风湿性疾病的自身抗体

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北京协和医院唐福林ﻫ自身抗体是指自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白,见于多种风湿性疾病，尤其在弥漫性结缔组织病中更为常见。目前用于临床的常见自身抗体有抗核抗体、抗中性粒细胞胞浆抗体、抗磷脂抗体、类风湿因子、抗线粒体抗体等。ﻫ自身抗体有多种检测方法,包括间接免疫荧光法(IＦ）、酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫法（ＲIA)、被动血凝法(PＨA)、颗粒凝集法（PＡ)、对流免疫电泳法（CIE)、免疫双扩散法（ＩD）等，针对可溶性成分(如ENＡ、ＤＮA、凝血因子、补体）可采用ID、CＩＥ、ELISA、ＲIA法测定；针对不溶性成分可采用间接免疫荧光法。

不同检测技术的敏感性和特异性存在差别。目前各单位已采用的多种自身抗体检测方法尚未标准化，因此某一实验室结果难与另一个实验室所测结果进行比较从而造成了误判、误导。判断某一诊断试验应从四个特性（敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值）来评价其效用。对于自身抗体的检测常常因为其存在精细复杂的免疫化学反应而出现交叉反应.必须指出，少部分正常人有低滴度的自身抗体,故不能仅凭某一种自身抗体的存在而诊断为某一特定的疾病。如同分析任何检测结果一样,自身抗体的阳性或阴性不是诊断的唯一条件，必须分析检测方法的可靠性,必要时多次重复检测或多家实验室检测,只有密切结合临床对检验结果进行分析才能得出正确的诊断。ﻫ抗核抗体(AuｔoantｉｂodytoNuclearAnｔigeｎ,ANA）ﻫ一．定义：传统认为抗细胞核内成分的抗体称为AＮA，这一概念强调了细胞核的重要性，因为细胞核内有ＤＮA、RNA、碱性组蛋白、非组蛋白、磷脂及各种蛋白酶等复杂的化学组成,决定了ANA存在不同的成分，因此，构成了抗核抗体谱（AＮAs).随着免疫荧光技术的改进，先进的免疫学技术的应用和分子生物学的发展，目前对ＡNA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸（nｕcleicaｃid)和核蛋白(nｕcleoｐroteiｎ）抗体的总称。故现在对ＡNA靶抗原的理解已从传统的细胞核扩大到整个细胞。AＮＡ在许多风湿性疾病,如系统性红斑狼疮、硬皮病、干燥综合征、类风湿关节炎等均可阳性,因此是诊断弥漫性结缔组织病的筛选抗体.健康老年人、感染性疾病和服用某些药物（普鲁卡因酰胺、肼苯哒嗪、苯妥英钠、异烟肼等）的患者均可有ANA阳性。

1９54年Hａｒgｒave发现LＥ细胞奠定了当今ANＡs的基础。已知LE因子即是ANA，它是一种抗ＤNA-组蛋白（ＤNP）复合物的抗体，目前已采用简易和迅速的抗DNＰ抗体测定取代ＬE细胞的检查。

二．测定原理和方法：常规检测ANA的方法是以鼠肝和鼠肾为底物的间接免疫荧光法。由于某些抗原如SSA/ＲＯ、Jo-1、rRＮP等在细胞浆内比核内含量多，因此，鼠肝或鼠肾作底物检测常呈阴性反应，为弥补这一不足，国外以核质丰富的Hep—2细胞（人喉癌上皮细胞)为底物提高了ANＡ检测的阳性率。对于ANA阳性的标本,应排除实验过程中血清洗脱不尽或标有荧光素的抗人免疫球蛋白浓度过高而造成的假阳性。必须强调指出，待测血清标本一定要稀释,因为低滴度的ＡＮA可在感染性疾病、肿瘤及正常人中出现.未加稀释的正常人血清可有1/3的呈阳性ＡNA反应.AＮA作为自身免疫性结缔组织病的筛选试验必须强调高滴度。对于ANA阴性的标本,要考虑是否有底物保存不当或操作过程中造成的误差，抑或药物治疗后病情缓解所致。ＡＮAＳ的荧光染色型别有五种.（１）均质型：核质染色均匀一致,此型与抗组蛋白抗体和抗ＤＮA抗体有关；（2)斑点型：核质染色呈斑点状，核膜存在，此型多与可溶性核抗原（ENA）抗体有关;（３）核仁型：仅核仁着染荧光,与４-6SRＮA抗体相关,在硬皮病中较多见；（4）核周(核膜）型:荧光包绕在核膜周围,多与抗双链DNA抗体有关；(５）着丝点型:处于分裂时相的Ｈｅp—2细胞为底物可出现依着丝点散在排列的特殊点状圆形，与斑点型区别的重要之处在于前者核膜已消失，主要与雷诺现象有相关性.荧光染色核型可随血清稀释的改变而发生改变，如均质型的AＮA在血清稀释后可出现斑点型和核周型.对于ＡNA阳性的标本,应采用对流电泳法、免疫双扩散法、酶联免疫吸附法(ELISA）或放射免疫法、免疫印迹法等识别出确切类型，因不同种类的AＮA有其不同的临床意义。

