人参皂苷CK对重症急性胰腺炎大鼠肝功能和免疫作用影响

PAGEPAGE8页面设置：上、下、左、右页边距均为2cm，A4纸字体页面设置：上、下、左、右页边距均为2cm，A4纸字体和行距：中文为宋体，英文为TimesNewRoman；除特别强调之处外均为小四号字，1.5倍行距题目：居中，四号字，加粗题目：居中，四号字，加粗作者：居中，五号字王庆华1商琼琼1张建民2作者：居中，五号字加粗加粗单位：与单位公章一致（可具体到科室），五号字1滨州医基金项目：山东省自然科学基金项目(ZR2016HM26)王庆华，E-mail：pingxing05@126.com学院护理学院加粗加粗单位：与单位公章一致（可具体到科室），五号字基金项目：山东省自然科学基金项目(ZR2016HM26)王庆华，E-mail：pingxing05@126.com2滨州医学院老年医学院抗衰老研究所题目：四号字，加粗，与中文题目保持一致，句首字母大写。加粗加粗300~500字为宜加粗加粗加粗【摘要】目的探讨人参皂苷CK对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肝功能和免疫作用的影响。方法将46只SAP大鼠随机分为实验组和对照组各23只，对照组采用常规肠内营养和治疗方案，实验组在常规治疗方案基础上采用人参皂苷CK，观察两组大鼠肝功能变化和对免疫功能的影响。结果两组SAP大鼠治疗3d、7d后分别检测血白细胞计数、肝功能（谷丙转氨酶、谷草转氨酶和谷氨酰转肽酶、白蛋白）和免疫功能T细胞亚群（CD3、CD4和CD8阳性细胞数及CD4/CD8比值）变化，实验组各项指标均优于对照组(P<0.05)。结论题目：四号字，加粗，与中文题目保持一致，句首字母大写。加粗加粗300~500字为宜加粗加粗加粗加粗加粗【关键词】人参皂苷CK；重症急性胰腺炎（SAP）；肝功能；免疫功能加粗加粗【中图分类号】R657.5【文献标志码】A【文章编号】作者：全部列出，照此格式。StudyofginsenosidecompoundKontheeffectofimmunityandliverfunctioninrats作者：全部列出，照此格式。WANGQinghua1SHANGQiongqiong1ZHANGJianmin2QUGuiwu2加粗1DepartmentofNursingHumanity,SchoolofNursing,BinzhouMedicalUniversity,加粗单位：照此格式填写，核对官方网站英文名称。2GeriatricInstituteofgeratological单位：照此格式填写，核对官方网站英文名称。加粗加粗加粗【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectoftheginsenosidecompoundK（CK）onthefunctionofliverandimmunityinratswithsevereacutepancreatitis(SAP).MethodsTwenty-threeratswithsevereacutepancreatitisweretreatedbyginsenosideCKastheexperimentalgroupand23ratsinthecontrolgroupreceivednormalSAPtreatment.Thechangesofliverfunctionindexes(AST,ALT,GGTandALB)andimmunityfunctionindexessuchasTcell(CD3,CD4,CD8cellandCD4/CD8)aftertheSAPratsreceivedtreatmentin3daysand7daysweredetermined.ResultsComparedwiththecontrolgroup,theplasmaliverfunctionindex(AST,ALT,GGT,ALBandSTB)levelsandtheimmunityTcellfunctionindex（CD3,CD4,CD8cellandCD4/CD8）levelswereincreasedin3daysand7daysandtherewassignificantdifference(P<0.05).ConclusionGinsenosideCKtherapycaneffectivelyprotectthefunctionoftheliverandimmunityinratswithsevereacutepancreatitis,andalsoimprovetheiroverallcondition．