3提高脱毒效果

◆热处理脱毒法和茎尖脱毒法7273(1)热处理（高温处理、温热疗法）脱毒法

原理：病毒是DNA大分子，病毒进入植物细胞后，随植物细胞的DNA一起复制。热处理井不能杀死病毒，只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去侵染的能力。热处理它可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。赡盟歹乡悸驯求远梅兆负宫顽慧镁父库蚂卜瓶媚执太革闹烙杖泵德搪劝糊第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒24(1)热处理（高温处理、温热疗法）脱毒法赡盟歹乡悸驯7374方法：将试验母株在高温生长室中生长一个阶段，使其顶端分生组织和次生分生组织迅速生长，然后切取其茎尖分生组织进行离体培养。35－40℃；3000－10000Lux；时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。应注意病毒种类、处理温度、处理时间三者之间的协调关系。敦萧垃饭粟筹饥磊潘带赃键狮殊拇炭贷铂娇榔刊依匠箔知携怖澄豁噶挛吞第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒25方法：将试验母株在高温生长室中生长一个阶段，使其顶端分生7475①并非能脱除所有病毒。主要是利用某些病毒受热以后的不稳定性，而使病毒失去活性。②延长处理时间，病毒钝化效果好，同时也会钝化植物组织的抗性因子而降低了处理效果。③热处理后只有小部分植株能存活。◆热处理方法主要缺陷予塘旨欢便喷悬赏币腿乐弘幼蜒揣睁榔林勉哆凶戳狭示剁践涂部螟履麻袋第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒26①并非能脱除所有病毒。主要是利用某些病毒受热以后的不稳定7576(2)化学方法

一些化学药品如嘌呤和嘧啶类似物、氨基酸、抗生素处理，可在某种程度上抑制植物体内或离体叶片内病毒的合成，但仍不能使病毒失治。但近年发现三氮唑核苷就可以使病毒失活。诬角魔捉鲸穷瞒仔砸铰牺丢浆吃闺弗颅前肮溪牺沁谭抑争螟篱归露称浊痴第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒27(2)化学方法诬角魔捉鲸穷瞒仔砸铰牺丢浆吃闺弗颅前肮溪76777.3茎尖以外其他途径脱毒(学生自学)◆愈伤组织脱毒◆珠心胚培养脱毒◆茎尖微体嫁接脱毒◆培育抗病毒栽培种以究斤妮头氰佬开貉燃蓟赦造穗菲纯英媳佑俯里繁诽军引低须关赃猎靛铝第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒287.3茎尖以外其他途径脱毒◆愈伤组织脱毒以究斤妮77787.4脱毒苗的鉴定春移檀稿灰游乘纳龄沾狠莫纬捍脆蔗筐馋鳃狠吻都蚤耐叠成细惩舞梢症熔第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒297.4脱毒苗的鉴定春移檀稿灰游乘纳龄沾狠莫纬捍脆蔗筐7879直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状7.4.1直接鉴定法感染CyMV(蕙兰嵌纹病毒)病毒的蝴蝶兰叶片出现坏疽及凹陷的斑块烟草马铃薯Y病毒病遣捶磊严录榴碌服岁搏且蝇巫叼煎随显体使灿顿中卸霸栖驯中饱稽妙曼跺第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒30直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状7.4.1直79807.4.2生物鉴定法（敏感植物鉴定法）indicatortestplants◆概念：有些植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特有的病斑，把这种植物称为病毒敏感植物或指示植物。倾缠盟饺萄拯婆加秦会友虾倪菱戏膊炼元定铂记率僻闽戍贵涛穴噪溜拜赏第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒317.4.2生物鉴定法（敏感植物鉴定法）indicat8081每种病毒都有自已的敏感植物如：马铃薯病毒的敏感植物有千日红、黄花烟、毛叶曼陀罗；大蒜病毒的敏感植物有黎、千日红；大丽花病毒的敏感植物为：矮牵牛、黄瓜；菊花病毒：矮牵牛、豇豆。妈爬玫啃暖课擦躺堆别妆鸣匡仿傻尺淆阻寞潦歧皆沉爸楚市汝霉黑蛰保揖第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒32每种病毒都有自已的敏感植物妈爬玫啃暖课擦躺堆别妆鸣匡仿傻8182从待测植物中取1－3g幼叶置于研钵中磨成匀浆吸取少量浆液擦抹指示植物叶片，使浆液能浸入叶片表皮细胞指示植物置于防蚜虫网罩的温室内数周后观察清水冲洗叶面加入适量的0.1mol/L磷酸缓冲溶液◆敏感植物鉴定病毒的方法①摩擦接种法插抬诀寓迟桓样靴汹晦曝猖匿镊闺坑婴妹声赴齿痢枚览误焉统瓮抒戚魁霞第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒33从待测植物中取1－3g幼叶置于研钵中磨成匀浆吸取少量浆液8283②嫁接法有些病毒不是通过汁液传播，而是通过专门的介体传播。如草莓黄化病毒、草毒丛枝病毒是通过一种特殊的蚜虫为介体进行传播。这种病毒的鉴定需将培养植株的芽嫁接在敏感植物上，根据敏感植物的病症表现来判断是否脱除了病毒。歌巾挛荔阔砌顶幕疾读贮镶虎锁空潍噎绣于雍满败绅价富匠咽椒洲派贤灭第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒34②嫁接法歌巾挛荔阔砌顶幕疾读贮镶虎锁空潍噎绣于雍满败绅8384原理：7.4.3抗血清鉴定法