三。AＮAS的分类：ﻫ根据细胞内各分子的理化特性和分布部位,将ＡＮＡｓ分为四大类，简述如下：

(一）抗DNA抗体ﻫ又可分为单链（变性）和双链（天然）DNA抗体.抗单链DNA（SＳDＮA）抗体在多种疾病中及正常人血清中存在,因此无特异性,临床上价值不大.抗双链DNＡ（dｓＤNA）抗体对诊断系统性红斑狼疮（SLＥ）有较高的特异性,尤其在活动期SLＥ病人血清中有滴度较高的抗ｄsDNA抗体,随着疾病活动的控制,抗dsDNA抗体滴度可以下降或消失。低滴度的抗ｄsDNＡ抗体也可在多种疾病甚至正常人中出现。放射免疫法（Farｒ）、以短膜虫或马疫锥虫为底物的间接免疫荧光法（IF—CT或IF—TＥ）、血凝法（HＡ)和酶联免疫吸附法（ELISA）均可用以抗dsDNA的检测，但不论那种方法均应测出滴度.Farr法敏感，但不如IF－ＣＴ或IF-TＥ法特异，抗ｄｓDNA抗体用Fａrr法检测，其结合率≥20%或用IF-CＴ法≥1：５方可判为阳性。抗ｄsDNA抗体除帮助诊断SLＥ外，尚可判断SLＥ的活动性及作为治疗的估价，已证明抗dsDNＡ抗体与ＤNA结合成为免疫复合物在肾小球基底膜沉积，或抗dｓＤNA抗体直接作用于肾小球抗原而造成ＳLＥ病人的肾损害。ﻫ（二）抗组蛋白抗体ﻫ组蛋白是染色质的基本结构核小体的重要组成部分。H1在DNＡ双螺旋之外，DNＡ双螺旋包绕于由H3、Ｈ2A、H2B、H4组成的核心。抗组蛋白抗体采用ＥＬIＳA检测，可以在多种自身免疫性结缔组织病中出现。药物引起的狼疮其抗组蛋白抗体达95％.我们用ELISA对１０9例SＬE、1１7例类风湿关节炎（RA)、46例干燥综合征(SS）、22例硬皮病（SD）、２５例其他结缔组织病、2９例非结缔组织病及长期服用他巴唑２２例、苯妥英钠55例和异烟肼198例病人,进行了血清抗组蛋白抗体测定，其阳性率分别为５０％、23％、33％、２7％、36％、10%、0％、18%和53％.抗组蛋白抗体的滴度在SLＥ病人和服用异烟肼的病人中最高.进一步分析后发现，在SLＥ病人中主要以抗H2B、抗H２A—2B和抗H1为主且主要是IgG型抗体。而在服用异烟肼的病人中，抗组蛋白H１、H2A、H２B、H3和H4的滴度基本一致,且不以IｇG型抗体为主。在服用异烟肼具有抗组蛋白阳性的病人,临床上并没有出现狼疮的临床症状。不同药物所致的抗组蛋白的亚单位抗体不同，如服用肼苯哒嗪的抗组蛋白抗体主要是抗H３和抗H4抗体，而由普鲁卡因酰胺所致的抗组蛋白抗体主要为抗H２A-2Ｂ复合物抗体。ﻫ（三）抗非组蛋白抗体

１．抗ＥNA（EｘtractａbleNuｃlearAntｉｇｅn）抗体。此组抗原不含组蛋白,可以溶于盐水而被提取。此类抗体与疾病的严重程度或其活动性无明显相关。ﻫ（1）抗nRNP（nuclｅaｒＲNP):以抗核内的核糖核蛋白而得名。临床上应用较多的是u1RＮＰ抗体。通常又把ｎＲNＰ称之为ｕ1RNP。ｕ1ＲNP由u1RＮA和9种不同的蛋白质组成.具有抗原性蛋白的分子量有70ＫD、3０ＫD（A）和22ＫD(C).6０％抗u1RＮP可与B、B，多肽出现微弱的反应.抗u1RＮP抗体在混合性结缔组织病中几乎均为阳性，且其滴度很高；在其他结缔组织病中阳性率低且滴度低；它是区分结缔组织病和非结缔组织病的有力指标。抗u1ＲＮP抗体阳性的病人，常有双手肿胀、雷诺现象、肌炎和指（趾)端硬化.有人认为抗u1RNP抗体阳性的SＬＥ病人，如抗dsＤNA抗体阴性，则肾病发生率较低；如若与抗ｄsDNA、抗Ｓm抗体同时存在，则发生狼疮性肾炎的可能性较大.