ItwasanimportantauxiliarytreatmentforSAPrats,andit’sworthyofdeepresearchinthefuture.加粗加粗加粗首字母不大写（专有名词除外）加粗【Keywords】GinsenosidecompoundK，severeacutepancreatitis，liverfunction，immunity首字母不大写（专有名词除外）加粗首字母不大写（专有名词除外）引用文献：照此，以方括号、上标表示加粗重症急性胰腺炎（severeacutepancreatitis，SAP）是由于各种原因导致胰酶被激活，胰腺释放内容物刺激机体产生大量细胞因子及炎性介质，引起持续的全身性炎症反应，导致机体组织和器官功能异常的复杂病理生理过程[1]。人参是我国传统名贵中药材，其化学成分复杂，药理活性独特，多用于久病初愈大补元气和滋补养生之用，素有“百草之王”的美称。2011年，国家卫生计生委员会批准，将人参列入新资源食品原料名单，人参实现“药食同源”[2]。人参皂苷CK(GinsenosidecompoundK)是天然二醇型人参皂苷(如人参皂苷Rb1、Rb2、Rc等)在人肠道细菌作用下的主要降解产物，是人参皂苷在体内吸收和发挥活性作用的主要形式，具有抗肿瘤、保肝、提高免疫力、抗炎等多种药理活性[3]。首字母不大写（专有名词除外）引用文献：照此，以方括号、上标表示加粗段落标题一般可分3级：1级标题（加粗）：1XXX段落标题一般可分3级：1级标题（加粗）：1XXX；2级标题：1.1XXX；3级标题：1.1.1XXX1.1材料2017年9月至12月，选择健康雄性SD大鼠54只，体质量(250士20)g，由山东大学医学院实验动物中心提供；牛磺胆酸钠(美国Sigma公司产品)；ELISA试剂盒(美国Endogen公司产品);肠内营养制剂为能全素(荷兰纽迪希亚公司产品)。造模前大鼠禁食12h，自由饮水。以1%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔内注射麻醉后背位固定于无菌手术台上，常规备皮消毒，经上腹正中切口进腹，暴露胰腺，用1mL注射器从胰尾部开始被膜下多点缓慢均匀注入3.8%牛磺胆酸钠1mL(当胰腺发生水肿渗出、局部出现暗红色时，证实制模成功)，轻轻把胰腺复位，分层缝合腹部切口。术后于大鼠背部皮下注射无菌生理盐水(2mL/100g)以补充丢失体液，术后大鼠自由饮水，6h后给予灌胃注入肠内营养液，10mL/次，3次/日，持续3~7d。造模大鼠死亡8只，造模成功大鼠46只作为实验对象，采用随机数字表法随机分为实验组和对照组，每组大鼠23只；两组实验大鼠的体重、造模方法、SAP病情严重程度、免疫状况和治疗方案等无明显差别，具有可比性（P>0.05）。1.2方法两组SAP大鼠在常规肠内营养支持和对症治疗基础上，实验组大鼠空腹灌胃给予人参皂苷CK注射液(每支2mL含人参皂苷CK5mg)，本课题组从人参同科植物三七中提取的总皂苷进行酶解，然后纯化得到人参皂苷CK注射液，每日3次，每次人参皂苷CK2mL，持续3~7d；对照组大鼠在常规肠内营养支持和对症治疗基础上，给予空腹灌胃生理盐水，每日3次，每次2mL，持续3~7d。
两组实验大鼠均给予常规抗炎、抑制胰液分泌、保护胃黏膜、保持水电和酸碱平衡等常规SAP治疗方案，加强病情监护，监测两组大鼠生命体征、脏器功能和免疫状况变化。这是2级标题。避免有号无标题1.3监测指标造模成功大鼠治疗前和治疗后3d、7d清晨空腹各处死大鼠10只，采取大鼠门静脉血，全自动生化检测仪（日本日立公司生产）检测血清白蛋白（ALB）、白细胞（WBC）、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶（AST）、谷氨酰转移酶（GGT）水平的变化。肝素抗凝，单克隆抗体标记T细胞淋巴亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)后经流式细胞仪（美国BD公司生产）进行免疫荧光检测，比较两组实验大鼠SAP治疗前和治疗后3d、7dCD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值的变化。