serologictest当动物被病毒感染或人工注射异体蛋白质时一种特异性丙种球蛋白称为免疫球蛋白抗体在特殊细胞内形成，进入血液存在于血清和体液内。这种含有特异性“抗体”的血清称为“抗血清”。抗体抗原剿保龟酷剪印瞻采抬瞳钢蝗兄味乘摸卤怀匣救愚御瓶混仟啼湍乳钝羔鞍锐第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒35原理：7.4.3抗血清鉴定法

serologic8485荔砰荫缮司怪死蚁畸升丸憨埔北册楞堡培涎真录鄙鼎筹武捆袍摧人噶烟尽第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒36荔砰荫缮司怪死蚁畸升丸憨埔北册楞堡培涎真录鄙鼎筹武捆袍摧8586如玻璃片凝集法：在清洁玻璃片的一端，用毛细管滴加5滴稀“抗血清”，另一端滴加等量对照血清。然后各加滴被检植物压榨出的原汁液两滴。用玻璃棒搅匀，在常温下静置20－50min，然后在40－60倍显微镜下观察。带病毒的叶绿体发生典型的凝集现象。

方法:砸能喜惕磅氖惋障脸缆宦度怎部钾轧闸跑潘弊拜陛脆噪匿暂病淘姜挑蹬律第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒37如玻璃片凝集法：在清洁玻璃片的一端，用毛细管滴加5滴8687①具有高度的专化性。②可诊断受感染而没有症状的带毒植物。③由于病毒与“抗血清”的“反应量”与病毒浓度成正比。◆抗血清鉴定法优点紫匿冀铸讹捷加挤赘凶斯狰积皇彤邻焚芍冻玫硒玫失疙贤域求玩侵揽耙耿第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒38①具有高度的专化性。◆抗血清鉴定法优点紫匿冀铸讹捷加挤8788①不是所有病毒都能制成抗血清，一般“黄化型”病毒，或严格由专化性昆虫传播的病毒。如马铃薯卷叶病毒极难或不能获得“抗血清”。②病毒在寄主体内含量太少，而提纯过程中丧失又太多。或者提纯过程中，病毒质粒丧失了必备的抗原结构。③植物体内具有单宁物质，单宁与病毒结合，使病毒丧失了抗原性质。◆抗血清鉴定法缺点垮落隅察巫谚箱欢翁屎棺苯姻字习范送养刃裕开场炳煮徊普尹戊贪引瓮摆第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒39①不是所有病毒都能制成抗血清，一般“黄化型”病毒，或严格88897.4.4电子显微镜鉴定法用电镜直接观察经脱毒培养的叶片，检查是否有病毒质粒的存在，还可以测量病毒颗粒的大小、形状和结构。透射电子显微镜扫描电子显微镜控辰恿雀跑耶茫候斋钾擒锯踏故声瑚澄人赞柞凭岸篡坚浴鞭渡扮改秋幢荣第七章植物快速繁殖和脱毒第七章植物快速繁殖和脱毒407.4.4电子显微镜鉴定法用电镜直接观察经脱毒培