(２）抗Sｍ抗体：以病人名字（Smith）命名。已知Ｓm是核内小核糖体蛋白(SｕRNP），含有除u3RNＡ外的所有ｕ族RNＡ。其抗原决定簇主要在与u1、u2、u4－u6RNA连接的B和D蛋白多肽上，已知蛋白多肽的分子量B(29KＤ）、B，（28KD)、D(16KD）。抗Ｓm抗体的蛋白多肽较高特异性的为B和D带。国际上通常用对流电泳和免疫双扩散法检测抗Sm抗体,其阳性率在SＬE中为30％左右,抗Sm抗体对早期、不典型的SLE或经治疗缓解后SLE回顾性诊断有很大帮助。ﻫ必须强调指出,Sm和nRNP是同一分子复合物(RNA-蛋白颗粒）中的不同抗原位点，其中的RNＡ富含尿嘧啶核苷(u1、u2、u4-u6）,如前述，Sm含有u1、u2和u4-u６,而nRNＰ（ｕ1ＲNＰ)仅含u1RNA。从理论上讲，测得抗Sｍ抗体的同时,也应测得抗ｕ1RNＰ;而测得抗u1RNP则抗Ｓm抗体亦可为阴性。我院开展临床检测15年来，用电泳和双扩散法，尚未有抗Sm抗体阳性而抗u1RＮＰ抗体阴性，也即抗Sｍ抗体阳性均伴有抗u1RNＰ抗体，而抗u１ＲＮP抗体可以单独存在。

抗u2RNP抗体在系统性硬化症伴多发性肌炎的重叠综合征中阳性频率较高。银屑病及雷诺现象的病人也可呈阳性。ﻫ抗u3RNＰ抗体常与系统性硬化相关，且常伴有原发性肺动脉高压、骨骼肌和小肠受累。ﻫ（3）抗SSＡ/RO抗体：由于该抗体与干燥综合征(Sｊｏｇrensyndromeｓs）相关，故取名为SSA，也有人取名于最早检测到的病人名字Ro。SＳＡ与Ｒｏ的抗原性、生化特点一致。SＳＡ／Ｒo是含有Y－ＹRＮA的蛋白质，更多存在于胞浆内。在以鼠肝为底物的ＡNA检测中,抗ＳSA抗体常呈阴性反应,而以Hep－2细胞为底物，则ANA为阳性。

（4）抗SSB/La、Ｈa抗体:另外还有一种与干燥综合征相关的抗体称SSB，也有人将SSB抗体以病人名字La或Ｈa命名。SＳB/La、Ha是RNＡ多聚酶转录中的小RNA磷酸蛋白质。ﻫ临床上常规采用对流电泳和免疫双扩散法检测抗SSＡ和抗SＳB抗体。近年来发展的免疫印迹检测中的抗SSＡ与分子量为60KD和52KD的两条蛋白多肽发生反应.有人认为6０KD的多肽在SLE中较SS更为多见。抗ＳＳB与分子量为48KD、47ＫＤ、45KD的三条蛋白多肽反应,但48KD更具有特异性。如上所述抗SSＡ/Ro和抗SSB/La、Hａ与SS有关。在原发性SS病人中，抗SSA/Ro和抗SSB/Lａ、Ha阳性率分别为60％和40%，但在其他结缔组织病人中，这两种抗体亦可存在。以Wｉl－2细胞提取抗原，在原发SS、SLE、RＡ、SD、ＰM/ＤM和非结缔组织病中，抗SSA／Ｒｏ阳性率分别为75%、39%、２0％、19%、2５％和0％；而抗SＳB/La、Ha阳性率分别为59%、10％、5％、2%、5%和0%。抗SSB抗体较抗SSA抗体诊断干燥综合征更为特异.在临床上所谓ＡＮA阴性的SLE病人,大部分有抗SSA抗体。进一步的研究还表明,抗ＳＳA和抗SSＢ抗体阳性可造成新生儿狼疮及婴儿心脏传导阻滞等先天性心脏病。抗SSＡ和抗SSB抗体常与血管炎、淋巴结肿大、白细胞减少、光过敏、皮损、紫癜等临床症状相关.ﻫ（5)抗rRＮP抗体：rＲNP（rｉboｓoｍeＲＮP）与nRＮP抗原性不同,它是主要在胞浆中的一种磷酸蛋白.免疫印迹法测得抗rＲNP抗体主要有３8KＤ、16KＤ、15KＤ三条蛋白多肽.国外报道近一半的ＳLＥ病人有抗ｒＲNP抗体。我们检测发现,抗rＲＮＰ抗体在SLE、ＲA、PＭ／DM、SS、MCTＤ和SD中的阳性率分别为２４%、1.7%、9％、4%、0％、和0%.我们以免疫双扩散法测得的24例抗rＲNP阳性的SLE病人中37．5%（９/2４)伴有中枢神经症状，而在抗rRＮＰ阴性SLE病人中，仅12。５%（2/1６)伴又中枢神经症状，两者相比有显著性差异.我们还发现,抗rRＮP抗体不会随病情的缓解立即消失,可持续１——2年后才转阴.对于仅有ｒRNＰ抗体阳性，ANA阴性的病人,应密切随访，若干年后可能发展为典型的SＬＥ.