这是2级标题。避免有号无标题1级标题加粗1.4统计学方法采用SPSS21.0软件包进行统计分析，计量资料采用(±s)，行t检验和方差分析，计数资料采用百分比和率，行χ2检验。P<0.05有统计学意义。1级标题加粗2结果空2格图表紧随文字描述段落之后，不能先表后文。2.1两组SAP实验大鼠治疗前后肝功能变化治疗后3d、7d，两组SAP大鼠的血清白细胞计数、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、谷氨酰转肽酶等血炎症指标和肝功能指标变化，两组数据比较具有统计学意义（P<0.05）（见表1）。空2格图表紧随文字描述段落之后，不能先表后文。表1两组SAP实验大鼠治疗前后肝功能变化(±s)检测指标实验组对照组WBC/（109/L）采用三线表，表内通常采用五号字，不小于六号。治疗前24.57±8.1324.92±8.69采用三线表，表内通常采用五号字，不小于六号。治疗3d18.26±6.35*21.16±7.29治疗7d13.42±4.57*15.76±6.47AST/（U/L）治疗前738.62±13.74735.59±13.89治疗3d528.49±9.56*657.21±11.54治疗7d204.37±7.39*327.69±8.93ALT/（U/L）治疗前775.36±11.34774.68±11.99治疗3d405.85±12.16*589.47±14.23治疗7d219.46±8.34*325.15±11.94GGT/（U/L）治疗前424.36±11.37420.86±11.91治疗3d215.67±5.77*279.43±10.25治疗7d109.15±3.35*165.68±7.04ALB/（g/L）治疗前42.68±4.3243.65±4.91治疗3d31.23±5.7631.49±5.87治疗7d39.86±6.32*34.95±7.94注：与对照组比较，*P<0.05。2.2两组SAP实验大鼠治疗前后免疫指标变化治疗后3d、7d两组SAP大鼠血液中CD3、CD4和CD8阳性细胞数及CD4/CD8比值逐渐恢复正常水平，且高于对照组(P<0.05)（见表2）。表2两组SAP实验大鼠治疗前后免疫指标变化(±s)检测指标实验组对照组CD3+治疗前55.63±7.4155.17±7.66治疗3d63.74±5.57*58.82±5.48治疗7d69.38±6.82*62.25±7.21CD4+治疗前37.71±7.6237.67±7.39治疗3d44.65±8.69*40.96±8.75治疗7d49.43±4.78*44.21±5.26CD8+治疗前22.56±6.2522.72±6.79治疗3d28.57±5.78*25.32±5.41治疗7d34.72±4.84*29.81±5.25CD4+/CD8+治疗前1.13±0.691.16±0.71治疗3d1.59±0.611.55±0.58治疗7d1.94±0.53*1.62±0.79注：与对照组比较，*P<0.05。3讨论重症急性胰腺炎(SAP)大鼠病情重、死亡率高，病情复杂多变，极易出现脏器功能不全；SAP造成单一脏器损伤中，以肝损伤最多见，肝脏损伤的主要表现为肝细胞坏死，肝酶进入血液中，造成转氨酶（AST，ALT和GGT）水平升高[4]。SAP急性期复杂的病理生理过程造成机体内环境失衡，免疫功能低下，引发全身炎症反应综合征、多器官功能障碍甚至多器官脏器衰竭等系列病理变化[5]。人参皂苷(ginsenoside)是人参主要的有效成分之一,按其苷元的化学结构不同,可分为人参二醇型皂苷、人参三醇型皂苷、齐墩果酸型皂苷;人参皂苷CK在天然人参中并不存在，据文献报道，人参皂苷CK是由人参皂苷Rb1转化而来，转化过程是肠道细菌作用的结果[6]。人参皂苷CK是人参皂苷活性作用的实体，具有良好的水溶性，其抗肿瘤、抗炎和增强免疫活性是所有人参皂苷中最强[7]，人参皂苷CK对SAP治疗作用机制值得深入研究。3.1人参皂苷CK对SAP大鼠具有抗炎作用和保护肝脏功能表1显示，治疗后3d、7d，两组SAP大鼠的血清白细胞计数、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、谷氨酰转肽酶等血炎症指标和肝功能指标变化，两组数据比较具有统计学意义（P<0.05）。