(6）抗PCＮA（PｒoliferatingCeｌlNucleａrAｎtigeｎ)抗体：抗增殖细胞的核抗原抗体。PCＮA是分子量为35KＤ的ＤNＡ聚合酶δ副蛋白。用免疫双扩散法测得在SLE病人中阳性率为3-5%,其他结缔组织病人中常为阴性。

(７)抗Kｕ抗体:以日本病人的名字命名。Ku是与DNA直接结合的70KＤ和80KD的蛋白二聚体。免疫双扩散检测PM/SＤ重叠综合征的病人其阳性率为3%。EＬISＡ测得该抗体在ＳLE中为３9％,MCTD中为55％，40%的SD病人有低滴度的抗Ku抗体。

（8)抗Scｌ-７０抗体：因该抗体主要在ＳＤ(Ｓclerodermａ）中出现,且其抗原分子量为７０KD而得名。但Scl—７0实为分子量为100KD的DNA拓扑异构酶1（TopolｓomｅrａseⅠ）的降解产物。ＳD中抗Scl-70阳性率40%左右，常把抗Ｓcl-70抗体视为ＳD的标记抗体。有人发现抗Scl-7０阳性ＳD病人,发生肺间质变的危险性较抗Sｃl—70阴性的SＤ病人增加10多倍。抗Scｌ-70抗体似与心、肾受累无关。ﻫ（9)抗Jo-1抗体：以病人名字John而得名。Jo—１抗原是分子量为5０KD的组氨酰tRＮA合成酶，以免疫双扩散法检测25％的PＭ/DＭ病人有此抗体.在合并肺间质变的PＭ／DM病人中，抗Ｊo—1抗体高达60%,临床上还发现以急性发热、对称性关节炎、“技工手”、雷诺现象、肌炎并肺间质变的病人，抗Jo-1抗体常呈阳性，有人称之为“抗Ｊo－1抗体综合征”。抗Jo—1抗体常被视为PＭ/ＤM的标记抗体。ﻫ（１0)抗PM－1（ＰM—Ｓｃl)抗体：按疾病多发性肌炎（PＭ)而命名。该抗体主要在ＰM和ＳD相叠的病人中，其抗原为分子量110ＫD-１20KD不等的多种蛋白，在PM/DM阳性率为10％-5０％不等。在PM/SD重叠且伴有肾炎的病人中,阳性率高达87％。

2.抗着丝点抗体：用Hep－2细胞作底物，在非分裂期细胞,核质内为数不多的散在斑点与染色体的着丝粒区一致；在有丝分裂期，在线状排列的浓缩染色体中板上，可见到与浓缩染色体相应排列的丝粒点，该抗原是染色体粒区的17ＫD、８0KD、和14KD蛋白,80％SD的亚型CREST（软组织钙化、雷诺现象、食道功能障碍、指端硬化、毛细血管扩张)综合征有此抗体.但我国材料表明，抗着丝点抗体并非CRESＴ综合征特有，在弥漫性硬皮病患者或一些仅有雷诺现象的病人亦呈阳性，且较长时期追随并不能诊为CRESＴ.另外在某些肝病（原发性胆汁性肝硬化等)、干燥综合征患者也可阳性。与国外资料不同，我们发现5％的弥漫性硬皮病患者同时具备抗Sｃｌ－7０和抗着丝点抗体.ﻫ(四)抗核仁抗体：主要是指核仁内的RNＡ多聚酶，原纤维和Tｏ/Ｔｈ抗原的抗体。抗核仁抗体主要与ＳD相关,用间接免疫荧光法可以发现核仁呈斑点、斑块或均质型染色。ＲＮA多聚酶是分子量为210KD-211ＫD不等的多种蛋白,在SＤ中阳性率为4％;原纤维是分子量为3４KD蛋白,为u3RNP的组成部分,在ＳD中阳性率为8％；To／Th是与７-2和8-2RNA形成复合物的40KD蛋白，该抗体在SD中小于3%。ﻫ类风湿关节炎相关抗体ﻫ一.类风湿因子（RhｅｕmatｏidFactｏr，RF）

RF是抗人或动物IgG分子的FC片段的抗体。作为一种抗体，其抗免疫球蛋白类型可分为IgG—RＦ、IgＭ—RF和IｇA-RF等。RF不仅与变性的IgＧ分子反应,也可同自身IgG或异体IgG分子反应，并且与其他抗原如核蛋白发生交叉反应。在类风湿关节炎患者的血清和滑液中可测出19sＩgM－ＲF、7sIgM-RF和7sIgＧ—RF，这三种ＲＦ可相互发生反应,后二者主要参与关节外症状的免疫复合物.

RF产生于外周淋巴结、关节滑膜、扁桃体淋巴滤泡和骨髓等。B淋巴细胞的激活，尤其CＤ5＋B淋巴细胞是产生IｇM－RＦ主要细胞。

测定ＲF的方法常有乳胶凝集法及绵羊红细胞凝集法（SCAＴ)，这两种方法的检测符合率在90％以上，ＳCAT法的敏感性不如乳胶凝集法，但特异性较高。乳胶凝集法和SCAＴ法均只能测出1９sIgM－RＦ.IｇＧ—ＲＦ、IgA—RF和７sIgM-RF则需用ELISA法测定.RＦ在类风湿关节炎中阳性率为80％左右,是诊断RA的重要血清学标准之一，但不是唯一的标准,因5%的正常老年人RＦ可阳性，随年龄的增高，阳性率可增高，年龄超过75岁的老年人,RF假阳性率为2-25％不等。且在许多其他疾病中出现,如自身免疫性疾病：干燥综合征、ＳLE、ＰSＳ、PＭ/ＤM等；感染性疾病：细菌性心内膜炎、结核、麻风、传染性肝炎、血吸虫病等;非感染性疾病：弥漫性肺间质纤维化、肝硬化、慢活肝、结节病、巨球蛋白血症等。

持续高滴度的ＲＦ，常提示RA的疾病活动,且骨侵蚀发生率高.有学者指出,健康成年人高滴度ＩgM-RF是发生ＲＡ的危险因子。ﻫ临床上RF常作为区分血清阴性脊柱关节病的标准。必须明确,部分RA患者测不出IgＭ—ＲＦ，应进一步检测IgＧ－ＲF和ＩgA-RF,这两种类型RF对IgG分子特异性强，而不易与其他非相关抗原反应.ＲF滴度越高，对ＲＡ的诊断特异性越高。对RF阴性，且临床上高度疑似RA的患者,还可进行免疫复合物中ＲF的测定,即可将循环免疫复合物经酸化高浓度氯化钠,或高度稀释分离后测ＲF,这称为隐性RF，尤其在幼年型类风湿关节炎(JＲＡ）患者中阳性率较高.

二．抗核周因子ﻫ抗核周因子（antipｅrinucｌｅarｆactor，APF）是1964年荷兰学者Niｅnlucｉs和Manｄema用夹粘膜细胞作为底物检测抗核抗体（ANＡ）时,偶然发现细胞核周围有均质型的4～7µm荧光颗粒，称之为抗核周因子（APF）。进一步研究发现ＡＰＦ主要出现在ＲA患者血清中，而少见于SLＥ等非RA的风湿性疾病患者及正常人.APF是一种RA特异性的免疫球蛋白,且以IｇG型为主.ＡＰF对RA诊断的特异性高达9０％以上。是早期诊断RA的有效指标之一.检测ＡＰF主要采用间接免疫荧光法（IＩF)。ﻫ三。抗角蛋白抗体ﻫ抗角蛋白抗体(antiｋeｒaｔｉnａntｉbody,AKA）是１979年Young等人发现ＲA血清中有一种与大鼠食管角质层成分起反应的抗体,且发现该抗体对RA诊断有较高特异性。AKＡ的检测方法目前主要采用间接免疫荧光法。研究发现,AKA对于诊断ＲA的特异性很高（９0%左右),初步证实ＡKA与RA关节压痛数、晨僵时间和CRP有关。AKA与RＦ、抗ＲA33/RＡ3６抗体、抗Ｓa抗体等无交叉反应及相关性，因此，该抗体的检测可以对ＲF阴性或抗RA33/RA３6抗体阴性、抗Sａ抗体阴性的患者提供另一个诊断指标.临床研究还表明,AKA与疾病严重程度和活动性相关，在RA早期甚至临床症状出现之前即可出现，因此，它是RA早期诊断和判断预后的指标之一。该抗体在患者滑液中阳性率与血清基本一致,但程度明显高于后者，提示ＡKA可能在滑液局部合成并对滑膜炎的形成起重要作用。

四．抗Sa抗体ﻫ抗Ｓa抗体是以患者Savｏic名字命名的一种新型自身抗体。Ｓａ抗原最早在人脾中发现,后又发现Ｓａ抗原存在于人的胎盘及类风湿滑膜翳中,推断Sａ抗原可能存在于正常人体组织中，是人体的正常组成成分.抗Sa抗体的产生机制尚不清楚.Despreｓ等人首先报道了该抗体对RA具有诊断特异性，在未经选择的ＲA患者中抗Sａ抗体的阳性率为42．7％，其特异性高达98.9％。抗Sa抗体阳性组患者晨僵、关节受累明显重于阴性组,且血沉增快，Ｘ线分期中Ⅱ、Ⅲ期比例亦明显高于阴性组,提示抗Sa抗体阳性者病程发展可能较阴性者快，症状较重,因此抗Sa抗体对疾病的分型可能有一定意义。研究发现，抗Sa抗体在关节滑液中存在，提示在滑膜可能发生原位免疫反应，抗Sa抗体在RA慢性损伤过程中起着潜在的作用.尤其对不典型的早期RＡ，抗Ｓa抗体可成为诊断RＡ的另一个指标。抗Ｓa抗体不与RＦ、抗核周因子(ＡＰF）、抗ENA抗体和抗RA３3抗体等发生交叉反应。RF阳性和阴性的ＲA患者抗Ｓa抗体均可阳性,在RＡ的头几个月就可测出抗Ｓa抗体,且抗体滴度随疾病活动度和治疗而波动,提示抗Sa抗体的测定对ＲA的早期诊断、病情监测及指导治疗有所帮助.ﻫ五。抗RA33抗体ﻫ198９年Hassfeld等首次报道抗RＡ３3抗体，因该抗体是诊断RA较为特异的抗体,且与分子量33KD的核酸蛋白发生反应，因此定名为抗RＡ33抗体.其靶抗原为３3KD的核酸结合蛋白，与ｈnRＮP中的A２蛋白一致，抗原来源于HｅLa细胞或Eｈriｌich细胞。检测方法为免疫印迹法（ＩＢＴ）。1９92年Ｈassfeld在检测抗RA３3抗体的同时，发现部分RA患者同时存在针对36KD核酸蛋白的抗体，且后者与抗原分子量同为36KD的抗增殖细胞核抗原抗体（抗ＰCNA抗体）无关。抗RA3３抗体与抗RＡ36抗体常同时出现,在免疫印迹检测时如同时在３3KD、３6KD处形成两条特征性条带,对ＲＡ诊断更具有特异性。在各项RA早期诊断指标中，抗RA33抗体特异性最高,在RＡ中的阳性率为3５。８％,尤其在RA早期出现。抗RA3３抗体的消长与病情及用药无关.ﻫ六．抗RANＡ（RheｕmaｔoidArtｈritiｓNucleaｒＡntｉgen）抗体ﻫ即抗增殖细胞核抗原抗体。因与RA关系密切,故取名为RA相关的核抗体。虽然该抗体主要存在于RA病人中,但并非ＲＡ的特异抗体.间接免疫荧光法测得其阳性率:ＲＡ4０％，非RA结缔组织病2０％，正常人5％。抗RANA抗体效价在RA病人中明显高于其他病人。因为RAＮA存在于EB病毒感染的B淋巴细胞样的细胞株内，故有人提出该抗体出现可能同ＥB病毒感染有关。ﻫ七。抗环瓜氨酸肽（CｙcｌiccitrullinａtedpeｐtideCCP)抗体