研究显示，约有80.15％的急性胰腺炎合并肝功能损伤[8]，肝脏微循环变化参与肝组织损伤和肝功能障碍的发生发展过程，肝细胞损伤后大量肝细胞酶入血，导致血清AST,ALT和GGT等酶水平升高。SAP大鼠体内含大量内毒素的静脉血会引起血白细胞浓度升高和肝损伤，肝损伤程度与胰腺炎病情的严重程度呈正相关[9]。SAP时异常激活胰酶，除造成胰腺本身损伤外，同时激活机体炎症细胞释放炎性介质、细胞因子等，导致机体内系列炎症免疫反应发生，引起脏器功能障碍和全身炎症反应综合征。人参皂苷CK通过抑制促炎因子IL-1β、TNF-a和IL-6的表达，促进抗炎因子IL-10活性达到抗炎目的。通过抗氧化、抗炎和抑制细胞色素P450等作用保护肝细胞和调节肝功能。实验组通过调节细胞氧化还原环境、减少细胞氧化损伤而改善SAP大鼠肝脏功能，说明人参皂苷CK在SAP实验大鼠中具有较好的抗炎作用和护肝效果。3.2人参皂苷CK能提高SAP大鼠细胞免疫功能表2显示，治疗后3d、7d两组SAP大鼠血液中CD3、CD4和CD8阳性细胞数及CD4/CD8比值逐渐恢复正常水平,且高于对照组(P<0.05)。近年研究表明，SAP发生时，胰腺组织的损伤过程中一系列炎性介质,如氧自由基、血小板活化因子、前列腺素、白三烯等起到重要的介导作用，炎性介质和血管活性物质如一氧化氮、血栓素等能导致胰腺血液循环障碍，最终导致SAP的发生和发展。从SAP的发病机制看，阻止免疫细胞的过度激活及炎性因子的过度表达或促进抗炎因子的产生，以减少全身性反应和器官衰竭[10]，抑制病情恶化的免疫调节治疗，人参皂苷CK将在SAP的治疗中扮演着非常重要的角色。CD3、CD4和CD8阳性细胞，作为淋巴细胞亚群中的代表，是机体调控细胞免疫系统重要的枢纽细胞，其数量能够反应人体细胞免疫功能的状态[11]。研究表明人参皂苷CK可改善或调节机体免疫功能状态,可用于或辅助用于免疫功能紊乱疾病[12]。虽然目前有关人参皂苷CK免疫调节作用的基础研究已做过一些工作,但离体实验研究较多,在体研究相对较少,今后将对其作用机制作深入探讨,如人参皂苷CK是否能影响机体内参与免疫的细胞分泌其他细胞因子,人参皂苷CK通过何种信号转导途径发挥作用以及效果等[13]。人参中化学成分复杂，含有20多种单体，与其他人参皂苷单体比较，人参皂苷CK的增强免疫活性是最强的，且由于其具有较好的水溶性，可以直接制成注射剂发挥作用，因此得到研究者越来越多关注[14]。人参皂苷CK是否适合重症急性胰腺炎（SAP）辅助治疗，治疗效果和作用机制值得进一步深入研究，同时也为SAP治疗手段选择提供崭新的研究方向。

参考文献：5号字；参考文献：5号字；一般要求10~20条；以近5年文献为主，尤其是近2年的文献。[1]中华医学会消化病学分会胰腺疾病学组．中国急性胰腺炎诊治指南[J].中国实用内科杂志，2013,33(7)：530-534.[2]杨元超,王英平,闫梅霞,等.人参皂苷compoundK转化菌株的筛选[J].中国中药杂志,2011,36(12):1596-1598.仅列出前3位作者，其他人加“等”仅列出前3位作者，其他人加“等”。请登录中国知网或者万方逐一核对包括年、卷、期和起、止页码在内的各项信息。[4]JohEH,LeeIA,JungIH,etal.GinsenosideRb1anditsmetabolitecompoundKinhibitIRAK-1activation-Thekeystepofinflammation[J].Biochempharmacol,2011,82（8）:278-286.英文文献请登录PubM网站（），逐一核对包括年、卷、期和起、止页码在内的各项信息。英文作者大写，姓前名后，名缩写，缩写间不留空，缩写后不加点。（参考文献与正文要求不同）[5]英文文献请登录PubM网站（），逐一核对包括年、卷、期和起、止页码在内的各项信息。英文作者大写，姓前名后，名缩写，缩写间不留空，缩写后不加点。（参考文献与正文要求不同）[6]ParkJS,ShinJA,JungJS,etal.Anti-inflammatorymechanismofcompoundkinactivatedmicrogliaanditsneuroprotectiveeffectonexperimentalstrokeinmice