抗CCＰ抗体对ＲA的诊断敏感性为46．6％,特异性为96.６％。与APF、AＫA相关，CCP是fiｌagｇrin的一段肽链,但不完全重叠。抗CCP抗体与ＨLA－DR4相关，提示抗CCP抗体阳性RA病情重、骨破坏明显.抗CCP抗体可用ELISA法检测。

抗磷脂抗体

抗磷脂抗体(antiphosｐholｉpidａntibｏdｉeｓ，APL）临床上主要与抗磷脂综合征(antiｐｈｏspholipiｄsyndrome,ＡPS)密切相关。APS是APＬ引起的一组临床征象的总称，主要表现为反复动静脉血栓形成、习惯性流产、血小板减少、精神神经症状,伴有抗心磷脂抗体或狼疮抗凝物等持续阳性。ＡPS多见于成年人，也可见于儿童,因流产是本病的一个突出临床表现，因此女性发病明显，家庭中一个以上发病者少见，但其亲属中常有抗心磷脂抗体和狼疮抗凝物。APS目前病因未明,如伴发SLE或其它自身免疫性疾病则称继发性APS，如单独出现则称原发性APS.

APL是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体，包括抗心磷脂抗体（anｔicａrdｉｏlipｉｎａntibｏｄｙ，ACL）、狼疮抗凝物（ｌｕｐusanｔiｃｏagulａnt，LAC)、抗磷脂酰丝氨酸、抗磷脂酰胺醇、抗磷脂酰甘油、抗磷脂酸和抗β2–糖蛋白１（β2–GP1）等。这些抗体常见于抗磷脂综合征(APＳ）、ＳLE、神经系统疾病、急慢性白血病、肾脏和消化系统疾病中，与这些疾病的凝血系统改变、血栓形成、血小板减少等密切相关,并于疾病的发生机制有关联。目前临床上常规检测的抗磷脂抗体仅为抗心磷脂抗体和狼疮抗凝物.

一.抗心磷脂抗体(ACL)

AＣＬ是一组特性不同的非均一性抗体，目前多采用最敏感的EＬISA方法检测，由于它较其他ＡPL的阳性率高，易检测、重复性好，故它是AＰL中研究最多的.ﻫAPＬ主要有IgG、IgM、ＩgA3种类型,其中高水平的IｇG型对原发性抗磷脂综合征（APS）的诊断最为特异;ＡCL在SLE中的阳性率为２０％～５0%，主要是IgG和IgＭ型；血栓形成、习惯性流产和血小板减少主要与ＩｇＧ型的抗体相关；干燥综合征中ＩｇA型的抗体出现率高，IgA型抗体也与习惯性流产和重症格林—巴利综合征相关.ACＬ的水平越高,越易发生并发症.另外,在其他风湿性疾病、药物性狼疮、肿瘤和感染性疾病中都可出现ＡＣL,但很少发生上述并发症，存在这种差异的原因可能与抗体的类型、水平、亲和力、结合的特异性及环境遗传因素等有一定的关系。ﻫ二。狼疮抗凝物（LAC)ﻫＬAC因在ＳLE患者中发现而得名。ＬＡC是一种能延长凝血时间的抗体，它同凝血酶原复合物中的磷脂成分结合而抑制血凝.ＬAC可以是IｇG型或IｇM型或两者共存。LAC能与多种凝血因子反应，它不仅与异常出血有关，而且与血栓的形成有关。LＡC在SLE中的阳性率最高，但它不仅出现在SLE中，也可出现在其他疾病，如特发性血小板减少性紫癜、真性红细胞增多症、链球菌感染、恶性肿瘤、肝炎及服用吩噻嗪类药物的患者。检测LAC常用的方法有：白陶土凝固时间、Ｒuｓsellvipeｒvｅｎoｍ时间、活化部分凝血活酶时间（ａＰTT)、蛇毒时间等.

三。β２–糖蛋白1(β2–GP1）抗体

近年研究认为，无论是ACL还是LAＣ,与带负电荷的磷脂结合时,都需要一种辅助因子β2–GP１.β２–GP１是一种能结合脂蛋白、阴离子磷脂、血小板、肝素、ＤＮA、线粒体的载脂蛋白。磷脂与β2–GP1结合，使β2–GＰ1表面结构改变而出现被ＡＣL识别的表位，从而发生反应。有研究显示,AＣL似乎是直接针对含有β2–GＰ1的阴离子磷脂复合物,或是针对β2–GP1与磷脂结合中暴露的抗原决定族的，而与不含β2–ＧP1的磷脂无反应，因此，有人认为检测β2–GP1抗体可能比AＣＬ更有意义。ﻫ抗中性粒细胞胞浆抗体（AntｉneuｔｒoｐilcytoplasmicａntibodｉesANCＡ）ﻫ1９82年Davｉｅs等在8例节段性坏死性肾小球肾炎患者血清中首次发现了抗中性粒细胞胞浆抗体(ＡNＣA）。198５年VanderWouｄer等首先报告Wｅgner肉芽肿(WＧ）患者血清中存在ＡNＣA,并认为其对WG诊断具有特异性，且同疾病活动性密切相关.此后,ANCA引起学术界广泛注意,对这方面的研究迅速展开。

ＡNＣＡ代表一组抗中性粒细胞胞浆成分的抗体谱，其靶抗原成分包括：人类中性蛋白酶3（PR-3)、髓过氧化物酶（ＭPO）、杀菌／通透性增高蛋白（ＢPI)、丝氨酸蛋白酶、人白细胞弹性蛋白酶（HＬＥ）、乳铁蛋白(LF）、组织蛋白酶Ｇ（CG）、β葡萄糖醛酸酶、溶菌酶等.临床上常用的AＮＣＡ检测方法主要有间接免疫荧光法（IIF）和酶联免疫吸附法（ELＩSＡ）.IIＦ多用乙醇固定的中性粒细胞作底物，在荧光显微镜下根据荧光分布把AＮCＡ分为：(1)胞浆型ANCA（Ｃ－ANCA),其主要靶抗原成分为PR－3；（2)核周型ANCA（P—ANＣA），其靶抗原主要为MPＯ;（3)非典型ＡNＣＡ(Ａ－ANCA或X-ＡNCA），代表了前两者的混合物,其主要靶抗原还不清楚，由于此型ＡＮCA不易与Ｐ-ANCA区分，所以有许多实验室将其列入P—ANCA之列，作为P—ANCA的一个亚型。用福尔马林固定可引起假阳性,或人为引起着色变性，使本来P-AＮCA阳性者混于Ｃ-ＡNＣA阳性中.另外,此方法没有标准基线和峰值,缺乏定量指标，故IＩF使用受到限制。ELＩSＡ方法虽然可以较准确的定量，但纯化抗原繁琐，价格昂贵，更有一些抗原只在研究阶段,故此方法也有局限性。ＡNＣA的临床应用：ﻫ1。PR3—ANCAﻫＰR３为C—ANＣA的主要靶抗原,约占Ｃ-ＡNCA的８０%～９0%。PＲ3能降解许多细胞外基质蛋白，如弹性蛋白、血红蛋白、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白等多种组织成分,但不能降解间质的Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原。PR３的主要生理抑制因子为α1抗胰蛋白酶,α1抗胰蛋白酶通过与PR3不可逆结合形成复合物从肝脏清除，从而抑制PR3的水解活性.但ＰＲ3-ＡＮＣA与ＰR3结合可抑制PＲ3与α１抗胰蛋白酶形成复合物,ＰR3—ANCA与ＰR3复合物在炎症部位分解，PR3发挥水解作用,致血管内皮损伤。因此PR3在血管炎的发病中可能起重要作用。

ＰＲ3－ANＣA在临床上与WG密切相关。C－ＡNCA诊断WG的特异性大于90％，外加ＰR3－ANCA可超过95％。敏感性取决于疾病的活动性和病期阶段，在初发不活动的WＧ中,阳性率只有５0％,而活动性典型的WG,几乎10０％阳性.虽然C-AＮCA阳性在ＷG活动期有很高的价值，但仍然存在25％的假阳性机会。PR3－ANＣA在其他原发性血管炎中也可被检测到，如显微镜下多血管炎（MPA）、坏死性新月体型肾小球肾炎(NCＧＮ）、结节性多动脉炎（PAN)等.PＲ3-ANCＡ在临床上另一重要应用价值在于该抗体滴度与病情活动一致，在WG等原发性血管炎患者,常被作为判断疗效、估计复发的指标，从而指导临床治疗.ﻫ２．MPO－ANCAﻫMPＯ为Ｐ-ANCA的主要靶抗原，是细胞毒过程中产生毒性氧自由基的主要酶。体内、体外资料显示MPO-ANCA参与血管炎相关疾病的致病机理.

MPO-ANCA主要与MPA、NＣGＮ、Chｕrg-Ｓtrauss综合征相关。MＰＯ－ANＣA还可见于其它一些疾病,如PAＮ、抗肾小球基底膜疾病（抗GBM病)、WG、ＳLＥ、ＲA、药物性狼疮、Ｆｅｌty综合征等。MＰO－ＡNCＡ与原发性血管炎相关不及PR3—ＡNＣA与ＷG相关性那样紧密.但每一个怀疑血管炎或肾小球肾炎患者，只要原因不明，就应查AＮCＡ。ＭPO—ＡＮCA阳性强烈提示坏死性血管炎或特发性ＮＣGN。MＰO—ＡNCA大约在１0％~15％SＬE中存在,ＭＰO－ANCA阳性的SLE是否代表以血管炎为特征的独立病种有待进一步研究，但ＳLE中ANCA阳性可能与慢性炎症反应有关,如动脉炎、浆膜炎和C反应蛋白增高等。MPＯ—AＮCＡ还与RA的关节外损害及血管损害有相关性。MＰO-ＡNCA与病情活动相关，也可用于判断疗效、估计复发和指导治疗。

３.P-ＡNCA与炎症性肠病(IBＤ）

IBD患者血清中存在的ANＣA主要是P－AＮＣA和Ａ-ANＣA，其靶抗原目前尚不清楚。IBＤ包括慢性非特异性溃疡性结肠炎(UＣ)和克罗恩病(CD）两种疾病。研究发现，在UC病人血清中ANCA阳性率为60％~80％，而在CD病人中阳性率为10%～２0%。Ｐ—AＮＣA在UＣ中呈高特异性，在涉及到结肠病变的ＣD中分布较低,在ＵＣ中P－ＡＮCA对UC的敏感性为７0%,特异性为9０%,可用作UC和CD的鉴别诊断及UＣ的早期诊断。Ｐ—AＮCＡ的滴度并不与疾病的活动性、病变程度、疾病缓解期及治疗情况相关联。

自身免疫性肝病相关抗体

¬¬¬¬¬自身免疫性肝病分为自身免疫性肝炎(autoimmｕneｈｅpaｔｉtｉs,AIH）、原发性胆汁性肝硬化（primaｒybiliarｙｃiｒrhosiｓ，PＢC）、原发性硬化性胆管炎（primarysclerosｉnycholaｎgitis,ＰSC）三种疾病。在这三种累及肝胆疾患的自身免疫疾病中,自身抗体在发病机制中起重要作用。每种自身免疫性肝病都具有特征性自身抗体谱，自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断及鉴别具有重要意义。

一。自身免疫性肝炎(ａutｏimｍuｎehｅpatitｉｓ,AIH)的自身抗体特点

ＡＩＨ是一种病因不明的以肝脏坏死性炎症为特点的疾病。主要特征是（1）高免疫球蛋白血症;(2）组织自身抗体的出现;（3）免疫抑制剂治疗有效。AＩH的易感性与第六条染色体上的主要组织相容性抗原（ＭＨC)α类相关。90％以上的病人存在HLA－DＲ3或ＤR4抗原。AIＨ的预后与炎症活动的严重程度及病人的遗传倾向密切相关。炎症严重的病人,如不进行治疗，3年后病死率为50%，１0年病死率为90%，。HＬＡ－DＲ3抗原阳性者，病人发病早,炎症活动重，易进展为肝衰竭。经过治疗的AIH病人,其5~10年生存率大于90%。ﻫAIＨ目前共分三型,其自身抗体特点：ﻫ型与亚型主要确定特点其他特征

ﻫⅠ型(占AIH的80—85％)ＡＮA（+)SMＡ（+）抗肌动蛋白抗体(+）ﻫa亚型ANA（+)ＳMA（＋)LKM１（-）

b亚型抗肌动蛋白（+）ANＡ（—)抗LＫM1(-）ﻫc亚型SMA（+）AＮA（+）抗LＫM1（－）

Ⅱ型（占AＩH的5％)抗-LKＭ1（＋）ﻫa亚型抗-ＬKM1(+）(高滴度）年轻、女性,病情严重ﻫHＣV(－）,抗-LC1(+)

b亚型抗—LKＭ1（+)(低滴度）年老、男女均见,病情较轻,

HCＶ(+）,抗-LC１（－）ﻫⅢ型抗—ＳＬA（+)ﻫa亚型抗—SLＡ（＋)ＡNA/SＭA／抗—LKM1(－）ﻫb亚型抗－LP（+）AＮＡ／SＭＡ／抗－LＫM1（+）

ｃ亚型上述抗体全部阴性抗—ＡSGPR（＋)ﻫ¬¬¬¬¬¬SMA,抗平滑肌抗体；ＬKM1，肝肾微粒体1型;ＳLＡ，可溶性肝脏抗原；LP，肝胰抗原；LＣ1，肝脏细胞溶质抗原1型；抗—ASGP—R，抗—无唾液酸糖蛋白受体抗体；¬¬据《消化系疾病免疫学》，余保平、王伟岸主编,２000—８，科学出版社.

二．抗线粒体抗体（Anti—ｍitoｃｈｒonｄrialaｎtiｂodies，AMA）

AMA是当前诊断原发性胆汁性肝硬化（ｐrimａrybilliarｙcirrhosis，PBＣ）最重要的血清学指标.PBC是一原因未明的慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病,病理特点为肝内胆管非化脓性炎症，伴有胆管破坏、门脉周围炎症及肝实质碎屑状坏死,最终进展为肝硬化.近年研究认为它是典型的自身免疫性疾病。PBＣ男女发病比率约为1：10,年龄多在30岁至65岁之间，世界各地都有发病。ﻫPＢＣ常伴有高滴度的AMA，病程早期就出现ＡMA是本病的特点.AMA于1965年由W